用高效液相色譜法鑒別小葉菝葜

黃慧蓮 劉麗莎 劉榮華 邵 峰 任 剛 舒積成 林 濤

(江西中醫(yī)學院現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室，南昌，330004)

小葉菝葜為菝葜屬植物小葉菝葜Smilax microphylla C.H.Wright的根莖，其味甘、苦，性平，臨床上普遍用于治療痛風性關節(jié)炎、支氣管炎、肺結核咳嗽等疾患。現(xiàn)代藥理研究表明，口服小葉菝葜提取物可以明顯促進高尿酸血癥模型大鼠的尿酸排泄，降低血液中的尿酸水平［1－2］。我們在本試驗對4種小葉菝葜進行考察，通過對高效液相色譜圖進行分析比較，可為其鑒別研究提供一定的參考。

1 儀器與試藥

Agilent Technologies 1200 Series高效液相色譜儀(G1322A在線脫氣、G1311A四元泵、G1316A TCC、G1314B VWD)(美國Agilent公司);實驗用小葉菝葜(樣品編號為1～4)分別采自湖南省永順縣、桑植縣、保靖縣及古丈縣，經江西中醫(yī)學院賴學文副教授鑒定為小葉菝葜。

2 方法與結果［3－5］

2.1 色譜條件

色譜柱:Thermon C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相為乙腈 －0.2%磷酸水梯度洗脫，分析時間82min，濃度梯度為0～15min(5% ～15%)，15～55min(15% ～25%)，55～82min(25% ～60%);流速為1.0mL·min－1;檢測波長為330nm;柱溫為35℃;進樣量為10μL。

2.2 供試品溶液

分別取各藥材適量，粉碎，過3號篩，精密稱取3.0g，置25mL具塞錐形瓶中，加入10mL甲醇，密塞，稱重，超聲(工作頻率80kHz)提取60min，放置冷卻，補足重量，用0.22μm微孔濾膜過濾，即得。

2.3 測定方法

精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄82min的色譜圖。

2.4 方法學考察

2.4.1 空白試驗 精密吸取空白溶液10μL，注入高效液相色譜儀，按“2.1”項下規(guī)定的梯度條件洗脫，結果表明空白不干擾測定。

2.4.2 精密度考察 取樣品編號為2的小葉菝葜1份，制備供試品溶液，重復進樣6次，記錄色圖譜，考察各共有峰的相對保留時間以及相對峰面積比值的一致性，結果顯示，共有峰的相對保留時間的RSD值均小于0.2%，相對峰面積的RSD值均小于3.8%，色譜峰的相似度高于0.994，表明該方法精密度良好。

2.4.3 重復性考察 取樣品2的小葉菝葜6份，每份3.0g，制備供試品溶液，在結果顯示，各共有峰的相對保留時間的RSD值均小于0.4%，相對峰面積的RSD值均小于3.8%，相似度高于0.994。表明該方法重復性良好。

表1 小葉菝葜相對保留時間

表2 小葉菝葜相對峰面積

2.4.4 穩(wěn)定性考察 取樣品編號為2的小葉菝葜1份，制備供試品溶液，在放置 0、2、4、8、12、24 h 后進樣，記錄色圖譜，結果顯示，各共有峰的相對保留時間的RSD值均小于0.3%，相對峰面積的RSD值均小于4.2%;相似度高于0.98;表明供試品在24 h內穩(wěn)定。

圖1 小葉菝葜對照色譜圖(t/min)

圖2 小葉菝葜樣品的HPLC色譜圖

2.5 小葉菝葜HPLC圖譜共有模式的建立［6－8］

在“2.1”項下色譜條件，對4批小葉菝葜進行分析，記錄色譜圖，可以確定18個共有峰，其中5號峰含量較高，且峰形較好，將其作為參照峰，計算各峰對它的相對保留時間、相對峰面積。結果見表1和表2。采用“中藥指紋圖譜相似度計算軟件2004年A版”，將4批小葉菝葜藥材圖譜數據導入，生成對照指紋圖譜，見圖1，各批次藥材與對照指紋圖譜的相似度分別為 0.899、0.913、0.94、0.966，基本符合藥典規(guī)定的相似度要求。

3 討論

本實驗采用HPLC法測定了4批小葉菝葜的色譜圖，該方法穩(wěn)定可靠，重現(xiàn)性好，可借助指紋圖譜相關分析方法比較不同產地小葉菝葜的異同。本研究通過建立包括18個共有峰的小葉菝葜色譜圖，基本反映其化學背景特征，這對小葉菝葜的鑒別提供了一定的參考依據。

［1］Giachetti D，Taddei I，Taddei E.Effects of Smilax macrophylla Vers.in normal or hyperuricemic and hyperuricosuric rats［J］.Pharmacol Res Commun，1988，20(Suppl 5):59 －62.

［2］黃慧蓮，黃會平，邵峰，等.抗痛風性關節(jié)炎中草藥小葉菝葜根莖總皂苷含量的測定［J］.江西中醫(yī)學院學報，2010，22(5):58 －60.

［3］楊立勇，李雨生，王祥培，等.菝葜藥材HPLC指紋圖譜的鑒別［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17(8):104－107.

［4］周艷林，嚴海，鐘小清，等.菝葜藥材脂溶性成分指紋圖譜研究［J］.中草藥，2008，39(8):1246 －1248.

［5］李磊，張宏桂，孫毅坤，等.土茯苓藥材 HPLC指紋圖譜研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2007，22(4):206 －208.

［6］謝紅，楊娟，王道平，等.透骨香藥材 HPLC指紋圖譜研究［J］.中成藥，2011，33(4):549 －552.

［7］陳根順，徐麗芳，李鵬.草珊瑚的HPLC指紋圖譜研究［J］.中草藥，2011，42(2):293 －296.

［8］楊洋，蔣林，鄭國棟，等.道地藥材廣陳皮的HPLC指紋圖譜研究［J］.中藥材，2011，34(2):191 －195.