直接進樣氣相色譜法測定硫酸氫氯吡格雷中的有機殘留溶劑

余春梅，鄭小鋒，楊秀麗，周成林，王正鳳

(西南藥業股份有限公司藥物研究所，重慶 400038)

硫酸氫氯吡格雷(clopidogrel bisulfate)是法國Sanofi－Aventis公司研制的血小板聚集抑制劑，1998年首次在美國和英國上市，臨床用于治療動脈粥樣硬化和急性冠狀動脈綜合征等[1－2]?！秶宜幤窐藴省ば滤庌D正標準》及藥品檢驗機構均采用頂空進樣法測定硫酸氫氯吡格雷殘留有機溶劑的含量[3－4]，但該法對儀器有必須配置頂空設備的特殊要求，不利于方法的推廣。筆者按照2010年版《中國藥典(二部)》與人用藥品注冊技術規范國際協調會(ICH)[5]的相關要求，建立了樣品溶解后直接進樣的氣相色譜法，同時測定硫酸氫氯吡格雷中丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷3種溶劑殘留量，并對方法進行了研究?，F報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent GC6890型氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司，FID檢測器);AB204 E型電子天平(梅特勒公司)。硫酸氫氯吡格雷(西南藥業股份有限公司，批號為120801，120802，120803);N，N－二甲基甲酰胺(色譜純，美國Tedia);丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷(分析純，重慶川東化工廠)

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

以聚乙二醇為固定液如 HP－Innowax毛細管柱(30 m×0.53 mm，1.00 μm)為色譜柱，進樣口溫度 200 ℃，檢測器溫度220℃，采用程序升溫，初始溫度為40℃，維持5 min，以60℃ /min迅速升溫至200℃，維持3 min。取系統適用性溶液1 μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷3個成分峰之間的分離度不得小于2.0，理論板數均不得低于5 000。3種溶劑的限度分別為二氯甲烷0.06%，丙酮0.5%，乙酸乙酯0.5%。

2.2 溶液配制

混合對照品貯備液:分別取二氯甲烷0.1 mL、乙酸乙酯1 mL、丙酮1 mL，精密稱定，一并置100 mL容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺(色譜純)溶解并定容，冷藏放置;對照品及系統適用性溶液:取貯備液1 mL，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至20 mL，即得;供試品溶液:取樣品1.000 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，即得;對照品加供試品溶液:精密稱取樣品 1.000 g，并準確量取混合對照品貯備液0.5 mL，一并置10 mL容量瓶中，溶解即得。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:取N，N－二甲基甲酰胺(空白溶劑)、3種成分定位溶液、混合對照品溶液和供試樣品溶液各1份，進行氣相色譜分析，結果見圖1，表明空白溶劑無干擾，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷3個成分峰之間的分離度均大于2.0，供試品溶液圖譜也未見干擾峰，可見方法的專屬性符合要求。

檢測限與定量限確定:取混合對照品溶液，逐步稀釋后進行色譜分析。結果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷峰的信噪比(S/N)為2～3時，檢測限分別為 1.6 ×10－6，2.5 ×10－6，6.0 ×10－6，信噪比為 10 時定量限分 別 為 5.0 ×10－6，10.0 ×10－6，18.0 ×10－6，均遠低于殘留溶劑控制濃度，表明方法靈敏度符合要求。

線性關系考察:分別取混合對照品貯備液 2，4，6，8，10 mL，置 100 mL容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，進樣分析，記錄色譜圖。以峰面積為Y軸、濃度為X軸進行線性回歸。結果丙酮回歸方程為Y=261 176X+39.66(r=0.999 9，n=5)，線性范圍為 0.02% ～0.1%;乙酸乙酯回歸方程為Y=253 282X+22.40(r=0.999 9，n=5)，線性范圍為 0.02% ～0.1%;二氯甲烷為Y=114 296X－13.29(r=0.9998，n=5)，線性范圍為 0.0024% ～0.012%。

加樣回收試驗:取混合對照品貯備液加入樣品中，定容使含對照品80%，100%，120%的溶液，平行配制3份，分別進樣分析，記錄色譜圖，計算含量。結果丙酮的回收率為98.9%～101.5% ，RSD=1.11%(n=9);乙酸乙酯的回收率為 98.8% ～101.6% ，RSD=1.09%(n=9);二氯甲烷的回收率為 97.9% ～103.0%，RSD=1.81%(n=9)。

重復性試驗:取對照品加入供試品溶液6份，重復進樣，記錄色譜圖。結果峰面積的RSD分別為丙酮0.63%，乙酸乙酯0.63%，二氯甲烷 1.14%。

圖1 方法專屬性氣相色譜圖

中間精密度試驗:另配制濃度相同的對照品加供試品溶液6份，于不同時間、更換人員進行測定。結果峰面積的RSD分別為丙酮0.95% ，乙酸乙酯 0.90%，二氯甲烷 0.90%。

耐用性試驗:取對照品加供試品溶液和混合對照品溶液，考察進樣口溫度、柱溫初始溫度以及檢測器溫度在標準條件和溫度變動情況下的測定結果(每個條件2次)。結果進樣口溫度變化在10℃以下時，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的RSD分別為0.27%，0.21%，0.84%;柱溫初始溫度變化在5℃以下時，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的RSD分別為0.39%，0.87%，1.82%;檢測器溫度變化在10℃以下時，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的RSD分別為0.16%，0.22%，0.80%。可見，RSD均小于2.0%，方法耐用性符合要求。

2.4 樣品檢測

照擬訂方法連續對3批樣品進行殘留溶劑測定，結果3批樣品均未檢出丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷或該3種溶劑峰均低于檢測限，說明樣品的相關工藝控制符合要求。

3 討論

使用涂布聚乙二醇的強極性HP－Innowax毛細管柱，較容易地實現了3種成分的良好分離。在溶劑N，N－二甲基甲酰胺色譜圖中，在初始溫度維持的色譜區間內，發現了1個明顯的雜質峰。該雜質峰雖并未干擾到本法測定的有機溶劑峰，但仍提示了配制對照品及供試品溶液時，需使用純度要求比較高的色譜級溶劑以避免可能的干擾。

使用樣品溶解后直接進樣進行毛細管氣相色譜分析，對硬件設備的要求較頂空進樣法低，且操作簡單、耗時少、靈敏度高，測定結果準確、可靠，適合用于硫酸氫氯吡格雷的有機殘留量控制。

[1]賈國強，張信紅.新型的ADP受體拮抗劑硫酸氫氯吡格雷[J].中國藥物應用與監測，2002，17(5):52 －53.

[2]鄒 江，遲曉巍，王龍山，等.硫酸氫氯吡格雷位置異構體的合成 [J].中國醫藥工業雜志，2010，41(1):6 －8.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:61.

[4]田 勇，唐素芳.硫酸氫氯吡格雷中有機溶劑殘留量的頂空毛細管氣相色譜法測定[J].中國醫藥工業雜志，2012，43(2):134－136.

[5]人用藥物注冊技術要求國際協調會.殘留溶劑指導原則[M].北京:人民衛生出版社，2000:236.