中藥眩暈Ⅲ號治療腦動脈粥樣硬化機制的實驗研究

劉式威劉靜呂霞梁軍田慶華劉志剛尹嶺

(1.解放軍第211醫院神經內科，150080；2.解放軍第211醫院特診科，150080；3.解放軍第65426部隊醫院，150087；4.解放軍總醫院，100837)

中藥眩暈Ⅲ號治療腦動脈粥樣硬化機制的實驗研究

劉式威1劉靜2呂霞3梁軍1田慶華1劉志剛1尹嶺4

(1.解放軍第211醫院神經內科，150080；2.解放軍第211醫院特診科，150080；3.解放軍第65426部隊醫院，150087；4.解放軍總醫院，100837)

目的 觀察中藥眩暈Ⅲ號對腦動脈硬化的治療作用，并初步探索其作用機制。方法 隨機將50只雄性SD大鼠分為正常對照組、模型組、辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號低劑量組、眩暈Ⅲ號高劑量組。除正常對照組外，在喂食開始時一次性腹腔注射維生素D3(300 000 IU/kg)加高脂配方飼料喂養方法建立腦動脈硬化大鼠模型。7周后開始灌胃給藥，正常對照組和模型組予蒸餾水灌胃。8周后處死大鼠，測各組血脂、腦組織生化指標，并對腦血管作病理檢查。結果 眩暈Ⅲ號能降低血脂，降低腦組織丙二醛(MDA)含量，改善腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性(P＜0.05)；模型組腦動脈內膜內皮細胞呈廣泛性變性、壞死、脫落，粥樣斑塊形成。經眩暈Ⅲ號治療后上述指標均有一定改善。結論 眩暈Ⅲ號能改善腦動脈硬化模型大鼠的血脂與氧化能力、減輕腦血管壁的病理損害，這些變化提示眩暈Ⅲ號具有防治腦動脈硬化的作用。

腦動脈硬化；動物模型；藥物干預；大鼠

隨著社會老齡化進程的加快及飲食結構和工作方式的改變，腦血管疾病的發病率近年在全球呈上升趨勢。高脂血癥是動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)發病的主要因素之一[1]。AS是許多心腦血管疾病的基礎病理表現，其最終結果是形成粥樣硬化斑塊，造成血管壁狹窄，靶器官供血不足，嚴重時會造成斑塊破裂，形成血栓，促發心腦血管疾病的發生。因此，積極降血脂、防治腦動脈硬化是腦血管病治療的關鍵。

以往多采用西藥他汀類降血脂、防治腦動脈硬化，因為副作用大，使其應用受到限制。本文利用腦動脈硬化大鼠模型，研究中藥眩暈Ⅲ號對腦動脈硬化的治療作用，并探索其可能的機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 清潔級SD雄性大鼠，體質量150～180 g，共50只，由北京醫科大學醫學部醫學實驗動物科學部提供，并在SPF環境下飼養。

1.1.2 藥物與試劑 中藥眩暈Ⅲ號處方組成：生曬參10 g、白術15 g、黃芪15 g、當歸15 g、川芎15 g、赤勺15 g、葛根15 g、地龍15 g、丹參15 g、石菖蒲15 g、三七粉3 g。按處方稱取中藥材，煎熬成汁，相當于每毫升藥液含生藥量2 g。辛伐他汀片：20 mg×7片，浙江京新藥業股份有限公司生產，批號：H20000009。實驗前研末以生理鹽水調成1 mg/mL濃度供試液備用。高脂乳劑：按文獻方法配成含3%膽固醇、10%豬油、0.5%膽酸鈉和0.2%丙基硫氧嘧啶的脂肪乳劑，4℃冰箱保存備用。血清三酰甘油(triglycerides，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白(highdensitylipopro-tein，HDL)、低 密 度 脂 蛋 白 (lowdensitylipoprotein，LDL)、丙 二 醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)試劑盒均由南京聚力生物醫學工程研究所提供。

1.1.3 主要儀器 751型分光光度儀系意大利Maselli公司產品；日立7060全自動生化分析儀，日本產；TDL-5-A型離心機系上海安亭公司產品。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物模型的建立 取大鼠50只，其中40只采用楊鵬遠等介紹的方法喂食高脂飼料，即3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎飼料，在喂食開始時一次性腹腔注射維生素D3(300 000 IU/kg)后連續喂養7周，造成大鼠實驗性腦動脈硬化模型。另10只SD大鼠只喂常用飼料，作為正常對照組。

1.2.2 分組及給藥方法 將上述模型大鼠隨機分為4組，即模型組、辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號低劑量組、眩暈Ⅲ號高劑量組，每組10只。①正常對照組：只喂常用飼料，每日生理鹽水1 mL/kg灌胃1次，連續8周；②模型組：每日生理鹽水1 mL/kg灌胃1次，連續8周；③辛伐他汀組：每日辛伐他汀供試液按10 mg/kg灌胃1次，連續8周；④眩暈Ⅲ號低劑量組：每日眩暈Ⅲ號低劑量8 g/kg灌胃1次，連續8周；⑤眩暈Ⅲ號高劑量組：每日眩暈Ⅲ號高劑量16 g/kg灌胃1次，連續8周。

1.3 指標檢測

1.3.1 血清脂質水平的檢測 抽5 mL靜脈血，采用日立7060型全自動生化分析儀測定TC、TG、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。

1.3.2 腦組織氧化能力檢測 各組采用脫頸椎法處死大鼠，快速稱取腦組織濕質量，按質量與體積比(W∶V)1∶10加入冰生理鹽水勻漿。經3 000 r/min，離心15 min，離心半徑16 cm，取上清液。按照說明書步驟操作，用751型分光光度儀在325 nm處測MDA、SOD的活力。

1.3.3 腦血管病理形態學檢查 大鼠快速斷頭，開顱取大腦半球，置10%甲醛溶液中固定，脫水，包埋，冠狀連續切片，HE染色。光學顯微鏡觀察腦血管動脈粥樣硬化程度。

2 結果

2.1 各組大鼠血清脂質水平比較 與正常對照組相比，模型組TC、LDL-C、HDL-C水平均明顯上升(P＜0.01)；與模型組相比，辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號低劑量組及眩暈Ⅲ號高劑量組TC、LDL-C、HDL-C均顯著降低(P＜0.01)；辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號低劑量組及眩暈Ⅲ號高劑量組TC、LDL-C、HDL-C比較差異無統計學意義(P＞0.05，表1)。

2.2 各組腦組織SOD活力與MDA含量測定結果 模型組、辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號低劑量組及眩暈Ⅲ號高劑量組血清SOD活性均降低，與正常對照組相比差異均有高度統計學意義(P＜0.01)；辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號低劑量組及眩暈Ⅲ號高劑量組SOD水平與模型組相比差異有高度統計學意義 (P＜0.01)，且它們組間比較差異無統計學意義(P＞0.05)；模型組、辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號低劑量組及眩暈Ⅲ號高劑量組MDA含量均增高，其中模型組MDA含量增高最為顯著，與其他組相比差異有高度統計學意義(P＜0.01)，說明辛伐他汀、眩暈Ⅲ號可以增強SOD活性，抑制MDA含量(表2)。

2.3 腦血管病理形態學檢查結果 光鏡下病理組織學檢查結果顯示，與正常對照組比較，模型組大鼠的腦組織中的動脈血管內膜的內皮細胞呈廣泛性變性、壞死、脫落，管壁可見纖維帽樣堆積物芽狀突出和增生，表明腦血管動脈硬化癥狀形成。辛伐他汀組、眩暈Ⅲ號低劑量組及眩暈Ⅲ號高劑量組的上述病變情況明顯減輕，腦血管內皮基本完整，管壁的纖維帽樣增生也明顯減少，血管內堆積物芽狀突出和增生基本消失，表明用藥后明顯抑制了腦血管動脈硬化癥狀的形成(圖1)。

表1 各組大鼠血清脂質水平比較(±s，mmol/L，n＝10)

表1 各組大鼠血清脂質水平比較(±s，mmol/L，n＝10)

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，▲▲P＜0.01

組別 TC TG LDL-C HDL-C正常對照組 1.86±0.42 0.50±0.14 0.50±0.18 1.21±0.27模型組 4.17±0.96** 0.38±0.12* 1.87±0.60** 1.92±0.63**辛伐他汀組 2.43±0.54▲▲ 0.40±0.10 0.76±0.30▲▲ 1.39±0.28眩暈Ⅲ號低劑量組 2.36±0.43▲▲ 0.37±0.08 0.74±0.29▲▲ 1.31±0.36眩暈Ⅲ號高劑量組 2.38±0.46▲▲ 0.37±0.07 0.75±0.26▲▲ 1.33±0.32

表2 各組血清超氧化物歧化酶和丙二醛水平(±s，n＝10)

表2 各組血清超氧化物歧化酶和丙二醛水平(±s，n＝10)

注：與正常對照組相比，▲P＜0.01；與模型組相比，*P＜0.01

組別 SOD(NU/mL) MDA(nmol/mL)正常對照組 127.86±5.85 1.48±0.40模型組 70.20±5.76▲ 2.78±0.83▲辛伐他汀組 98.86±14.31▲* 1.78±0.49▲*眩暈Ⅲ號低劑量組 97.38±12.48▲* 1.69±0.48▲*眩暈Ⅲ號高劑量組 101.5±12.38▲* 1.70±0.52▲*

圖1 腦血管的病理形態學表現

3 討論

慢性腦供血不足 (chronic cerebral circulation insufficiency，CCCI)是由于腦動脈循環障礙引起的以頭暈、頭痛、失眠、健忘等為主癥的一種疾病[2]。本病是中老年人常見病、多發病，其早期臨床表現不典型，可有頭痛、頭暈、失眠、善忘、記憶力減退、易疲倦、嗜睡等。主要病因是腦大、中動脈的動脈粥樣硬化(可有不同程度的斑塊形成、血管狹窄)、彌漫性小動脈硬化和微動脈的玻璃樣變，年齡、肥胖、高血壓、糖尿病、血脂異常等是導致腦動脈硬化的主要危險因素[3]。長期處于腦供血不足的狀態，容易增加腦梗死、血管性癡呆(VD)、阿爾茨海默病(AD)及Binswanger病等疾病的發生率[4]。對于慢性腦供血不足的研究，做到改善臨床癥狀，預防其向嚴重腦血管病的進展是非常必要的，開發確切有效的防治藥物成為醫學界的重要課題。

慢性腦供血不足可歸于中醫學的“頭痛”、“眩暈”、“健忘”、“不寐”等范疇，與“中風”、“癡呆”有因果關系[5]。中醫藥的整體觀念以及多靶點作用，使其在治療缺血性腦血管病中具有一定優勢[6]。郝志漢[7]認為慢性腦供血不足的主要病機是血瘀，存在痰瘀互阻之證，治宜利濕化痰，活血祛瘀。

本文作者觀察到西醫的腦動脈粥樣硬化、腦供血不足，與中醫的痰濕中阻有相似的病理生理基礎[8]。認為痰瘀互結是腦供血不足的主要病機。痰為體內津液停聚而生，瘀乃血液停滯而成，津血同源于水谷精微，故痰瘀二者，互為因果，在生理上可以相互為用、相互轉化，在病理上亦可以相互影響。痰伏于血脈之中，影響氣機，氣機不利，則不能推動血液的正常運行，導致血液停滯于脈管成血瘀。而血液遲澀不暢，不能正常運行于脈中，壅滯氣機，則影響津液的流動，反而導致痰的生成，痰濁和瘀血相互影響，痰凝則血瘀，血瘀則挾痰滯，痰瘀互結，膠結難開，從而腦脈不通，清竅被壅，形成惡性循環，貫穿于腦供血不足的整個過程。

本文作者利用痰瘀互阻理論，研制了具有健脾祛痰、化瘀通絡作用的眩暈Ⅲ號中藥。脂代謝異常血清中TG、TC和LDL-C的升高是誘發動脈粥樣硬化的首要因素之一，它與血管內皮的損傷都是粥樣硬化形成的始動環節，也是整個疾病發展的關鍵[9]。MDA[10]作為氧自由基和生物膜不飽和脂肪酸發生脂質過氧化反應的代謝產物，其含量的變化可間接反映組織中氧自由基含量的變化，并間接反映細胞損傷的程度。SOD[11]的表達水平可反映機體內抗自由基水平的高低。本研究發現，與腦動脈硬化模型組相比，眩暈Ⅲ號組血脂水平顯著降低，SOD活性顯著增強，MDA含量受到顯著抑制。同時，腦血管動脈硬化病變情況明顯減輕，腦血管內皮基本完整，管壁的纖維帽樣增生也明顯減少，血管內堆積物芽狀突出和增生基本消失。顯示眩暈Ⅲ號可促進血清SOD活性，降低MDA的產生，減輕氧化應激，抗脂質過氧化反應從而保護血管內皮細胞功能，這可能是眩暈Ⅲ號減輕動脈粥樣硬化癥狀的機制之一。這就為臨床應用眩暈Ⅲ號治療腦供血不足提供了理論支持。

[1]Rahilly-TierneyCR，ArnettDK，North KE，etal.Apolipoprotein epsilon-4 polymorphism does not modify the association between bodymassindexand high-densitylipoprotein cholesterol：a cross-sectionalcohortstudy[J].Lipids Health Dis，2011，10(1)：167.

[2]闞保紅.慢性腦供血不足病因病機研究現狀[J].中醫學報，2010，25(3)：430.

[3]Li W，Tang C，Jin H，et al.Regulatory effects of sulfur dioxide on the development of atherosclerotic lesions and vascular hydrogen sulfide in atherosclerotic rats[J].Atherosclerosis，2011，215(2)：323-330.

[4]王磊，陳新龍，王華，等.慢性腦供血不足研究進展[J].中國康復理論與實踐，2009，15(4)：335.

[5]劉玉霞.“血管頭痛湯”治療慢性腦供血不足256例臨床觀察[J].江蘇中醫藥，2005，26(3)：19.

[6]孫強.慢性腦供血不足的基礎及臨床研究[J].中風與神經疾病雜志，2009，26(6)：765.

[7]郝志漢.從瘀論治慢性腦供血不足[J].中國民間療法，2010，18(9)：68.

[8]王育勤.萸竹定眩丸治療慢性腦供血不足30例療效觀察[J].中國社區醫師，2008，24(361)：40.

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Objective To study the therapeutic action and its mechanism of Xuanyun-Ⅲ on cerebral atherosclerosis(AS).Methods Fifty male adult SD rats were randomly divided into 5 groups：normal control group，model group，Simvastatin group，low-dose Xuanyun-Ⅲ group，and high-dose Xuanyun-Ⅲ group.Except the normal control group，the rats of the other groups were given an intraperitoneal injection dose of vitamin D3(300 000 IU/kg)at the beginning of feeding，together with high-fat feedstuff to set up rat models with cerebral arteriosclerosis.Gavage administration was conducted after seven weeks，while the normal control group and the model group were given distilled water gavage.After eight weeks，all rats were sacrificed，and the serum lipid and the biochemical criteria such as superoxide dismutase(SOD)，the content of Malondialdehyde(MAD)were detected in the brain tissues.Pathological examinations of cerebral vascular were performed as well.Results Xuanyun-Ⅲ can reduce serum lipid and the content of Malondialdehyde(MAD)，and improve the SOD activity(P＜0.05).Cerebral endarterium endothelial cells of the rats in the model group presented universal degeneration，necrosis，ablation，and atheromatous plaque formed.The above indexes were all improved after the treatment of Xuanyun-Ⅲ.Conclusion Xuanyun-Ⅲ can improve the serum lipid and oxidizability of the rats with cerebral arteriosclerosis，alleviate the pathological lesion of brain blood vessel，which shows that Xuanyun-Ⅲ can prevent and treat cerebral arteriosclerosis.

Cerebral arteriosclerosis；Animal model；Drug intervention；Rats

973國家重點基礎研究發展計劃資助項目(2004CB720302)

劉式威

1005-619X(2013)05-0396-03

2013-03-23)

·療養·