補腎益心湯對自發性高血壓大鼠血管內皮功能損傷的干預作用

冉 旭 陳 立 呂 波

(1廣州中醫藥大學，廣州，510405;2中山市中醫院，中山，528400;3貴陽中醫學院第一附屬醫院，貴陽，550001;4貴陽中醫學院，貴陽，550002)

高血壓是最常見的心血管疾病之一，其引起的血管結構及功能障礙是引起心血管事件發生和發展的主要危險因素，嚴重影響著人們的生命與健康，成為當前人類主要死亡原因之一，高血壓可導致內皮功能受損出現功能失調，而內皮功能失調反過來可以加速高血壓的發展進程，因此高血壓治療強調改善血管內皮功能［1］，大量研究表明血管內皮受損和內皮功能減退與高血壓的發生及發展密切相關［2］，同時研究證實一氧化氮(NO)，內皮素(ET)等血管內皮因子在維持血管內皮功能中發揮重要作用［3］，對維持和恢復正常血管內皮功能對于防治高血壓具有重要意義，因此，本研究應用補腎益心湯干預自發性高血壓大鼠(SHR)，旨在探討補腎益心湯對自發性高血壓大鼠血管內皮功能損害的干預情況作用。

1 材料與方法

1.1 材料 健康自發性高血壓大鼠40只(雌雄不拘，體重150～200 g)，由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供;大鼠飼料由廣東省醫學實驗動物中心提供;一氧化氮(NO)測定試劑盒由南京弘陽生物技術有限公司提供;內皮素(ET)測定試劑藥盒由解放軍總醫院東亞免疫技術研究所提供;酶標儀為瑞典linBio128C型。

1.2 方法

1.2.1 分組 健康自發性高血壓大鼠40只，實驗前適應性飼養10 d，飼養條件:室溫(22±4)℃，相對濕度(58% ±6%)，光照與黑暗循環時間為12 h，飲水不限。40只自發性高血壓大鼠按隨機數字表法分為空白對照組、補腎益心湯大、中、小劑量組共4組，每組10只，各組均喂飼富含多種維生素及微量元素的基本飼料，補腎益心湯組大、中、小劑量組在喂飼基本飼料的基礎上每日加喂補腎益心湯15 mL，10 mL，5 mL，(主要由桑寄生30 g、女貞子15 g、墨旱蓮15 g、仙茅12 g、淫羊藿15 g、益母草15 g、澤瀉15 g、豨薟草15 g、地骨皮30 g、杜仲15 g組成)，各組動物每日進食總量相等，限制為100 g，分2次，1次/12 h。動物分籠飼養，自由飲水，實驗周期為8周。

1.2.2 NO、ET水平測定 于試驗前、8周末大鼠鼠尾動脈采血5 mL，注入含有2 g/L EDTA－Na2 30 μL和抑肽酶40 μL試管中混勻，40℃ 3 kr/min離心10 min，分離血漿，立即凍存于－70℃低溫冰箱中備測，測量前將樣本置室溫下復融，再次40℃，3 kr/min離心5 min，取上清液，NO測定采用硝酸還原酶法;ET－1測定采用放射免疫法;具體方法嚴格按說明書進行，所有操作均由專人嚴格按規程進行。

1.2.3 鼠尾血壓測定 分別于實驗前后測定各組大鼠血壓，將大鼠置于大鼠血壓計的保溫箱內加溫10 min(37℃)左右，待尾動脈充分擴張，鼠尾套入套袖，動物安靜后充氣，測定血壓，重復3次，取其均值。

1.2.4 統計學處理 使用SPSS 16.0統計軟件進行分析，連續變量用(s)表示。組間連續變量之間的比較采用方差分析;組內連續性變量之間的比較采用配對t檢驗;所有分析都采用雙側檢驗法，檢驗水平α取0.05，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 4組實驗前后鼠尾收縮壓比較 表1示，實驗前4組組間比較差異無統計學意義(P＞0.05)，實驗后4組組間比較差異有統計學意義(P＜0.05)，且大劑量組血壓降低更明顯，與其他3組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

表14 組實驗前后收縮壓水平比較(s，mmHg)

表14 組實驗前后收縮壓水平比較(s，mmHg)

注:與同期其他各組比較，*P＞0.05，#P＜0.05。

實驗分組 實驗前 實驗后 P值0.666小劑量組 205.1±18.4 189.8±12.0 0.007中劑量組 203.0±16.2 181.1±11.39 0.002大劑量組對照組 208.6±21.2* 205.5±7.56#200.3±21.8 177.0±10.59 0.001

2.2 4組實驗前后NO、ET水平比較 表2示，4組實驗前NO、ET水平差異無統計學意義(P＞0.05)，實驗后，藥物大、中、小劑量組NO水平顯著增高，ET水平顯著降低，而大劑量組更為明顯，差異有統計學意義(P＜0.05)，而對照組NO、ET水平前后無明顯變化。

表24 組NO、ET水平變化情況比較(s)

表24 組NO、ET水平變化情況比較(s)

注:組內前后比較，*P＜0.05;組間同期比較，#P＜0.05。

對照組 41.73±3.91 68.08±3.29 40.86±3.8*#63.88±8.16*#小劑量組 42.88±1.48 67.61±8.04 63.41±14.8 54.51±4.85中劑量組 42.13±4.59 69.37±12.29 66.46±13.5 54.80±5.33大劑量組 43.23±3.36 66.27±5.56 79.4±14.41 42.22±4.62

3 討論

隨著人民生活水平的提高和生活節奏的加快，心血管疾病的發病率不斷升高，已經嚴重威脅了人類的生活和健康，高血壓引起的心臟和血管結構及功能障礙是引起心血管事件發生和的主要危險因素，嚴重影響著人們的生命與健康，成為當前人類主要死亡原因之一，文獻表明［4］，血壓的增高與心血管事件的發生呈正向關系，血管內皮功能與高血壓的相關性研究已成為心血管領域研究的熱點，血管內皮細胞功能紊亂被認為是高血壓患者的一個重要病理生理特征［5］，而完整的內皮系統在維持血管張力調節方面發揮重要作用，研究證實血管內皮細胞是沿著血管內面呈單層排列的組織細胞，它不僅具有分隔血液與間質組織的屏障功能，還通過分泌多種血管活性物質調節血管張力、維持凝血與纖溶的平衡以及防止血小板黏附及血栓形成，調節血管平滑肌細胞的增殖及遷移［6］，在調節心血管功能、維持心血管穩態中發揮重要作用［7］。有研究顯示NO和ET－1的分泌失衡是導致高血壓的重要影響因素［8］。NO為主要的擴血管物質，有強大的舒張血管的作用，抑制NO的基礎釋放，可引起外周血管收縮，導致血壓升高［9］，研究表明，內皮來源的血管活性物質在血壓調節中起著重要作用，其中一氧化氮(NO)和內皮素－1(ET－1)在血壓調節中的作用尤為重要［10］，因此，監測這些內皮標志物能夠有效的評價血管內皮功能，與此同時，在高血壓、冠心病等疾病的治療中發現，針對改善內皮功能的治療往往能夠取得顯著的治療效果［11］，改善血管內皮功能對高血壓的早期診療及預后估計等都具有重要意義。

中醫藥防治內皮細胞損傷是目前較為關注的領域，許多研究證實，中醫藥對血管內皮細胞有著較為理想的調控作用，研究證實黃芪多糖能夠干預內皮細胞炎癥黏附作用，保護內皮功能［12］、黃芪多糖對血管內皮細胞有明顯保護作用，呈劑量依賴性增強內皮細胞活性、增加NO釋放、抑制細胞ET釋放、增加胞內游離鈣濃度［13］。中醫學沒有高血壓病名，對此類病癥大多屬于中醫學“眩暈、頭痛”范疇，高血壓病位以肝、腎，始終都有肝腎陰虛，水不涵木，隨著中醫藥對高血壓病研究的不斷深入，肯定了高血壓病的病位主要為肝、腎兩臟，根源在腎，且涉及心、脾，其病機為本虛標實、腎氣虧虛、精髓不足、水不涵木、肝陽上亢，陽化風動，氣血上升［14］，進而導致五臟功能失調［15］，所以多數情況下，腎虛是高血壓病的始動因素。補腎益心湯由廣州中醫藥大學第一附屬醫院吳偉教授根據多年診治高血壓病的臨床經驗，結合現代中藥藥理研制而成的，臨床上對于高血壓病有很好的療效，主要由桑寄生、女貞子、澤瀉、杜仲等藥物組成，按照補腎、益心、清肝、利尿的治則制定的，全方組方嚴謹，選藥精當，作用肯定，且簡單、安全、無毒副反應，研究發現補腎益心湯所包含的單味中藥桑寄生通過調節血清激素水平、血管活性物質的釋放及堿性成纖維細胞生長因子的含量，達到保護中小動脈內皮細胞，逆轉平滑肌細胞增殖，對抗動脈粥樣硬化的效果，對高血壓所致的心、腦、腎病變有積極的治療和預防作用［16］。研究表明杜仲糖苷能明顯降低血壓，具有抗氧化和自由基清除作用，能保護細胞膜不受氧化，其作用機制可能是降低血漿ET水平，升高血漿NO水平，調整體內ET與NO平衡狀態，減輕血管內皮損傷，松弛血管平滑肌，從而達到降低血壓保護內皮細胞和心、腦、腎等靶器官損害的作用［17］;同時現代藥理研究證實，澤瀉有降壓、緩和血管硬化，利尿功用，減少血容量，進而減弱RAAS活性，使循環AngⅡ含量下降而實現降壓效應，種種跡象表明補腎益心湯可能對高血壓損傷的血管內皮功能存在某種程度的干預作用，從而在冠心病防治中發揮一定效應，本研究結果顯示補腎益心湯大、中、小劑量組與對照組比較，能夠顯著增加血一氧化氮水平，而降低血中內皮素水平，改善自發性高血壓大鼠內皮功能，降低自發性高血壓大鼠血壓，而這種降壓作用可能與其改善血管內皮舒縮功能有關，改善高血壓的預后，對高血壓的治療大有裨益。

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