羅紅霉素原位膠化滴眼液的制備及質量控制

張 偉 秦玉花 趙紅衛 董根山 孟憲麗 張丹丹 李金偉 曹 瑋

1.河南省人民醫院，河南鄭州 450003；2.河南中醫學院，河南鄭州 450003

羅紅霉素是第二代大環內酯類抗生素，體內的抗菌活性比紅霉素要強1～4 倍[1]，其作用機制為大環內酯刺激帶著肽鏈的tRNA，使其在肽鏈伸長過程中從核蛋白體解離，從而抑制細菌蛋白質的合成。主要作用于革蘭陽性菌、厭氧菌、衣原體和支原體等常見致病菌[2]。淋球菌和嗜肺軍團菌對羅紅霉素的MIC90均約0.25mg/L，對類桿菌屬的MIC90為24 mg/L，對梭菌屬的MIC90為3.3 mg/L，肺炎衣原體MIC90為0.25mg/L，肺炎支原體MIC90為0.03 mg/L，溶脲脲原體MIC90為1 mg/L[3]。對于由衣原體、支原體、軍團菌等病原體所引發的呼吸道感染、咽炎、喉炎及皮膚軟組織感染等作為首選藥物，在臨床上有著廣泛的應用[4]。眼部藥物傳遞系統作為控制釋放領域的重要分支，一直受到人們的關注，眼部的有效保護機制與高密度的敏感性促使人們開發安全合理的給藥系統[5]。為延長藥物在眼內的生物利用度及作用持續時間，筆者選用羅紅霉素為模型藥物，通過實驗將其制備成原位膠化滴眼劑。給藥后藥液與淚液中的Ca2+等陽離子接觸迅速轉型為凝膠，能有效延長藥物停留時間，增加療效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV2102C 型分光光度計（尤尼柯儀器有限公司（UNICO），81-2 型磁力攪拌器（上海司樂儀器有限公司），pHS-3數字式酸度計（金壇市國旺實驗儀器廠）。

1.2 試藥

羅紅霉素（湖北興銀河化工有限公司，批號：091102），羅紅霉素對照品（河南省藥檢所提供，批號120221-200901，含量97.8%），海藻酸鈉（佳麥化工有限公司，批號100311）；硼酸（湖南華日制藥有限公司，批號100117），其余輔料為藥用規格，試劑為分析純。水選用注射用水。

2 方法與結果

2.1 處方與制備

2.1.1 處方 羅紅霉素1 g；海藻酸鈉10 g；硼酸18 g；土溫-80 20 g；尼泊金乙酯0.1 g；注射用水加至1 000 mL。

2.1.2 制備 取處方量海藻酸鈉加水至100 mL，加熱、攪拌使其溶解，靜置備用；精密稱取羅紅霉素1 g、硼酸18 g 用適量吐溫-80 研磨均勻，加入尼泊金乙酯0.1 g 緩慢攪拌加入熱注射用水使溶解。在迅速攪拌下將羅紅霉素溶液緩緩加入海藻酸鈉溶液中，用濃度為0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液將pH 調節至5.0～7.0，攪拌至均勻，抽濾，經濾器加注射用水至1 000 mL，100℃流通蒸汽滅菌30 min，無菌分裝，即得羅紅霉素原位膠化滴眼液。

2.2 性狀

羅紅霉素原位膠化滴眼液為無色澄明液體，其他均符合《中國藥典》2010年版有關滴眼液項下之規定。

2.3 鑒別

2.3.1 性狀鑒別 取本品加入適量濃硫酸5 滴，緩緩搖勻，1 min 內溶液顏色呈深墨綠色。

2.3.2 光譜鑒別 精密量取羅紅霉素原位膠化滴眼液適量，用濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液使之溶解，然后加入50 mL硫酸，再用濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液稀釋為35μg/mL。在（482±1）nm 波長處有最大吸收。

2.4 含量測定

2.4.1 溶液配制 精密量取羅紅霉素原位膠化滴眼液及羅紅霉素對照品適量，分別置100 mL 容量瓶中，加入濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液使之溶解，然后加入50 mL 硫酸，用濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液定容，放置約50 min，備用。

2.4.2 波長的選擇[6]以濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液作為空白溶液，前平行測定作為空白。于200～520 nm 波長范圍掃描記錄紫外吸收光譜，結果表明羅紅霉素于482 nm 波長處有最大吸收，并且在此波長處輔料無吸收，因此確定測定波長為482 nm。

2.4.3 標準曲線的繪制 精密稱取干燥至恒重的羅紅霉素對照品15mg 于100 mL 容量瓶中，加入濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液使之溶解﹑定容，再精密量取續濾液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL分別置于10 mL 容量瓶中，加入5mL 硫酸再用0.1 mol/L 鹽酸定容，放置約50 min，各取適量溶液于482 nm 波長處測定，以濃度（C）對吸收度（A）作圖，繪制標準曲線。得回歸方程為C=45.288A-0.667 6（r=0.999 6），結果顯示：羅紅霉素在15～60 μg/mL 范圍內其線性關系良好。

2.4.4 精密度試驗 取同一份所制樣品溶液，測定吸收度，連續測定5次。結果RSD=0.65%。

2.4.5 穩定性試驗 所包裝完好的制樣品于室溫放置6個月后，觀察其性狀、色澤和含量等指標均符合《中國藥典》2010年版滴眼劑項下各項規定。

2.4.6 回收率試驗 按處方比例精密稱取主藥和輔藥，定量配制高、中、低3 種濃度，每種濃度各取樣3次照含量測定項下的方法測定含量，計算回收率，結果見表1。

表1 回收率實驗結果（n=3）

2.4.7 重現性試驗 精密量取同一批樣品，按“2.4.3”項下方法連續測定5次，分別記錄峰面積，結果顯示含量平均值為 96.94%，RSD=1.88%（n=5）。

2.4.8 樣品的含量測定 精密量取所制樣品4.0 mL 置于100 mL 容量瓶中，用濃度為0.1 mol/L 鹽酸溶液溶解﹑搖勻，加5mL 硫酸，再用濃度為0.1 mol/L 鹽酸溶液定容，取續濾液放置約30 min，照分光光度法在波長（482±10）nm 處分別測定吸收度，同時以0.1 mol/L 鹽酸溶液同法處理作為空白，分別按二者吸收度的比值計算羅紅霉素含量，經測定批號為110216，110422，110919 三批樣品，含量分別為標示量的96.85%，98.24%，98.77%。

2.5 刺激性實驗

取健康成年家兔[河南省人民醫院動物實驗中心，SCXK（豫）-2011-0023]5只，體重為（2.5±0.5）kg，每只兔右眼結膜囊內滴入本品1～2 滴，左眼滴入0.9%氯化鈉作為對照，分別于30、45min 和1、24 h 時觀察兔眼角膜有無充血、紅腫、渾濁等現象，結果雙眼無明顯變化，家兔無明顯躁動。結果表明本品無刺激性，用藥安全。

3 討論

普通滴眼劑給藥后，在異物的刺激下，眼瞼不由自主的快速眨動同時大量的分泌淚液，導致滴眼劑因淚水的沖洗、眼瞼的眨動而迅速被清除，普通滴眼劑的生物利用度一般都低于1%[7]。眼部原位膠化給藥系統能有效避免上述缺點，按照其形成凝膠的原理可分為溫度敏感型凝膠、pH敏感型凝膠和離子敏感型凝膠[8]。在滴入眼睛后，受到溫度、pH 和離子強度的影響，立即轉型為凝膠，通過眼瞼的眨動迅速在眼球表面形成一層均勻的保護膜，不易被淚水沖走，既能避免突發釋放藥物和流入鼻淚管而引起不適，又能在相當長的時間內緩慢釋放藥物，提供平穩有效的藥物濃度[9]。從而達到了緩釋效果，且無眼膏劑的油膩感和不易涂布均勻，使用不便等缺點，增加了患者用藥的依從性，保證了治療效果，使該藥更有效、更安全地用于臨床，因此值得推廣應用。

本品屬于離子敏感型凝膠，海藻酸鈉是一種親水性多聚糖，通過與人體淚液中所含有的Na+、K+、Ca2+等陽離子的絡合，引發構象改變，在眼中可以使滴眼劑由溶液型迅速轉化為凝膠型，能顯著增加藥物在眼睛里的停留時間，增加療效。滴眼液本身是溶液型便于臨床給藥和分劑量，實驗表明海藻酸鈉是一種良好的藥物載體，所形成的凝膠的強度依賴于海藻酸鈉的濃度和β-D 甘露糖酸所占的比例[10]。

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