不同HBV-DNA載量慢性乙肝患者血清MIF和IL-17的表達意義

鄒同

我國是乙肝病毒感染的高發區，約8% ～20%的患者一旦診斷慢性乙型肝炎病毒感染，經過5年即進展為肝硬化，而失代償期肝硬化患者預后極差，僅有14% ～35%的5年生存率［1］，因此對于慢性乙肝的治療非常重要，但是目前多局限在抗病毒的治療，對于病毒引起的肝臟免疫反應，從而導致肝硬化等方面的治療進展有限，發現乙肝病毒的免疫反應指導臨床治療尤其重要。巨噬細胞移動抑制因子(MIF)是一種獨特的促腫瘤發生發展的細胞因子已有許多研究，但是其作為炎癥介質可以參與機體炎癥及免疫反應［2］，而在慢性乙肝的免疫反應有何作用，鮮有報道。白細胞介素-17(IL-17)在自身免疫性肝病、脂肪肝、及肝臟腫瘤中發揮重要作用，參與了肝臟損傷及再生過程［3］，而是否其也參與到乙肝病毒引起的免疫反應中?本研究探討慢性乙肝患者不同HBV-DNA載量血清MIF和IL-17的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年10月至2012年12月本院的慢性乙型肝炎患者，慢性乙肝的診斷依據2010年中華醫學會肝病學分會、中華醫學會感染病學分會制定指南診斷標準［4］，共106例，其中男61例，女45例，年齡17～63 歲，平均年齡(36.1±8.7)歲。根據HBV DNA載量(copies/ml)將慢性乙肝患者分為三組:高載量組(＞107 copies/ml)29例，其中男16例，女13例，年齡17～61歲，平均年齡(35.9±7.2)歲;中載量組(106～107 copies/ml)46例，其中男26例，女20例，年齡19～63歲，平均年齡(36.3±9.2)歲;低載量組(＞105 copies/ml)37例，其中男21例，女16例，年齡19～63歲，平均年齡(35.8±7.8)歲。三組患者性別、年齡、病情等無明顯差異(P＞0.05)，具有可比性。所有患者近3個月未用過抗病毒藥物及糖皮質激素等影響免疫功能的藥物，排除其他HAV、HCV、HDV、HEV或HIV的合并感染及肝硬化、肝癌等失代償肝病患者。

1.2 hBV-DNA，MIF和IL-17的測定 空腹采靜脈血5 mL，置于室溫放置2 h或4℃過夜，于1000 r/min離心20 min，于-20℃冰箱將標本放置保存待測，但應避免反復凍融，采用聚合酶鏈反應法檢測血清HBV DNA，檢驗靈敏度為1000拷貝/ml，使用Roche LightCycler檢測儀，所用試劑為深圳匹基公司生產。采用生物素一親合素雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗法(ABC-ELISA)測定血清MIF和IL-17的濃度，試劑盒均由美國Biotich-nology Systems公司提供。

1.3 統計學方法 采用SPSS 17.0統計軟件進行數據處理。計數資料用χ2檢驗，計量資料采用均數±標準差(±s)表示，獨立樣本t檢驗，采用非參數檢驗中的Wilcoxon秩和檢驗不符合正態分布的數據，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

三組患者血清MIF和IL-17的比較:經比較，高載量組和中載量組患者血清MIF和IL-17明顯高于低載量組(P＜0.01)，高載量組MIF和IL-17均明顯高于中載量組(P＜0.05，P ＜0.01)，見表1。

表1 三組患者血清MIF和IL-17的比較(±s)

表1 三組患者血清MIF和IL-17的比較(±s)

注:與高載量組比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01;中載量組與低載量組比較#P＜0.05，##P＜0.01

3 討論

乙肝病毒在肝內持續復制可導致在肝內大量的淋巴細胞浸潤，大量細胞因子及炎性遞質釋放，機體自我保護在清除病毒的同時使肝細胞變性、壞死，如果此種病變持續反復發展，纖維隔、再生結節可在肝小葉內形成，從而導致肝硬化，發生不可逆變化，臨床治療相當困難。目前診斷乙型肝炎最常用的方法:乙型肝炎患者體內病毒水平的變化采用聚合酶鏈反應法檢測HBV-DNA含量能更直接和特異地反映。在臨床常規抗病毒治療時，如果抗病毒藥物治療有效，常用標準為HBV-DNA水平降低或低于檢測限，但機體對乙肝病毒免疫狀況的恢復并不一定能反映，特別是HBV-DNA降低出現在應用核苷類似物時，此時更多的可能是由于病毒被暫時抑制［5］。并且已有研究HBV病毒本身并不直接導致肝細胞的損傷，導致肝組織損傷的主要病理生理機制是其引發的機體細胞免疫。

在HBV感染后多種疾病狀況的發生、發展中Th細胞亞群和細胞因子網絡失衡扮演了重要的角色。以往研究多集中在TH1/Th2的平衡方面，對在HBV感染和慢性乙肝疾病的病理進程中，新發現的Thl7細胞亞群僅有少量的文獻報道，對于其所致的肝臟炎性損傷中發揮的作用更是鮮有報道。Thl7細胞在慢性乙肝肝細胞內優先釋放增加，Thl7細胞可能參與慢性HBV感染的免疫學誘導，同時這可以激活單核細胞和mDCs釋放炎癥細胞因子發生炎癥反應。IL-17是Thl7細胞分泌的重要細胞因子之一。具有促炎癥作用，可誘導基質金屬蛋白酶、趨化因子、和促炎細胞因子(如IL-6、TNF)的表達，參與中性粒細胞的增殖、成熟和趨化，引起組織細胞浸潤和破壞，對T細胞的活化亦起協同刺激作用。在動物實驗中發現［6］，IL-l7可以間接通過激活巨噬細胞產生的炎癥因子激活肝星狀細胞(HSC)，HSC是肝臟產生細胞外基質(ECM)的主要細胞，其活化、增殖是肝纖維化發生的中心環節，也可以直接激活HSC產生ECM在小鼠肝纖維化過程中起到了重要的作用。Wang等［7］研究表明，血清IL-17隨著乙型肝炎病程的進展其表達也增強。但對于和乙肝病毒的關系卻沒有報道。

MIF是巨噬細胞和淋巴細胞的一個細胞因子，巨噬細胞的移動可以被其抑制，MIF在炎癥過程中發揮重要作用，作為一種前炎癥因子，MIF抑制巨噬細胞游走，在炎癥局部促進巨噬細胞的浸潤、增生、激活及分泌一些細胞因子。近年的研究認為，MIF作為一種重要的前炎癥因子，參與病毒性心肌炎、潰瘍性結腸炎、急性胰腺炎、腎炎多種炎癥性疾病的發病過程［8］。Shi和 Mitchell等［9，10］在研究中發現 MIF 促進持續的細胞外調節蛋白激酶(ERK)活化作用而在機體炎癥反應中發揮作用，其主要通過激活促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成員和CD74來實現。由于其開始主要在腫瘤發展中發現，因此研究MIF可通過抑制P53基因引起的凋亡，促進腫瘤的發生和生長，長期慢性炎癥，如肝炎、胃炎等容易發生癌變也可以通過其對P53功能的抑制表現出來［11］，在肝纖維化的過程中，MIF可以誘導巨噬細胞分泌IL-8，IL-8可通過趨化炎癥細胞，刺激釋放大量的肌酸激酶而間接激活HSC，影響肝纖維化的病理過程。

本研究顯示，高載量組和中載量組患者血清MIF和IL-17明顯高于低載量組(P＜0.01)，高載量組MIF和IL-17均明顯高于中載量組(P＜0.05，P＜0.01)。綜上所述，本研究結果表明在慢性乙型重型肝炎發病過程中MIF和IL-17可能起重要作用，檢測血清MIF和IL-17水平可作為評估慢性乙型重型肝炎病情嚴重程度的重要指標，并有望成為治療的新靶點。

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