高效液相色譜－蒸發(fā)光散射器法測(cè)定川貝末膠囊中貝母素乙含量

汪劍飛

(安徽省蕪湖市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 蕪湖 241001)

川貝末膠囊由川貝在80℃以下干燥、粉碎成細(xì)粉、過(guò)篩、裝入膠囊制成，具有清熱潤(rùn)肺、化痰止咳的功效，主要用于治療肺熱燥咳、干咳少痰、陰虛勞嗽、咳痰帶血[1]。由于其藥品標(biāo)準(zhǔn)收載時(shí)間較早，質(zhì)量控制方法中只有顯微鑒別和膠囊劑常規(guī)檢查，不利于該藥的質(zhì)量控制。為了提高藥品內(nèi)在質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，筆者建立了高效液相色譜－蒸發(fā)光散射器(HPLC－ELSD)法測(cè)定川貝末膠囊中貝母素乙的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，該法簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于川貝末膠囊的質(zhì)量控制。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters2695型高效液相色譜儀，2424型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(沃特世公司);AB304－S型電子天平(梅特勒－托利多儀器＜上海＞有限公司);超聲波清洗儀(上海杰理科技有限公司)。貝母素乙對(duì)照品(批號(hào)為110751－200709，供含量測(cè)定用，含量為99.8%，中國(guó)藥品生物制品檢定所);乙腈(色譜純)，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純;川貝末膠囊(蕪湖市博英制藥有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Intersil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 －0.1%二乙胺(70 ∶30);流速:1.0 mL/min，柱溫:35 ℃;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度為80℃，載氣為壓縮空氣，壓力40 psi。

2.2 溶液制備

精密稱取貝母素乙對(duì)照品10.20 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取川貝末膠囊10粒，取內(nèi)容物，精密稱定，研勻，稱取2 g，置100 mL錐形瓶中，加1.5%的鹽酸溶液50 mL，超聲提取20 min，放冷，用氨試液調(diào)節(jié)pH至10，用三氯甲烷振搖提取3次，每次30 mL，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状挤执稳芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，棄去初濾液2 mL，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。取1.5%的鹽酸溶液50 mL，按供試品溶液制備方法操作，作為空白對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察:按照2.1項(xiàng)下色譜條件，吸取2.2項(xiàng)下3種溶液10 μL，分別注入高效液相色譜儀。結(jié)果見(jiàn)圖1。可見(jiàn)，提取溶劑不干擾供試品溶液中貝母素乙的測(cè)定。

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品溶液 2.50，5.00，10.00，15.00，20.00，25.00 μL 進(jìn)樣，按照 2.1 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣質(zhì)量(μg)的常用對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)、峰面積的常用對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0.960 9X+6.525 8，r=0.999 5(n=6)。結(jié)果表明，貝母素乙進(jìn)樣質(zhì)量的線性范圍是 0.6 ～6.0 μg。

精密度試驗(yàn):精密量取同一對(duì)照品溶液10 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果貝母素乙峰面積的RSD=0.22%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別于 0，2，4，8，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD=0.38%(n=6)，表明貝母素乙在甲醇溶液中24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為120302)樣品2.0 g，共5份，依法制成供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果含量為每粒0.34 mg，RSD=1.63%(n=5)，表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知貝母素乙含量的樣品2.0 g共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液2mL(0.24mg/mL)，按供試品溶液制備方法處理，定容至10 mL容量瓶中，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 貝母素乙加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

稱取不同批號(hào)的樣品細(xì)粉各2.0 g(每批平行取3份)，精密稱定，分別置入具塞錐形瓶中，依法制成供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定并計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為120301，120302，120303的樣品中貝母素乙的含量分別為每粒0.38，0.34，0.35mg(n=3)。

3 討論

色譜條件的選擇時(shí)，參考2010年版《中國(guó)藥典(一部)》浙貝母[2]含量測(cè)定項(xiàng)下的流動(dòng)相乙腈－0.1%二乙胺進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果供試品溶液中貝母素乙與雜質(zhì)很好地分離，故選此為流動(dòng)相。

貝母素乙為生物堿，用稀鹽酸提取，再加堿使生物堿游離后用三氯甲烷萃取，蒸干，用甲醇溶解制得供試品溶液[3－4]。此方法制得的供試品溶液雜質(zhì)峰明顯小于2010年版《中國(guó)藥典(一部)》中浙貝母含量測(cè)定的樣品處理方法。提取溶劑考察了0.5%，1.0%和1.5%3個(gè)不同體積分?jǐn)?shù)的鹽酸，提取方式比較了超聲提取(10，20，30 min)和回流提取(1，2，3 h)兩種方式，結(jié)果以1.5%的鹽酸超聲20 min效果最佳。

曾嘗試在文中的色譜條件下同時(shí)測(cè)定川貝末膠囊中貝母素甲和貝母素乙的含量，結(jié)果3批樣品中未能檢測(cè)到貝母素甲，可能與儀器檢測(cè)器的靈敏度或供試品溶液中貝母素甲的含量較低有關(guān)，需進(jìn)行進(jìn)一步的研究。3批樣品中貝母素乙的含量基本一致，可為川貝末膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供參考。

[1]衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第五冊(cè))[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1991:15.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:274.

[3]李櫻子，韓忠旭.用不同濃度鹽酸提取貝母素甲、乙方法的研究[J].長(zhǎng)春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，19(1):47.

[4]范 蕾，王偉影.可同時(shí)測(cè)定蛇膽川貝液中貝母素甲與貝母素乙的方法[J].中國(guó)藥業(yè)，2012，21(2):41 － 42.