胡蘆巴總皂苷降低非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平及肝內脂質沉積

張 瑜 張?之 毛新民

本實驗旨在觀察胡蘆巴總皂苷（Trigonella foenum greacum，L Saponin，TFGs）對非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平的影響。

材料與方法

一、動物與試劑 健康Wister大鼠，雌雄各半，體重180～220g，由新疆醫科大學實驗動物中心提供。TGFs干燥粉末（昌吉衛生學校藥學組提供），易善復（北京安萬特制藥有限公司提供），膽固醇（天津市光復精細化工研究所提供），豬膽酸（北京奧博星生物技術責任有限公司提供），丙二醇（天津市化學試劑三廠提供），吐溫-80（上海山浦化工有限公司提供）。

二、非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立[1～7]將大鼠按體重和性別均衡地隨機分為6組，即鹽水組（10只）、模型組（10只）、易善復組（10只）和小、中、大劑量TFGs組（各10只）。易善復治療組大鼠給予易善復（142.5 mg.kg-1.d-1）灌胃，TFGs組大鼠給予不同劑量的 TFGs（60mg.kg-1.d-1、90mg.kg-1.d-1、120mg.kg-1.d-1）灌胃。鹽水組大鼠給予生理鹽水15ml.kg-1灌胃，其余各組大鼠給予高脂乳劑[8，9]（脂肪乳成分：每100ml脂肪乳中含10g膽固醇，30g豬油，3g膽酸，10ml吐溫-80，20ml丙二醇，蒸餾水加至 100ml）15ml.kg-1灌胃，每日下午一次，連續70天。自第71天起，對鹽水組和模型組大鼠在繼續每天下午給予高脂乳劑的同時，每天上午給予生理鹽水15ml.kg-1.d-1灌胃，易善復組大鼠給予易善復（142.5 mg.kg-1.d-1）灌胃，小、中、大劑量TGFs組給予胡蘆巴總皂苷60mg.kg-1.d-1、90mg.kg-1.d-1、120mg.kg-1.d-1灌胃，持續 35天。實驗周期共105天。

三、肝指數測定 在末次給藥后，動物禁食（不禁水）12小時。在稱體重后處死動物，打開腹腔，取出完整肝臟，用生理鹽水沖洗干凈，隨后稱重，以肝臟重量（g）/大鼠體質量（g）作為肝指數（g/g）。

四、血清和肝勻漿脂質測定 采用酶比色法檢測（上海科華生物工程股份有限公司）。

五、肝組織病理學檢查 常規進行。

六、統計學處理 采用SPSS15.0統計軟件，計量資料以（±s）表示，各組間均數的比較采用方差分析，檢驗水準為α＝0.05。

結果

一、胡蘆巴總皂苷對大鼠肝脂肪變的影響 肉眼觀，模型組動物肝臟體積增大，顏色淺黃，切面油膩感。在光鏡下，可見肝細胞內出現大小、數量不等的類圓形脂滴，呈灶狀或片狀分布，占50%～60%，肝小葉中央區肝細胞脂肪變性嚴重，出現肝細胞點狀壞死，有嗜中性粒細胞浸潤（圖1、2）。

圖1 模型組大鼠肝組織病理學表現（HE，250×）

圖2 大劑量TFGs處理組大鼠肝組織病理學表現（HE，250×）

二、胡蘆巴總皂苷對非酒精性脂肪肝大鼠肝指數及肝勻漿脂質的影響 見表1。

表1 TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠肝指數及肝勻漿脂質（±s）的影響

表1 TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠肝指數及肝勻漿脂質（±s）的影響

與鹽水組比，①P<0.01；與模型組比，②P<0.01

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三、TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠血脂含量的影響 見表2。

表2 TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠血脂（±s）的影響

表2 TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠血脂（±s）的影響

與鹽水組比，①P<0.01；與模型組比，②P<0.05

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討論

非酒精性脂肪肝的發病機制復雜，至今尚缺乏充分解釋其所有臨床現象的理想學說，目前的研究認為主要與脂肪代謝異常、胰島素抵抗、脂肪異位、脂肪激素和脂肪因子、游離脂肪酸、線粒體功能障礙、氧應激、腸道菌群紊亂和遺傳等因素有關[10，11]。其中脂肪代謝異常與飲食誘發的非酒精性脂肪肝密切相關。肝合成游離脂肪酸增加或由碳水化合物合成TG，脂肪酸在肝線粒體β氧化減少，極低密度脂蛋白合成和分泌減少均可破壞脂肪組織及脂肪細胞與肝細胞之間脂肪代謝的動力循環平衡[12]，使脂肪在肝臟中異常沉積，而血脂與脂肪肝的關系密切已經成為共識。血脂升高以TG升高為主[13～15]，而TG升高與脂肪肝的程度無明確的線性關系。本實驗采用的高脂乳劑灌胃制造大鼠非酒精性脂肪肝動物模型，說明與飲食誘發的非酒精性脂肪肝關系密切。

模型組大鼠肝細胞內出現大小和數量不等的類圓形脂滴，呈灶狀或片狀分布，肝小葉中央區肝細胞脂肪變性明顯，出現肝細胞點狀壞死，有嗜中性粒細胞浸潤，說明建立的非酒精性脂肪肝模型成功。我們還直接檢測了大鼠肝組織脂質含量，發現模型組大鼠肝組織TC和TG含量顯著高于正常組大鼠，血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量均明顯高于正常組大鼠，提示該模型為伴有高脂血癥性非酒精性脂肪肝動物模型。

TFGs對非酒精性脂肪肝大鼠的治療作用表明，TFGs能顯著降低模型組大鼠肝指數，且隨劑量的增加有劑量依賴的趨勢，說明TFGs能減輕肝腫大。TFGs能顯著降低模型組大鼠血清 TC、HDL-C、LDL-C含量，同時病理結果發現TFGs可使模型組肝細胞脂肪變在程度和范圍上均較模型組大鼠明顯減輕，且肝細胞水腫亦減輕，說明TFGs主要通過改善機體脂質代謝紊亂，改善大鼠肝臟中脂質沉積，但TFGs不能降低血清TG，原因不清。

本模型中存在高密度脂蛋白升高的問題，可從以下兩個方面考慮：①據許敏等報道，高密度脂蛋白可分為5種亞型，即 HDL-2a、HDL-2b、HDL-3a、HDL-3b、HDL-3c[17]。而徐燕華等報道，高脂血癥患者血清中前 β-1HDL、前 β-2HDL、HDL-3c、HDL-3a、HDL-3b含量顯著增加，而HDL-2a、HDL-2b含量顯著減少。高脂血癥患者血清TG含量與前β-1HDL、前β-2HDL、HDL-3a、HDL-3b水平呈正相關，而與HDL-2a、HDL-2b水平呈負相關；TC含量與前β-1HDL、HDL-3b水平呈正相關，而與HDL-2b水平呈負相關；LDLC含量與HDL-3b水平呈正相關[15]。高脂乳劑造成大鼠血清TC、TG、LDLC含量顯著增加，會引起 β-1HDL、前 β-2HDL、HDL-3a、尤其 HDL-3b的增加，使總膽固醇增加。而可能大鼠血清中這些HDL亞型的比例與人不同，HDL-2a、HDL-2b比例偏低，兩者的減少量不能抵消其它HDL亞型的增加量。②血清中TC含量的升高，能上調高密度脂蛋白受體，使肝細胞膜高密度脂蛋白受體活性升高[18]，從而反饋調節使血清高密度脂蛋白升高，以便更多地把體內膽固醇轉運至肝臟代謝。

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