高效液相色譜法單波長(zhǎng)切換測(cè)定復(fù)方氯霉素醇溶液中水楊酸、氯霉素的含量

王 敏，張瑞麟，王逢春，李 勝

復(fù)方氯霉素醇溶液是一種外用復(fù)方制劑，收載于2002年版的《中國(guó)人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范，》(以下簡(jiǎn)稱《規(guī)范》)［1］，由水楊酸、氯霉素和75%乙醇配制而成，用于治療脂溢性皮炎、皮疹、瘙癢等。《規(guī)范》中采用中和滴定法和高效液相色譜法分別測(cè)定溶液中水楊酸和氯霉素的含量，但在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)測(cè)定所需時(shí)間較長(zhǎng)，造成生產(chǎn)效率較低。目前，陸續(xù)有研究者報(bào)道采用高效液相色譜法測(cè)定氯霉素醇中水楊酸和氯霉素的含量，但方法有一定的局限性，無(wú)法用于配備單波長(zhǎng)的紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀［2-8］。本文采用單波長(zhǎng)切換的高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方氯霉素醇溶液中水楊酸和氯霉素的含量，較已報(bào)道的方法更加簡(jiǎn)便、快捷，準(zhǔn)確度高，能更有效地控制復(fù)方氯霉素醇溶液的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200 型高效液相色譜儀(包括四元泵、VWD 檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、ChemStation 化學(xué)工作站);Mettler AE240 電子天平(梅特勒公司)。

1.2 試藥 水楊酸對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):100106-200303);氯霉素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):130555-200602);復(fù)方氯霉素醇溶液(北京軍區(qū)總醫(yī)院263 臨床部提供，批號(hào):20120326、20120617、20121029)。甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－水(55∶45);流速:1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):303 nm(0～4 min)，278 nm(4～7 min);柱溫:30℃，進(jìn)樣量:10 μl;檢測(cè)時(shí)間:7 min。

2.2 混合對(duì)照品溶液制備 精密稱取氯霉素和水楊酸對(duì)照品各100 mg，置于100 ml 量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，作為混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液制備 精密量取復(fù)方氯霉素醇溶液供試品1 ml，置于200 ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，0.22 μm 濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。精密吸取10 μl 注入液相色譜儀，測(cè)定，即得液相色譜圖(圖1)。

圖1 復(fù)方氯霉素醇溶液高效液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml，置于10 ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得不同濃度的系列對(duì)照品溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。分別以水楊酸及氯霉素的濃度(g/ml)為橫坐標(biāo)(X)，以其各自的峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為水楊酸:Y=20.22X +0.1769(r=0.9999，n=6);氯霉素:Y=24.97X +0.2418(r=0.9999，n=6)。結(jié)果表明，水楊酸和氯霉素在10.00～200.0 g/ml 范圍內(nèi)與其各自的峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取100.0 g/ml 混合對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定峰面積。結(jié)果水楊酸峰面積RSD 為0.74%(n=6)，氯霉素峰面積RSD 為0.54%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液(批號(hào):20120326)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在0、2、4、8、12、24 h 各進(jìn)樣1 次，測(cè)定峰面積。結(jié)果水楊酸峰面積的RSD 為0.53% (n=6)，氯霉素峰面積的RSD 為0.82%(n=6)，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為20120326 的樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果水楊酸的平均含量為2.02%，RSD 為0.78%(n=6)，氯霉素的平均含量為1.97%，RSD 為0.98%(n=6)，表明方法的重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密量取水楊酸和氯霉素對(duì)照品，按復(fù)方氯霉素醇溶液處方配成80、100、120 g/ml 3 個(gè)濃度水平的樣品溶液，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算氯霉素和水楊酸的含量回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 復(fù)方氯霉素醇溶液加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9 樣品含量測(cè)定 取批號(hào)為20120326、20120617、20121029 的3份樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果樣品中水楊酸的含量分別為2.02%、2.04%、2.07%，氯霉素的含量分別為1.97%、2.01%、2.06%。

3 討論

目前，高效液相色譜法已廣泛應(yīng)用于各種制劑的含量檢測(cè)，保證了制劑在臨床使用中的安全性和有效性［9-13］。本文采用高效液相色譜法單波長(zhǎng)切換測(cè)定復(fù)方氯霉素醇溶液中水楊酸和氯霉素的含量，方法簡(jiǎn)單快捷、準(zhǔn)確度高。

《規(guī)范》中原有的復(fù)方氯霉素醇溶液中水楊酸的含量測(cè)定采用了滴定法，氯霉素的含量測(cè)定采用了高效液相色譜法，測(cè)定氯霉素的含量通常需要約30 min，而本實(shí)驗(yàn)條件的檢測(cè)時(shí)間僅為7 min，縮短了樣品檢測(cè)時(shí)間，可以同時(shí)完成水楊酸和氯霉素的含量測(cè)定。而且，色譜峰型和理論塔板數(shù)均較理想，能夠達(dá)到復(fù)方氯霉素醇溶液質(zhì)量控制的要求。

水楊酸和氯霉素的最大吸收波長(zhǎng)分別為303 nm 和278 nm［14］，通常無(wú)法在配備紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀上同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定。紫外檢測(cè)器一般只能在某一固定波長(zhǎng)下測(cè)定單一組分的含量，對(duì)于多成分的同時(shí)測(cè)定往往無(wú)法實(shí)現(xiàn)［15］。如果使用多波長(zhǎng)檢測(cè)器，對(duì)儀器的要求較高，且方法準(zhǔn)確度相對(duì)較低。本試驗(yàn)通過(guò)采用單波長(zhǎng)切換的方法，使用紫外檢測(cè)器分別在水楊酸和氯霉素的最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定其含量，具有較高的靈敏度，對(duì)儀器的要求較低，具有較高的應(yīng)用推廣價(jià)值。

［1］中國(guó)人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部.中國(guó)人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范(2002年版)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2003:100-101.

［2］郭勝才，谷娜，李華.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方氯霉素醇溶液中水楊酸與氯霉素含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29(6):783-785.

［3］谷娜，邢旺興，郭勝才.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方氯霉素醇溶液中氯霉素和水楊酸的含量［J］.健康研究，2009，29(3):177-178.

［4］黃力，楊寧，劉海英，等.HPLC 法測(cè)定復(fù)方氯霉素醇溶液中氯霉素的含量［J］.中國(guó)藥事，2009，23(4):373-375.

［5］劉晉華，李玉萍，尤光甫.復(fù)方氯霉素醇溶液含量測(cè)定方法的改進(jìn)［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23(3):228-230.

［6］魏立平.HPLC 法同時(shí)測(cè)定復(fù)方氯霉素醇溶液中氯霉素和水楊酸含量［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23(5):378-380.

［7］張燕，孫嵐.高效液相色譜法測(cè)定氯霉素醇溶液含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27(8):986-987.

［8］劉海英，楊寧，黃力，等.高效液相色譜法測(cè)定氯霉素醇溶液中氯霉素的含量［J］.藥學(xué)實(shí)踐雜志，2008，26(4):289-290，293.

［9］楊瑩，郭琪，郭麗紅，等.高效液相色譜法測(cè)定開(kāi)光復(fù)明丸中梔子苷的含量［J］.解放軍醫(yī)藥雜志，2011，23(4):23-24.

［10］郝影霞，王逢春，王焱.高效液相色譜法測(cè)定活血清腦丸中阿魏酸的含量［J］.解放軍醫(yī)藥雜志，2012，24(7):29-31.

［11］苗愛(ài)東，李曉翠，何秀言，等.高效液相色譜法測(cè)定替硝唑片中替硝唑含量的不確定度分析［J］.解放軍醫(yī)藥雜志，2012，24(1):33-35.

［12］羅飛，賀美波，羅巧林.高效液相色譜法測(cè)定甲硝唑氯霉素栓中兩種成分的含量［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9(16):124-125.

［13］周勁康，吳躍麗.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方參芷痤瘡酊中甲硝唑和氯霉素含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2010，19(16):30-31.

［14］陳曉寶，陶建亮.復(fù)方氯霉素醇溶液中氯霉素和水楊酸的含量測(cè)定［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2005，22(3):871-872.

［15］繆春輝，冷愛(ài)國(guó)，涂飛龍.復(fù)方氯霉素醇溶液中3 種成分的含量測(cè)定［J］.東南國(guó)防醫(yī)藥，2003，5(2):102-103.