創面用復方噴霧膜劑的制備及其性質研究

王超君，谷 娜，孫義峰，朱羞陽，陳 博

(本文編輯:張仲書; 英文編輯:王建東)

開發小型便攜的創面應急處理藥物，發揮“救治前伸”作用，是提升戰場傷病救治能力的重要保障［1］。在自然災害及安全事故的救治中，采取及時有效的傷口自救措施，亦可降低傷殘率和死亡率。

三七總皂苷(panax notoginseng Saponins，PNS)含人參皂苷(ginsenoside Rg1，GRg1)和三七皂苷R1等單體，具有止血、抗菌、擴血管和抗氧化等藥理作用［2］。白及多糖(bletilla striata gelatin，BSG)是一種天然雜多糖，具有抗菌消炎、消腫生肌等效果［3］。

本課題將PNS和BSG與噴霧膜劑相結合，制備新型創面用復方噴霧膜劑(compound spraying film，CSF)，并對其性質和療效進行初步分析，為進一步研究奠定基礎。

1 材料與儀器

泊洛沙姆407(poloxamer 407，P407，德國 BASF公司);PNS(云南植物藥業有限公司，批號HB20121106，純度87%);GRg1對照品(南京澤朗醫藥科技有限公司，純度98%);BSG(南京澤朗醫藥科技有限公司，批號ZL20121116，純度51%);乙腈、甲醇為市售色譜純。

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國Agilent公司);Agilent SB-C18分離柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);BS224S電子天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司);85-2型數顯恒溫磁力攪拌器(杭州儀表電機有限公司);SORVALL ST 16R離心機(美國Thermo Scientific公司)。

SD大鼠8只，體重200～230 g，雌性［浙江醫科院，許可證號SCXK(浙)20080033］。

2 實驗方法

2.1 CSF 的制備 分別稱取 15 g，18 g，20 g，25 g，29 g P407，各加蒸餾水至100 ml充分攪拌，得不同濃度的空白膠體溶液。稱取1g BSG以蒸餾水100ml加熱溶解，得1%BSG溶液(g/v)。取10 ml BSG溶液，加入100 ml空白膠體溶液，攪拌均勻，再加入2 g PNS攪拌均勻，灌裝于噴瓶中，2～8℃冰箱保存備用。

2.2 成膜性能 取2.5 ml CSF于10 ml試管中，置于10℃水浴鍋中，每1 min升高1℃，當試管內容物倒置30 s不流動時，該溫度即為成膜溫度。另取2.5 ml CSF于10 ml試管中，置于37℃水浴鍋中，當試管內容物倒置不流動時，所需時間即為成膜時間。

2.3 機械性能 取15 ml CSF加入自制藥膜強度測定裝置(圖1)的圓筒內，37℃水浴成膜。砝碼重100 g，圓筒直徑為22mm，探頭小圓孔直徑為4mm。將砝碼置探頭上，以探頭受壓下降2 cm所需的時間為破碎時間，用以評價藥膜的強度［2-4］

圖1 藥膜強度測定裝置

2.4 含量測定 用HPLC法進行含量測定，流動相為水(A)-乙腈(B)溶液。時間:0～30 min;A:80%→50%，B:20%→50%;流速:1.0 ml/min;進樣量:10μl;檢測波長:203 nm;柱溫:35℃。

精密稱取GRg1對照品9.0 mg置于10 ml容量瓶中，加20%乙腈溶液稀釋定容，得對照品溶液。量取對照品溶液 0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 ml分置于5 ml的容量瓶，用20%乙腈溶液稀釋定容，用HPLC法進行含量測定，進樣并記錄色譜峰面積。以濃度(mg/ml)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，用Excel軟件進行線性回歸計算標準曲線。

精密稱取1.2 g CSF于25ml容量瓶，加入20%乙腈溶液溶解定容，3000 r/min，離心半徑9 cm，離心10 min，取上清液，過濾進樣。將峰面積代入標準曲線，得溶液濃度，計算CSF中GRg1的平均含量。

2.5 體外溶蝕行為和釋藥行為 稱取1.2 g CSF于25 ml量筒中，稱總重為M0。置于37℃水浴成膜，采用無膜溶出法［5］進行體外溶蝕和釋藥行為考察。以5 ml蒸餾水為溶出介質，37℃水浴靜置，定時取出全部介質，稱剩余重量為M，補液。按公式1計算累積溶蝕百分率(Qe)。按2.4方法測定各時間取樣中GRg1的濃度(Ct)，按公式2計算累積釋放百分率(Qm)［6］。以時間為橫坐標，以 Qe和 Qm為縱坐標，繪制體外經時溶蝕曲線和體外經時釋藥曲線。

2.6 體外釋藥機理 采用Excel軟件對Qe和Qm進行相關性分析，由相關系數(r)判斷關聯程度。將經時釋藥曲線分別用零級方程、一級方程、Higuchi方程、Ritger-Peppas方程等進行擬合［7］，由 r判斷最佳模型，分析釋藥機理。

2.7 實驗大鼠藥效學評價 8只大鼠以乙醚麻醉，8%硫化鈉背部凈毛，采用機械切割法在大鼠背部脊柱兩側，制備4個圓形創面(直徑約1.8 cm)，共制備機械創面30個。隨機分為3組:實驗組(給予CSF)、對照組一(給予復方水溶液)和對照組二(給予空白膠體溶液);每組10個創面。各組每天給藥一次，每次1.2 g，無菌凡士林醫用紗布包扎，單籠喂養。定時用透明膜沿創緣描記，稱重換算面積，計算愈合百分率。

3 實驗結果

3.1 成膜性能和機械性能 空白膠體溶液的濃度對其成膜溫度和成膜時間有明顯影響(表1)，隨著濃度的增大，成膜溫度下降，成膜時間變短。考慮到人體表膚溫度為30℃左右，載藥亦可能使體系的成膜溫度略有升高，優選濃度為20%的空白膠體溶液(成膜溫度為25℃左右)進一步制備CSF。

與20%空白膠體溶液相比，實際制備的CSF的成膜溫度(30±2)℃略有升高，成膜時間略有延長(29±6)s，但仍具備臨床使用的可行性。破碎時間實測為(125±12)s，提示強度符合使用要求。

表1 空白膠體溶液濃度對CSF成膜性能的影響(x ± s，n=3)

3.2 含量測定 GRg1出峰時間約10 min，分離度良好(圖 2)。標準曲線為:y=3312.1x+5.1187，r=0.9999，說明在0.018 ～0.360 mg/m l的濃度范圍內，線性良好。實測CSF中GRgl的含量為(5.82±0.08)mg/g(n=3)。

圖2 高效液相色譜圖

3.3 體外溶蝕行為和釋藥行為 CSF的體外經時溶蝕曲線如圖3所示，12 h溶蝕超過30%，溶蝕百分率與時間線性相關。CSF的體外經時釋藥曲線如圖4所示，12 h釋藥超過30%，釋藥百分率與時間線性相關。

圖3 CSF經時溶蝕曲線(n=3)

圖4 CSF經時釋藥曲線(n=3)

3.4 釋藥行為及機理研究 Qe和Qm的線性方程為 y=1.0822x+0.617，r=0.9995，說明溶蝕行為和累積釋放行為顯著相關，CSF的釋放機理主要是溶蝕方式。

將經時釋藥曲線進行數學模型擬合，結果見表2。零級方程和Ritger-Peppas方程擬合最好，r均達0.9999。其中 Ritger-Peppas方程的 K 值為0.966，大于臨界值0.89，證明PNS在CSF中的釋放機理以骨架溶蝕方式為主。

表2 CSF經時釋藥曲線的模型擬合

3.5 藥效學評價 各實驗組創面愈合百分率的結果見圖5。實驗組在各時間的創面愈合率均顯著高于兩個對照組(P＜0.05)，說明CSF對創面治療效果優于復方藥物和空白輔料本身。復方藥物水溶液治療效果不佳的原因是:水溶液易流失，且無緩釋效果。

圖5 各實驗組創面愈合率比較

4 討論

本課題選用BSG和PNS為主藥制備CSF，可明顯促進大鼠機械創面的愈合。PNS的促愈機理可能與GRg1等成分促進血管新生和修復組織有關［8］。BSG的促愈機理可能與其促進炎癥細胞浸潤、成纖維細胞增殖和膠原合成有關［9］。本研究結果進一步證明復方成分具有多靶點效應，對創面治療有獨特的優勢，與已有研究結果［10］吻合。戰場環境惡劣，創面易感染各種致病菌，雖然PNS和BSG本身具有抗菌作用［11-12］，但所制CSF的抗菌效果能否抵御惡劣環境還有待考證，必要時可添加五倍子、黃連等抗菌成分［13］，以適應戰時的需要。

本課題選用P407為成膜材料制備CSF，具有緩釋長效作用，大鼠藥效學實驗結果明顯優于復方水溶液對照組。借助P407的反向溫敏特性［14］，自制CSF的成膜溫度為30℃。即在25℃常溫呈液態，可噴霧給藥，浸潤創口深部;體表溫度30℃即可使溶液迅速固化成膜，避免流失。自制CSF的成膜不依賴有機溶劑揮發，無刺激，且生物相容性好。美國已開發的噴霧膜劑Costasis syringe，內含牛結締組織膠原蛋白和凝血酶，噴于創面自動形成膠膜，具有凝血、包扎、促愈合等功能［15］。我國應結合中藥優勢，加強此類新劑型開發，以更好地平戰結合為軍民服務。

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