不同濃度艾煙長期干預對大鼠血清vWF及ox－LDL表達的影響

楊 佳 趙百孝 韓 麗 劉 平 王 磊 白 樺 黃 劍 劉鈞天 朱茂祥 楊陟華

(1北京中醫藥大學針灸推拿學院，北京，100029;2中國人民解放軍軍事醫學科學院，北京，100071)

微循環障礙是心血管疾病重要的病理基礎，近年來頗受關注。艾灸因具有活血化瘀、溫陽散寒，通經活絡的作用而備受古代醫家推崇。艾作為最佳的施灸材料，性苦微溫，氣味芳香，艾葉溫辛通脈，具有活血行氣的藥理作用［1］，實驗證明［2］艾灸可以使局部皮膚充血，毛細血管擴張，增強局部的血液循環與淋巴循環，使局部的皮膚組織代謝能力加強。

灸法的治療作用主要是由于溫熱刺激、光輻射等物理刺激，艾的藥性作用以及艾燃燒生成物(艾煙)的共同作用。艾灸物理刺激及藥性作用的研究比較明確，但艾煙的化學成分復雜，其對于人體各系統效應的基礎研究尚處于起步階段。

已有報道表明［3］，香煙煙霧會造成微循環障礙，增加罹患心血管疾病的危險率，艾煙也經由皮膚或者呼吸道吸入人體，而它對于微循環影響的相關報道缺如。本實驗為艾煙長期毒理實驗和安全性評估的一部分，通過觀察不同濃度艾煙長期干預后大鼠的血管性假血友病因子(von Willebrand factor，vWF)、氧化性低密度脂蛋白(ox－LDL)的改變來探討艾煙對微循環的影響，以期為艾煙安全性評價提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器 3年陳艾條(規格18 mm×200 mm×10支;市售南陽漢醫有限責任公司生產)，全自動電子分析天平(河南愛博特科技發展有限公司生產)，動式染毒柜(產品型號HOPE－MED8050;天津開發區合普工貿有限公司生產)，科研級生物顯微鏡(NIKON E-clipse 80i)，大鼠ox－LDL、vWF檢測試劑盒均由美國R＆D公司生產，北京環宇金科生物醫學技術有限公司分裝。

1.2 實驗動物與分組 本實驗選擇7周齡雄性wistar大鼠168只，體重(60±10)g，購自軍事醫學科學院實驗動物中心。許可證號:［SCXK(津)2008－0001］。所有動物均用標準飼料喂養，自由進水;飼養環境溫度18～22℃，采用人工控制照明，保持12 h光照(8:00－20:00)和黑暗(20:00－次日8:00)交替循環，相對濕度為50%～60%。

適應性飼養1周，按照隨機數字表達法將168只大鼠隨機分為四組，每組42只。低濃度組、中濃度組、高濃度組，對應的動式染毒柜的不透光度分別為10%、40%、70%，每組在不同濃度組艾煙中暴露6個月，每日20 min，6個月末取材;空白組只放置于動式染毒柜中每日20 min，不進行任何干預，6個月末取材。

1.3 用動式染毒柜進行艾煙干預 該實驗選用動式染毒柜可精確控制艾煙濃度并維持染毒環境氧氣、溫度、濕度、壓強的恒定。艾煙濃度用透光率度量，濃度越低，透光率越高。打開染毒柜電源，設置動式染毒柜各項參數:氧氣為26%、濕度45% ～63%、溫度20℃～22℃、壓強－70 kp、時間20 min，觀察染毒柜屏幕顯示，待染毒柜內艾煙濃度分別達到低、中、高相應濃度，打開艙門，迅速放入動物，待儀器顯示干預時間已到，取出動物;空白組放置于染毒柜中，設置動式染毒柜各項參數:氧氣為26%、濕度45% ～63%、溫度20～22℃、壓強－70 kp、時間20 min，不進行任何干預。

1.4 取材 所有大鼠麻醉后，股動脈取血，所得血液放入EP管中，在室溫(22～25℃)下靜置2 h后離心:轉速3 500 r/min，溫度4℃，時間15 min，離心完畢，用移液槍將上清液(血清)移入新的離心管后放入－70℃的冰箱待測。

1.5 檢測指標 血清vWF、ox－LDL含量的測定采用酶聯免疫吸附雙抗體夾心法(ELISA)原理定量測定血清vWF、ox－LDL含量，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.6 統計學處理 采用SPSS 18.0統計軟件進行統計學處理。計量指標均采用均值±標準差(s)表示，各組數據若符從正態分布，組間比較采用單因素方差分析;若不服從正態分布，采用非參數檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義;P＜0.01為差異有顯著性意義。

2 結果

2.1 血清中vWF含量的改變 結果如表1和圖1所示:低濃度、中濃度艾煙干預均使血清中vWF含量下降，與空白組相比有差異，P＜0.05，高濃度艾煙干預后，vWF含量顯著性降低，P＜0.01，顯示出隨著艾煙濃度的升高，vWF含量逐漸下降，這可能預示著血小板聚集程度下降，血流狀態下抑制血栓形成。

表1 各組血清中vWF含量的對比(%，s)

表1 各組血清中vWF含量的對比(%，s)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01。

48.58±1.58低濃度組 7 43.82±2.04* 0.043中濃度組 7 43.11±1.23* 0.018高濃度組 7 41.16±1.31＊＊空白對照組7 0.003

圖1 各組血清中vWF含量的對比(%，s)

表2 各組血清中ox－LDL含量的對比(μg/dl，s)

表2 各組血清中ox－LDL含量的對比(μg/dl，s)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01。

空白對照組67.95±5.7低濃度組 7 58.95±1.57 0.175中濃度組 7 81.98±4.79* 0.034高濃度組7 68.7±4.57 0.908 7

圖2 各組血清中ox－LDL含量的對比(μg/dl，s)

2.2 血清中ox－LDL的含量改變 低濃度艾煙干預后ox－LDL含量有下降趨勢，但與空白組相比無統計學意義，P＞0.05;中濃度組艾煙使血清中ox－LDL含量升高，與空白組相比有統計學意義，P＜0.05;高濃度艾煙干預與空白組相比有上升趨勢，但無統計學意義，P＞0.05。結果如表2和圖2所示。

3 討論

血液流變異常是誘發心血管疾病的危險因素之一，血流速度減慢，血小板凝聚性增高，可以促使血栓的形成，進一步誘發動脈粥樣硬化，導致心血管事件的發生。因此改善血液流變狀態對于保證微循環的正常運行，維持物質代謝，能量代謝平衡，促進神經細胞的功能恢復具有重大意義。

vWF是反映血小板功能的重要指標［4－6］。vWF主要在血管內皮細胞的Weibel－Palade小體中合成和儲存，當血管內皮細胞受損時，vWF能夠迅速釋放，它對血小板黏附到已暴露膠原的內皮和血小板聚集起關鍵作用。越來越多的證據顯示vWF在血流狀態下的血栓形成中發揮關鍵作用，而血栓的形成則加速了心血管疾病的發生。

臨床觀察和實驗研究證實，艾灸通過改善機體循環狀態，提高氧自由基代謝、調整神經內分泌系統、穩定內環境等多種途徑達到活血化瘀的作用［7－9］。本實驗結果顯示:低濃度、中濃度艾煙干預均使血清中vWF含量下降，隨著艾煙濃度的升高，vWF含量逐漸下降，提示艾煙可以使血流變快，降低血液凝集程度，具有加速機體新陳代謝，改善微循環，穩定內環境的作用。

艾性芳香辛燥是艾灸對機體產生效應的機制之一［10］。艾煙能夠起到調節微循環作用可能與艾葉的藥性作用以及艾燃燒生成物的芳香作用有關。現代研究發現，艾葉的主要成分是揮發油，其化學成分中含有:桉葉素、樟腦、龍腦、甘菊環等［11］，這些成分也存在于羅勒、迷迭香、桉葉油等［12］，這些芳香物質可以對人體神經系統、血液循環系統、消化系統、呼吸系統、皮膚、泌尿系統都存在著治療和輔助治療作用［13－14］，可以促進血液運行，加快微循環，調節新陳代謝，加快體內毒素排除、消炎殺菌，擴張外周血管、降低血壓、增加心灌流量而抗缺氧。

目前普遍認為［15］芳香物質可經嗅覺系統傳入大腦，抑制或興奮中樞神經系統，亦可通過呼吸或皮膚滲透進入血液，隨血液循環運行至全身，因此艾葉及艾燃燒生成物可能是通過其中的揮發油的芳香作用達到加快血液循環，通絡散瘀的作用。

ox－LDL可以抑制內皮細胞NOS基因表達，從而抑制NO合成和釋放，引起內皮功能障礙。在心血管疾病發展的過程中，首先是由于內皮功能受損或高膽固醇血癥，因此ox－LDL是內皮損傷的有害因子。血管內皮損傷是造成微循環障礙的原因之一［16］。

本實驗結果顯示，低濃度艾煙干預后ox－LDL含量無明顯改變，P＞0.05;高濃度艾煙干預后，ox－LDL含量有上升趨勢但不具有統計學意義，P＞0.05;中濃度艾煙干預使ox－LDL含量顯著性上升，表明中濃度艾煙對血管內皮有一定損傷，但是由于本實驗為毒理試驗，中濃度(40%)艾煙相當于臨床艾煙濃度的56倍，低濃度組艾煙(10%)為臨床艾煙濃度9倍，低濃度艾煙干預對血管內皮無損傷，可以初步推斷，臨床使用艾煙可能不會對血管內皮造成損傷。進一步研究可以設置臨床診室濃度組，從而深入探討臨床使用艾煙對微循環的影響。

4 結論

隨著艾煙濃度的升高，vWF含量逐漸下降，這可能預示著艾煙使血小板聚集程度下降，從而改善血液微循環，對促進機體新陳代謝，穩定內環境起到一定積極作用。低濃度艾煙未見明顯血管內皮損傷，中濃度艾煙會造成一定血管內皮損傷。其損傷機制有待于進一步研究。

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