不同部位和顆粒大小對靈芝茶藥用成分的影響*

袁學軍，陳忠蔭，陳光宙，陳永敢，范平杰

(瓊州學院生物科學與技術學院，海南 三亞 572000)

靈芝素有“仙草”之譽。靈芝的藥理成分非常豐富，其中有效成分主要包括靈芝多糖、靈芝多肽、三萜類、16種氨基酸、蛋白質、甘露酣、香豆精苷、生物堿、有機酸微量元素等?，F代藥理與臨床實踐進一步證實靈芝多糖是靈芝扶正固本，滋補強壯，延年益壽的主要成分，對人體具有雙向調節作用，所治病種，涉及心腦血管、神經、內分泌等各個系統，尤其對腫瘤、肝臟病變、失眠以及衰老防治作用十分顯著，且無毒副作用［1－4］。目前，國內外學者已經對藥用靈芝中活性成分進行不同的研究，包括靈芝活性蛋白［5－8］、靈芝多糖［9－11］、靈芝三萜［12－14］和靈芝酸［15－17］等，栽培條件對靈芝活性成分的影響也有部分報道［18－21］。到目前為止靈芝的不同部位和破碎后不同顆粒大小對靈芝活性成分的影響鮮有報道。

1 材料與方法

1.1 材料和藥品

1.1.1 材料準備

7號靈芝采收后及時將污物清理干凈，60℃條件下，在干燥箱內干燥24 h，選擇15個完整的子實體，粉碎，用篩孔直徑分別為0.075 mm、0.1 mm、0.25 mm、0.5 mm、1.0 mm、2.0 mm過篩，均取3 g，最后用帶拉鏈的塑料帶密封備用。

1.1.2 藥品

葡萄糖由廣州化學試劑廠提供;熊果酸和香草醛由上海晶純試劑有限公司提供;牛白蛋白和考馬斯亮藍G250由國藥集團化學試劑有限公司提供;活性炭、蒽酮、三氯甲烷、磷酸、冰乙酸、氯化鈉、硫酸銨、碳酸氫鈉、鹽酸、氫氧化鈉、無水乙醇、硫酸和高氯酸均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 測定方法

靈芝多糖的測定參考蒽酮－硫酸法［22］，用葡萄糖做的標準曲線為:y=0.7622x+0.0122，R2=0.998。

靈芝蛋白的測定參考考馬斯亮藍G－250法［22］，用牛血清白蛋白做的標準曲線為:y=0.6643x+0.0009，R2=0.999。

靈芝三萜的測定參考直接光度法測定法［23］，用熊果酸做的標準曲線為:y=0.4144x－0.01，R2=0.9934。

1.2.2 統計分析

用南京農業大學王韶華教授發明的Stst軟件進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 不同部位對靈芝茶活性成分的影響

靈芝不同部位對靈芝藥用活性成分的影響見表1。

表1 不同部位對靈芝活性成分的影響

結果顯示，多糖的含量3個處理相比差異極顯著，菌柄多糖含量顯著高于菌蓋;蛋白質的含量3個處理相比差異極顯著，菌柄蛋白質含量也顯著高于菌蓋;完整的子實體中三萜含量與菌蓋中相比無差異，但與菌柄相比有顯著性差異，但菌蓋中三萜含量高于菌柄。總之，多糖和蛋白質的含量柄中均高于菌蓋，但三萜的含量菌蓋高于菌柄。

2.2 不同顆粒大小對靈芝茶活性成分的影響

不同顆粒大小對靈芝茶活性成分的影響見表2。

表2 不同顆粒大小對靈芝茶藥用成分的影響

結果顯示，多糖的含量6個處理相比差異極顯著，其中0.075 mm～0.1 mm處理對多糖含量最大，其次是0.1 mm～0.25 mm處理，但1 mm～2 mm處理對多糖含量影響最小，隨著顆粒的增大，多糖含量基本呈逐漸降低的趨勢;蛋白質含量不同處理之間有的無差異，有的差異極顯著，其中0.075 mm～0.1 mm處理的蛋白質含量最高，隨著顆粒的增大，蛋白質含量呈明顯的降低趨勢;三萜含量6個處理相比差異極顯著，呈明顯的降低趨勢?？傊?，隨著顆粒的增大，靈芝多糖、蛋白、三萜的含量基本呈逐漸降低的趨勢。

3 討論與結論

靈芝多糖、蛋白、三萜類化合物是靈芝中的主要活性物質，也是衡量靈芝質量的重要指標［24］。靈芝不同部位藥用成分含量的比較研究，到目前為止還沒有文獻報道，無法與其他類似的試驗數據比較。本實驗研究的結果表明，在菌蓋和菌柄中，多糖、蛋白質、三萜3種藥用成分的含量差異性均極顯著，多糖和蛋白在菌柄中含量高，而三萜在菌蓋中含量高。顆粒大小對靈芝茶藥用成分影響較大，隨著顆粒的增大，靈芝多糖、蛋白質、三萜的含量基本呈逐漸降低的趨勢，從藥用和經濟角度考慮，靈芝茶顆粒大小選擇在0.1 mm～0.075 mm較好。本研究為提高靈芝茶的質量提供技術參考依據。

［1］ YUE Qingxi，GUAN Shuhong．Interaction of Ganoderma triterpenes with docetaxel and cisplatin in cytotoxicity against human carcinoma cells［J］．Chinese Journal of Natural Medicines，2008，6(5):367－371．

［2］ Saltarelli R．Food chemistry［J］．Contents Lists Available at Science Direct Food Chemistry，2009(2):143－151．

［3］劉存芳．靈芝營養成分綜述［J］．南江科技，2008(5):122－129．

［4］ Russell R，Paterson M．Ganoderma a therapeutic fungal biofactory［J］．Phytochermistry，2006(4):1985－2001．

［5］ Huie CW，Di X．Chromatographic and electrophoretic methods for Lingzhi pharmacologically active components［J］．J Chromatography B，2004，812(4):241－257．

［6］ Ngai PH，Ng TB．A mushroom(Ganoderma capense)lectin with spectacular thermostability，potent mitogenic activity on splenocytes and antiproliferative activity toward tumor cells［J］．Biochem Bioph Res Co，2004，314(4):988－993．

［7］ Tian YP，Zhang KC．Purification and characterization of a novel proteinase a inhibitor from Ganoderma lucidum by submerged fermentation［J］．Enzyme Microb Tech，2005，36(2):357－361．

［8］ Peng YF，Zhang LN．Characterization of a polysaccharide protein complex from Ganoderma tsugae mycelium by size exclusion chromatography combined with laser light scatter［J］．J Biochem Biophys Methods，2003，56(1－3):243－252．

［9］曹琦珍，林樹錢，王賽貞．靈芝多糖肽對人肺癌細胞侵襲的影響 ［J］．北京大學學報:醫學版，2007，39(6):653－656．

［10］李穎博，李宇華，王瑞．靈芝多糖對腫瘤細胞與內皮細胞相互作用的影響［J］．中國藥理學通報，2008，24(2):250－253．

［11］林華型．靈芝多糖抗腫瘤靶向作用機制研究進展［J］．細胞與分子免疫學雜志，2008，24(4):428－430．

［12］付立忠，吳學謙，李明焱，等．靈芝品種子實體多糖和三萜含量分析與評價 ［J］．中國食用菌，2009，28(4):38－40．

［13］林應興．靈芝子實體不同生長階段多糖與三萜類物質含量的研究 ［J］．亞熱帶農業研究，2009，5(3):152－154．

［14］楊小英，竹劍平．破壁與不破壁靈芝孢子粉三萜類化合物含量比較 ［J］．藥物分析雜志，2010，30(11):2227－2228．

［15］楊海龍，吳天祥，章克昌．靈芝酸的分子結構與生物活性的關系 ［J］．無錫輕工大學學報，2002，21(3):249－253．

［16］周昌艷，唐慶九，楊焱，等．靈芝中有效成分靈芝酸的抑制腫瘤作用研究 ［J］．菌物學報，2004，23(2):275－279．

［17］劉海良，宋愛榮，黃芳．樹舌靈芝發酵液中靈芝酸的提取及測定 ［J］．食用菌學報，2008，15(3):68－71．

［18］袁學軍，陳永敢，陳光宙，等．不同栽培方式對靈芝活性成分的影響 ［J］．中國食用菌，2012，31(5):18－19．

［19］林旭東，康孟利，凌建剛，等．靈芝保健袋泡茶的研制 ［J］．農產品加工，2010，(2):30－35．

［20］王富偉，甘炳成，張小平．不同靈芝主要活性成分差異性分析［J］．安徽農業科學，2010，38(6):2916－2918．

［21］林樹錢，王賽貞，林志彬，等．草栽與段木栽培的靈芝活性成分的分離與鑒定 ［J］．中草藥，2003，34(10):872－874．

［22］李合生．植物生理生化實驗原理和技術 ［M］．北京:高等教育出版社，2000．

［23］王江海，袁建平，徐世平，等．薄層色譜－光度法測定靈芝孢子油中的總三萜含量［J］．中國食品學報，2004，4(3):76－78．

［24］黃小琴，鄭林用，彭衛紅．靈芝多糖與三萜類的提取純化工藝研究進展 ［J］．食用菌學株報，2005，12(3):56－62．