國產鹽酸左氧氟沙星片在健康國人體內的藥動學研究

李 爽 李曉華 張永玲 游廣輝 徐國防

鄭州人民醫院，河南鄭州 450003

鹽酸左氧氟沙星片（Levofloxacin Hydrochloride Tablets）具有廣譜抗菌作用，抗菌作用強，對多數腸桿菌科細菌有較強的抗菌活性。鹽酸左氧氟沙星為第二代喹喏酮類藥物，其抗菌機制主要是通過抑制微生物DNA螺旋酶而阻止微生物生長，與其他同類藥物相比，左旋氧氟沙星的油水分布系數大，在富含脂質的組織中分配好，體液及臟器濃度高，臨床上用于治療呼吸道，泌尿道等多種系統的感染[1]。本實驗對國產鹽酸左氧氟沙星片在健康國人體內的藥代動力學加以研究，以對臨床合理用藥提供參考。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀（日本島津，）包括：LC-6A高壓輸液泵、SPD-6AV紫外可調檢測器CTO-6A柱溫箱、7251進樣閥、分析之星色譜工作站。XK-96A液體快速混勻器，姜堰市醫療器械有限公司。BF-2000M型氮氣吹干儀，北京八方世紀科技有限公司。LXJ-Ⅱ離心沉淀機，上海醫用分析儀器廠。

1.2 試劑

甲醇（色譜純，北京化工廠，批號：20020629）、磷酸二氫鉀（分析純，北京紅星化工廠，批號：950401-8）、四丁基溴化氨（分析純，天津市科密歐化學試劑開發中心，批號：20040531）、異丙醇（分析純，北京化工廠生產，批號：941101）、磷酸（分析純，天津市化學試劑六廠，批號：20010902），二氯甲烷（分析純，北京化工廠，批號：20030319）。試驗用水為自制三蒸水。

1.3 藥品

試驗制劑：鹽酸左氧氟沙星片，河南省天方藥業有限公司生產，規格：100 mg/粒，批號：0901061。鹽酸左氧氟沙星對照品：中國藥品生物制品檢定所提供，批號：130045-200202。含量：97.2%。

2 方法與結果

2.1 受試者選擇

18名男性健康志愿者均為在校大學生，平均年齡（23±2）歲，平均體重（63.42±4.21）kg，無煙酒嗜好。均自愿作為受試者參加本試驗，給藥前2周至整個試驗過程結束未服任何其他藥物，受試前經體格檢查及心電圖、肝、腎功能檢查正常。

2.2 樣品采集與處理

18名男性健康志愿者于試驗當日晨服藥前采空白血樣，7∶00開始統一服用受試制劑鹽酸左氧氟沙星片，劑量均為 200 mg（100 mg×2 片），于服藥后 0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、9、12 h 和 24 h 各采集靜脈血 4 mL， 血樣置于標號試管中，所有血樣室溫放置2 h后離心（3000 r/min）20 min，分取血清，置-20℃冰箱保存，測定前自然解凍。

2.3 HPLC測定鹽酸左氧氟沙星血清濃度的方法及確證

2.3.1 色譜條件

色譜柱：Scienhome，C18不銹鋼柱，200 mm×4.6 mm。填料粒徑：5 μm，KROMASIL。流動相：0.01 mol/L 磷酸二氫鉀-甲醇-0.5 mol/L 四丁基溴化氨（78∶22∶4，V/V）。流速：1.0 mL/min。柱溫：40℃。UV檢測波長：294 nm。靈敏度：0.001 AFU。

2.3.2 血清樣品預處理

取血清0.5 mL，加二氯甲烷（含2%異丙醇）4 mL渦旋萃取2 min，離心10 min（3500 r/min），負壓吸去上層水相，轉移有機相2 mL于另一尖底試管中，40℃水浴中氮氣吹干，100 μL流動相復溶，進樣 20 μL，按前述色譜條件測定左氧氟沙星的峰面積，以外標法進行定量。

2.3.3 分析方法的確證

2.3.3.1 鹽酸左氧氟沙星血清色譜圖（特異性）取6名健康人血清、健康人混合血清加鹽酸左氧氟沙星標準液及受試者服藥后血清0.5 mL，按樣品制備項下處理測定，得色譜圖 A、B、C。取鹽酸左氧氟沙星 2000 μg/L 標準液 4 μL 進樣，得色譜圖D。在此色譜條件下，鹽酸左氧氟沙星能與血清中其他雜質完全分開，保留時間約為5.3 min。見圖1。6份健康人血清經按樣品制備項下處理測定，其血清中均無任何物質峰對待測藥物峰產生干擾，圖1A為其中之一，說明本方法有極高的特異性，能準確測定血清中左氧氟沙星的含量。

2.3.3.2 血清標準曲線的制備 用高精度電子天平精密稱取左氧氟沙星標準對照品5 mg，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得100 mg/L的左氧氟沙星標準對照品儲備液。精密吸取左氧氟沙星標準對照品儲備液一定量，用甲醇稀釋，配制成不同濃度的左氧氟沙星標準對照品溶液系列。取健康人混合血清0.5 mL 6份，分別加入相應的左氧氟沙星標準對照品溶液，得濃度為50、100、250、500、2000、4000 μg/L的含藥血樣。以下操作同血清樣品預處理與測定項，隔日重復以上操作，共5次。以峰面積（A）對濃度（C）做回歸曲線，回歸方程為：C=0.004 486 A+0.03 817（r=0.999，n=5）。鹽酸左氧氟沙星在 50～4000 μg/L范圍內，線性關系良好。血清樣品可以準確測定的最低濃度為 50 μg/L（S∶N≥5）。

2.3.3.3 定量下限的考察 標準曲線的最低檢測濃度（定量下限LLOQ）為50 μg/L，為待測樣品實測平均Cmax的1/44。其準確度為真實濃度的91.08%～99.13%，相對標準差（RSD）為3.26%（n=5）。均能符合實驗要求。

2.3.3.4 回收率試驗 ①方法回收率（準確度實驗）：用不同濃度的鹽酸左氧氟沙星對照品加健康人混合血清配成100、500、2000 μg/L 的血清樣品，每個濃度各 5 份，按樣品處理和測定項下處理測定。以血清樣品中鹽酸左氧氟沙星測得量與加入量之比求算方法回收率。結果見表2，提示回收率符合要求。

圖1 鹽酸左氧氟沙星HPLC圖譜

表2 血清中鹽酸左氧氟沙星的方法回收率（n=5）

②提取回收率：取離心管數支，精密加入鹽酸左氧氟沙星對照品溶液，用甲醇稀釋，配制成濃度分別為100、500、2000 μg/L的鹽酸左氧氟沙星溶液，平行制備5份，各取0.5 mL以氮氣流吹干，用流動相100 μL復溶，進樣20 μL分析，記錄藥物峰面積（AS）。另取離心管數支，分別加入空白血清0.5 mL和不同濃度的鹽酸左氧氟沙星對照品溶液，旋渦混勻，配制成含鹽酸左氧氟沙星100、500、2000 μg/L的血清樣品，平行制備5份，按“2.3.2.2”項下處理進樣，記錄藥物峰面積（AX）。將AX、AS的值代入式（1），即可求得鹽酸左氧氟沙星的提取回收率R（%），結果見表3。

2.3.3.5 精密度試驗 用不同濃度鹽酸左氧氟沙星對照品加健康人混合血清配成 100、500、2000 μg/L的血清樣品，按樣品處理和測定項，于1 d內平行操作處理測定5次，另按上述操作，每日處理測定1次，連續5 d，得日內和日間相對標準差。結果見表4。提示方法精密度符合要求。

表4 方法精密度（n=5）

2.3.3.6 樣品穩定性 ①血樣在冰凍存放條件下的穩定性：用空白血清配制含鹽酸左氧氟沙星標準品濃度為100、500、2000 μg/L的血樣各4份，1份立即處理測定，其余三份分別于-20℃冰箱存放1、2、4周時取出處理測定，結果見表5。提示含鹽酸左氧氟沙星的血樣在該存放條件下穩定。

表5 不同存放時間下血樣的穩定性（-20℃）

②標準品冰凍存放條件下的穩定性：取標準品貯備液用甲醇稀釋制成含鹽酸左氧氟沙星為100、500、2000 μg/L樣品，三個濃度各取0.5 mL，氮吹儀中吹干，100 μL流動相復溶，進樣 20 μL。并分別于-20℃冰箱存放 1、2、4 周時取出，按上述方法處理測定，結果見表6。提示鹽酸左氧氟沙星標準品溶液在該存放條件下穩定。

表6 不同存放時間下標準品溶液的穩定性（-20℃）

③血樣多次凍融條件下的穩定性：用空白血清加入鹽酸左氧氟沙星系列標準品，配制成含鹽酸左氧氟沙星為100、500、2000 μg/L 的血樣三份，各取 0.5 mL 按“2.3.2.2”項下樣品處理與測定項處理測定，并分別于-20℃冰箱冰凍后，取出室溫融解，反復2次，每次均取樣按上述方法處理測定，結果見表7。提示含鹽酸左氧氟沙星的血樣經2次凍融后仍穩定。

表7 不同凍融次數下血樣的穩定性（反復凍融）

④血樣處理后的溶液中鹽酸左氧氟沙星室溫放置時的穩定性：用空白血清配制含鹽酸左氧氟沙星100、500、2000 μg/L的血樣，立即處理測定，并將處理后的溶液室溫放置（密塞、避光）4、8、12 h 時進行測定，結果見表 8。提示血樣處理后的溶液室溫放置12 h，其中的鹽酸左氧氟沙星仍穩定。

表8 不同存放時間下血樣處理后的溶液的穩定性（室溫）

2.4 數據處理

志愿者的血藥濃度-時間數據，用上海宏能軟件有限公司BECS“生物利用度和等效性統計軟件”（版本：1.0.2）以非房室依賴的方法求算有關藥動學參數。Cmax、Tmax采用實測值，AUCtn用血藥濃度實測值經梯形法計算，AUCinf由AUCtn加上 t→∞ 的剩余面積（AUCt→∞=Ct/λz，Ct為試驗中最后一點可測定的血藥濃度，λz為血藥濃度末端項消除速率常數）算出。t1/2=0.693/λz（λz為血藥濃度末端項消除速率常數）。

2.5 血藥濃度與藥動學參數

鹽酸左氧氟沙星片給予18名受試者后，經時過程血清中鹽酸左氧氟沙星濃度見表9，血藥濃度-時間數據經BECS程序計算藥動學參數，結果見表10。

3 討論

左氧氟沙星是氧氟沙星的左旋體，屬于第三代氟喹諾酮類合成抗菌藥物，抗菌活性約為氧氟沙星的兩倍，通過抑制細菌DNA旋轉酶的活性，阻止細菌DNA的合成和復制[1]。目前，我國最常用的左氧氟沙星治療方案為100 mg，bid，或200 mg，bid，口服或靜脈使用，且相應的藥物劑型也為100 mg和200 mg。有研究表明，左氧氟沙星存在劑量依賴性的特點[2]，國外多主張每日單次大劑量治療，如500、750、1000 mg，qd[3]。

臨床上主要用于由革蘭陰性和革蘭陽性菌引起的各類感染，如呼吸系統感染，泌尿生殖系統感染，消化系統感染等。左氧氟沙星的不良反應主要集中在中樞及外周神經系統損害、全身性損害、肌肉骨骼肌系統損害、代謝和營養障、神經紊亂等[4]。監測左氧氟沙星的血藥濃度有助于防范其不良反應的發生。

表9 單劑量口服鹽酸左氧氟沙星片（200 mg）經時血藥濃度（μg/L）

表10 口服單劑量鹽酸左氧氟沙星片（200 mg）后算得的藥動學參數

健康受試者口服受試制劑鹽酸左氧氟沙星片200 mg后吸收迅速，于 0.75～2 h[平均（1.15±0.42）h]達血藥濃度峰值（930.24～3220.55）μg/L，平均（2094.6±615.1）μg/L。消除半衰期平均為（7.08±1.26）h。所得主要藥動學參數與國內外文獻報道較為一致[5-10]。

目前，我國最常用的左氧氟沙星治療方案為100 mg，Bid，或200 mg，bid，口服或靜脈使用，且相應的藥物劑型也為100 mg，200 mg。有研究表明，左氧氟沙星存在劑量依賴性的特點[11]，其防突變濃度（MPC）為 2～4 mg/L。國外多主張每日單次大劑量治療，如 500、750、1000 mg，qd[12]。本次試驗中Cmax的平均值為2.094 mg/L，剛剛達到防突變濃度，在臨床應用中多次用藥后也能夠基本滿足抗菌治療和防止細菌突變的要求；而國外單次大劑量給藥的方案可能更符合臨床治療需要，但需在隨后的人體試驗中進一步驗證。

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