c16000生化分析系統檢測肌酸激酶的可報告范圍評價

顏綿生 梁鑒波 王松子 蒙積麗

分析測量范圍(AMR)和臨床可報告范圍(CRR)是反映分析方法及檢測系統分析性能的重要指標。國際標準化組織頒布的《醫學實驗室質量和能力的專用要求》(ISO 15189)和中國《醫療機構臨床實驗室管理辦法》均要求，實驗室必須對引進或改變的檢測系統或方法的主要分析性能進行驗證或評價，證實其能夠達到臨床檢測所要求的標準后方可用于臨床檢測［1］。盡管各大試劑廠家提供了相應的參數，但此類參數在不同條件的實驗室是否適用仍需要驗證。

肌酸激酶(CK)是一種人體組織的細胞酶，主要存在于骨骼肌和心肌中，故在急性心肌梗死(AMI)、肌肉疾病與腦血管意外等疾病中CK顯著升高。當CK濃度超過分析測量的線性范圍時需要對樣本進行稀釋，但由于檢測系統多種條件的限制，超出線性范圍的檢驗結果是否準確、是否能夠為臨床提供有效準確的信息。所以，為了驗證這個問題及滿足臨床的需要，本文通過對中山大學附屬第一醫院生化室2012年6月份至11月份符合試驗要求的標本進行肌酸激酶(CK)分析測量，評價CK的臨床可報告范圍。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑 儀器:雅培Architect c16000全自動生化分析儀(雅培制藥有限公司，美國);試劑:肌酸激酶檢測試劑盒(批號:YZB/JAP 4091-2008，日本 SEKISUI MEDICAL CO);質控品:多項目生化校準品(批號:161452，德國羅氏公司)。

1.1.2 標本收集與保存 均取自中山大學附屬第一醫院日常工作中血清CK活性高值和低值的臨床標本，標本放＜-18℃保存(＜1個月)。高值的標本均超出或接近此項目的最高線性范圍，低值的樣本均在此項目的最低線性范圍附近。

1.2 試驗方案

1.2.1 最大允許稀釋度試驗［2，3］選取CK濃度超出或接近檢測范圍高限的臨床混合血清標本1(2444.0 U/L)和混合血清標本2(3367.5 U/L)兩份標本，用生理鹽水對所選取的兩份樣本分別進行 2，4，8，16，32，64，128 倍稀釋。各樣本分別測定3次，取均值，計算稀釋回收率，稀釋回收率=(測量值均值/預期值均值)×100%，以重復性CV值＜5%、回收率在90% ～110%以內為可接受，確定最大稀釋倍數。

1.2.2 分析靈敏度試驗［3，4］選取CK濃度低于檢測范圍低限的標本，也就是低值混合血清標本(19.0 U/L)，用生理鹽水對樣本分別進行 1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9 不同倍數稀釋，使其最低濃度接近0。在儀器上分別對不同倍數稀釋樣本連續測定10次，計算其均數、標準差及變異系數(CV%)，樣本的變異系數最接近20%所對應的濃度即為功能靈敏度。

1.2.3 分析測量范圍試驗［5，6］本實驗參考EP6-A文件，采用高值標本H與低值標本L按6L，5L+1H，4L+2H，3L+3H，2L+4H，1L+5H，6H的比例配制成系列活性濃度樣品，充分混勻，各樣品重復3次檢測，收集處理數據。以X表示預期值，Y表示測量值，將所測結果作散點圖，對數據進行回歸統計。

1.2.4 臨床可報告范圍試驗 結合功能靈敏度、最大稀釋度以及分析測量范圍確定臨床可報告范圍。其下限為功能靈敏度，上限為分析測量范圍上限乘以最大稀釋度。

1.2.5 統計學方法 本文數據分析均使用Microsoft Office Excle 2003軟件統計。

2 結果

2.1 最大允許稀釋度試驗結果 混合血清標本1和混合血清標本2按上述方法測定，結果見表1。根據實驗室檢測能力，CK回收率在90% ～110%為可接受，故本次試驗的最大允許稀釋度為1:16。

表1 CK稀釋回收率測定結果

2.2 分析靈敏度試驗結果 低值混合血清標本(19.0U/L)按上述方法測定，記錄測定值，結果見表2。功能靈敏度(Functional Sensitivity，FS)以天間重復CV%為20%時，對應檢測限樣品具有的平均濃度即為檢測系統或方法可定量報告分析物的功能靈敏度［4］。由表2數據可知本實驗室雅培Architect c16000全自動生化分析系統檢測CK的功能靈敏度為2.0U/L。

表2 CK功能靈敏度結果

2.3 分析測量范圍試驗結果 取高值混合血清標本H(3365.0 U/L)和低值混合血清標本L(19.0 U/L)，按上述方法測定。預測值為X，測量值為Y，在Microsoft Excel 2003上作直線回歸，預期值與測量值的散點圖如圖1。從下述直線回歸結果得知，R2=0.9994，說明組成回歸線的所有數據點緊緊貼近回歸線，預期值與測量值之間相關性極好;b為1.0014接近于1，且a與0差異無統計學意義(P＞0.05)，可判斷血清CK的AMR在6～2500 U/L之間呈良好線性，與廠家聲明基本一致。

2.4 臨床可報告范圍試驗結果 分析測量范圍上限乘以最大稀釋度為臨床可報告范圍上限，本實驗中其結果為:2500×16=40000，結合功能靈敏度為2.0 U/L。本檢測系統測定CK的臨床可報告范圍為2.0～40000 U/L。

圖1 分析測量范圍線性結果

3討論

ISO 15189醫學實驗室質量和能力認可準則、CAP認證標準以及CLIA'88都對醫學實驗室在引進或改變檢測系統時需要進行性能評價作出了要求?？蓤蟾娣秶菣z測系統的重要分析性能之一，而可報告范圍的評價應當包括方法的可報告范圍，即分析測量范圍(AMR)和臨床可報告范圍(CRR)［7］。但是由于各個實驗室的實驗條件存在較大的差異，所以有必要定期對包括精密度、準確度、分析測量范圍、臨床可報告范圍及參考區間在內的檢測系統性能進行評價或驗證。

當前，各實驗室均采用室內質控、室間比對等手段對檢測系統的精密度和準確度進行評估和監控。但分析測量范圍和臨床可報告范圍兩項指標的評價和驗證容易受到忽視。AMR指對沒有進行任何預處理(稀釋或濃縮)的樣本，分析方法能夠直接測定出的濃度范圍，也就是系統最終的輸出值(活性或濃度)與被分析物的活性或濃度成線性比例的范圍，它反映整個系統的輸出特性。CRR是檢測系統的重要分析性能之一，是指分析方法中可采用標本的稀釋、濃縮或其他預處理用于延長直接的分析測量范圍下的分析物值的范圍，生化定量檢測中的酶學指標常常有高于AMR的，因此驗證CRR也是非常重要的，其建立與功能靈敏度、最大允許稀釋度以及分析測量范圍密切相關。驗證分析測量范圍的目的是為了明確該方法的最高和最低檢出限附近的測定值之間是否呈線性關系。而對于很多超出線性范圍的檢測值，實驗室可通過驗證項目的最大稀釋度結合功能靈敏度和AMR上限來計算該項目的臨床可報告范圍。但在確定臨床可報告范圍時，一定要結合實際臨床可能出現的濃度，以避免一些荒誕值報告給臨床。

AMR必須至少每6個月重新驗證一次，以及在主要系統配件上發生改變或主要分析試劑批號改變時也應重新驗證［8］。如果驗證未通過，應采用新鮮或備用驗證材料重復AMR驗證。重復驗證失敗，有可能表明檢測系統不穩定，應努力排查解決問題，可采取維護、再次校準和進行校準驗證等措施。重復檢測AMR驗證材料上限值均告失敗，有可能存在線性損失，可能需要降低AMR上限。反之，如果是下限值失敗，有可能存在低值精密度損失，應通過定量極限研究予以查證核實。

EP6-A指南采用多項式回歸分析，彌補了EP6-P方案在統計學上存在的明顯缺陷，多項式回歸分析方法經過CAP的多年實踐，得到多數學者的認可，被認為是目前為止分析測量范圍評價中最好的統計學方法，因而得到大量的應用。EP6-A指南推薦用高值和低值濃度的樣本按比例精確配成等間距的不同濃度樣本，但等間距不是必需的，只要各樣本間的關系已知，配成特殊濃度的樣本也可以接受分析用于驗證的材料。

實驗程序設計的幾個考慮因素:實驗順序為最大稀釋度試驗、功能靈敏度試驗、線性試驗，因為只有通過最大稀釋度試驗了解該檢測系統對標本的最大允許稀釋倍數，才能在設計功能靈敏度和線性試驗時確定檢測限樣品的系列稀釋倍數［3］。因此根據實驗室的檢測能力，此次實驗基于雅培Architect c16000全自動生化系統對CK檢測的結果為回收率在90%～110%為可接受的最大允許稀釋度(1∶16)，變異系數最接近20%所對應的濃度即功能靈敏度(2.0 U/L)，分析測量范圍在6～2500 U/L之間呈良好線性，與廠家聲明基本一致，從而建立了中山大學附屬第一醫院該檢測系統的臨床可報告范圍為2.0～40000 U/L。同時建議臨床實驗室在編寫標準化操作程序時，有必要規范樣本稀釋程序，確保檢測結果的可靠性。

［1］ 嚴海忠，王偉佳，張秀明，等．化學發光免疫法檢測BNP的分析測量范圍和臨床可報告范圍研究．現代檢驗醫學，2011，26(2):40-45.

［2］ 姚少羽，孫艷虹，高玲，等．Vitros950生化檢測系統最大稀釋度測定．中國實用醫藥，2008，3(34):31-34.

［3］ 畢波，呂元．定量檢測方法學性能驗證的系統設計．中華檢驗醫學雜志，2007，30(2):143-145.

［4］ 馮仁豐．臨床檢驗質量管理技術基礎．第2版．上?？茖W技術文獻出版社．2009:115.

［5］ National Committee for Clinical Laboratory standards．EP6-A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures(S)，NCCLS，Wayne Pennsylvania，2003.

［6］ Jhang JS，Chang CC，Fink DJ，et al．Evaluation of linearity in the clinical laboratory．Arch Pathol Lab Med，2004，128(1):44-48.

［7］ 李俊立，彭長華，王昌富，等．BACKMANLX 20生化檢測系統ALT可報告范圍的評價．現代檢驗醫學雜，2010，25(6):71-73.

［8］ 潘超，王文龍．定量檢測分析測量范圍(AMR)驗證．論文匯編(第五屆全國臨床實驗室管理學術會議)，2009:258-259.