系統性紅斑狼瘡患者外周血T淋巴細胞亞群的臨床分析

蔡茂文，張 晶，周 彬

(1.四川省寧南縣人民醫院內科，四川 寧南 615400;2.四川省醫學科學院·四川省人民醫院風濕免疫科，四川 成都 610072)

為了解系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)患者外周血T淋巴細胞的變化，探討T淋巴細胞與SLE疾病活動指標的關系，本研究采用流式細胞術檢測了76例SLE患者(低度活動組與高度活動組)外周血 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+細胞百分率及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值，并與同期36例健康體檢女性(健康對照組)比較，同時與SLE疾病活動指數(systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)評分(SLEDAI)、24 小時尿蛋白、血沉(SER)、補體C3、補體C4進行相關性分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 76例SLE患者均為女性，均為四川省人民醫院風濕免疫科2011年11月至2012年10月的住院患者，年齡17 ～79 歲［(34.67±10.67)歲］，其中20～40歲48例。所有病例均符合2009系統性紅斑狼瘡國際臨床合作組(Systemic Lupus International Collaborating Clinic，SLICC)修定的美國風濕病學會(American College of Rheumatology，ACR)系統性紅斑狼瘡分類標準［1］。疾病活動性參照中華醫學會風濕病學分會《系統性紅斑狼瘡診斷及治療指南》［2］，SLEDAI 0～4 分為穩定期，5～9 分為低度活動期，≥10分為高度活動期。76例SLE分為低度活動組(36例)和高度活動組(40例)。健康對照組年齡16 ～76 歲［(35.50±12.12)歲］，性別和年齡與低度活動組、高度活動組差異均無統計學意義(P ＞ 0.05)。

1.2 標本采集和檢測方法 采集外周血標本2 ml，EDTA-K2抗凝，EDTA-K2抗凝血 100 μl加入實驗管和空白對照管。于實驗管加入20μl CD3-Per-CP、CD4-FITC和CD8-PE鼠抗人單克隆抗體，4℃避光孵育30分鐘。染色后將實驗管和空白對照管在室溫下分別加入紅細胞裂解液2 ml，混勻后室溫孵育15分鐘。裂解后兩個試管分別在轉速1500 r/min條件下離心3分鐘，棄去上清液，得到白細胞沉淀。使用磷酸鹽緩沖液洗滌后，在轉速1500 r/min離心3分鐘，反復兩次。最后分別加入600μl 4%多聚甲醛固定液混勻，制成單細胞懸液上機分析。

1.3 統計學方法 采用 SPSS 18.0統計軟件處理。數據以均數±標準差表示，組間比較用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義;用Pearson積差相關原理進行兩兩比較，判斷指標間相關性。

2 結果

2.1 外周血T淋巴細胞的變化 76例SLE患者中57例存在T淋巴細胞亞群異常，占75.0%。分組比較:低度活動組與高度活動組間 CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+/CD3+CD4+差異均具有統計學意義(P＜0.05);兩組SLE患者與健康對照組比較，CD3+差異均無統計學意義;而CD3+CD4+細胞均減低，CD3+CD8+細胞均增高，差異均有統計學意義(P＜ 0.01)，CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均降低，且多數(34/57，占59.6%)比值倒置(即:比值＜ 1)，差異有統計學意義(P＜0.01)。結果見表1。

表1 SLE患者與健康對照組淋巴細胞亞群比較

2.2 SLE患者T細胞亞群與疾病活動指標的相關性分析 SLE患者CD3+CD4+與SLE疾病活動指標SLEDAI評分、24 h尿蛋白存在顯著的負相關，與補體C3、C4存在顯著的正相關;CD3+CD8+與C4存在顯著負相關，與 SER存在顯著的正相關;CD3+CD4+/CD3+CD8+比值與SLEDAI存在顯著的負相關;而CD3+則無明顯相關性。結果見表2。

表2 SLE患者淋巴細胞亞群與疾病活動指標的相關性分析 (r值)

3 討論

SLE是一種好發于育齡期女性的累及多系統的自身免疫性疾病［3］，機體在多種因素作用下，正常的自身免疫耐受機制被破壞，B細胞功能亢進，過度增殖，產生多克隆免疫球蛋白和多種自身抗體，從而損傷自身組織。T細胞亞群異常在SLE發病中的作用一直是國內外風濕病學專家研究的熱點問題，但結果不太一致。多數人認為B細胞的高度活化是以T細胞異常為基礎且在其誘導下產生的。T淋巴細胞亞群對機體免疫功能的穩定起著重要的調節作用，而CD4、CD8亞群的數量和功能異常則是T細胞免疫功能異常的重要體現。過去多數研究認為［4］在SLE活動期，CD4+(輔助/誘導 T細胞)升高，CD8+(抑制/殺傷T細胞)下降，CD4+/CD8+比值升高，尤其是CD8+下降引起B細胞多克隆抗體激活及體液免疫異常。但近年研究［4］顯示，活動期SLE患者外周血CD4+細胞及CD4+/CD8+T細胞比值降低，而CD8+T細胞正常或升高。本研究結果也顯示活動期SLE患者的CD8+細胞與健康對照組比較明顯升高(P＜0.01)，CD4+細胞數明顯降低(P＜0.01);CD4+/CD8+比值降低(P ＜ 0.01);CD3+差異無統計學意義(P＞0.05)，表明SLE患者存在T細胞平衡紊亂［5，6］。

有進一步研究發現CD8+細胞亞群具有明顯的異質性，活動期SLE患者的CD8+細胞幾乎全部被反抑制性T細胞(CD8+VV+)取代，不能顯示抑制功能，而阻斷了 CD8+細胞對 CD4+細胞的抑制作用［7］，而其中CD8+VV+的增加可以直接作用于Th細胞，發揮正向調節作用使CD8+細胞增多。另一方面CD4+細胞減少，主要原因是CD4+亞群中的抑制誘導T細胞降低，T細胞不能誘導CD8+細胞對B細胞產生抑制作用［8］，因此活動期SLE患者CD4+細胞降低，CD8+細胞正常或升高，仍然表現為體液免疫的亢進，B細胞增殖并產生大量的自身抗體。但關于SLE患者T淋巴細胞的變化與疾病活動度(SLEDAI評分、血沉、補體)及腎臟損害之間的關系，報道較少。

本研究中活動期SLE患者有75.0%存在T淋巴細胞亞群異常，與相關報道有所差異［9］。而SLE高活動期組與低活動期組比較，CD3+CD4+細胞數降低與CD3+CD8+細胞數升高均更明顯 (均P＜0.05)，二者比值也明顯降低(P＜0.05)。提示活動期SLE患者體內T細胞亞群數量分布存在異常，并且與疾病活動度有密切相關性，這與Maeda等［10］的研究結果一致。

本研究中CD3+CD4+與SLEDAI評分、24 h尿蛋白存在顯著的負相關，與補體C3、C4顯著正相關;CD3+CD8+與C4存在顯著負相關，與SER正相關;CD3+CD4+/CD3+CD8+比值與SLEDAI評分存在負相關。故監測T淋巴細胞亞群的表達對SLE的治療及評估有一定指導意義。

總之，SLE患者存在T淋巴細胞的異常表達，檢測外周血淋巴細胞亞群的數量變化，有助于全面了解患者的免疫狀態，對正確判斷病情和指導臨床治療有重要意義。

［1］呂良敬，鮑春德.系統性紅斑狼瘡分類標準的變遷與啟示［J］.診斷學理論與實踐，2010，9(4):304-305.

［2］中華醫學會風濕病學分會.系統性紅斑狼瘡診斷及治療指南［J］.中華風濕病學雜志，2010，14(5):343.

［3］龍麗，周彬.狼瘡性腎炎治療的臨床研究進展［J］.實用醫院臨床雜志，2011，8(2):25-28.

［4］Raziuddin S，Nur MA，Wabel AA.Increased circulating HLA-DR+CD4+T cells in systemic lupus erythematosus:alterations associatedwith prednisolone therapy［J］.Scand J Immunol，1990，31(2):139.

［5］陳捷，王蘭蘭，劉瑾.SLE患者T細胞亞群功能紊亂與Th1、Th2細胞因子偏移的研究［J］.華西醫學，2004，19(3):409-411.

［6］Hu S，Tao D，He P.Immunophenotyping of lymphocyte T and B in the peripheral blood of systemic lupus erythematosus［J］.J Tongji Med Univ，2001，21(2):108-109.

［7］張冬青，王樹軍，馬安倫，等.SLE中的反抑制細胞與γδTCR陽性 T 細胞［J］.風濕病學雜志，1997，2(4):1.

［8］蔣明，孫華瑜，朱立平，等.系統性紅斑狼瘡患者外周血中的T4+2 h4+細胞的研究［J］.中華內科雜志，1991，30(7):426.

［9］張德杰，向陽，黃世林.73例系統性紅斑狼瘡患者淋巴細胞亞群分析［J］.檢驗醫學與臨床，2012，9(4):427.

［10］Maeda N，Sekigawa I，Iida N，et al.Relat ions hip between CD4+/CD8+T cell ratio and T cellactivation in systemic lupuserythematosus［J］.Scand JRheumatol，1999，28:166-170.