妊娠高血壓疾病胎盤微血管密度的研究

齊朝陽 高宇琳 黎琳歡 陳艷 曾鴻 羅睿玲

妊娠高血壓疾病是妊娠產科特有的并發癥，該病嚴重影響母嬰健康，是孕產婦和圍產兒發病率和死亡率增高的主要原因之一。國內發病率為9.4%，國外發病率為7%～12%[1]。近年來有研究發現滋養層細胞侵蝕缺陷，尤其是血管重塑障礙是妊娠高血壓疾病的主要發病機制[2]。本研究試驗通過檢測各組妊娠高血壓疾病胎盤的CD31的表達情況及微血管密度（MVD）測定，以期探討胎盤血管病變與妊娠高血壓疾病發生發展的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2008年-2012年住院孕婦149例，年齡20～31歲，孕周37～41周，均無其他產科并發癥及其他原發性內科疾病。其中正常妊娠對照組29例，試驗組輕度子癇前期、重癥子癇前期、子癇、HELLP綜合征各30例，其診斷標準參照豐有吉主編的統編教材《婦產科學》第二版[1]，各組病例均經剖腹產結束分娩的初產婦，術前均未進入產程。

1.2 標本收集及處理 胎盤娩出后立即從胎盤中央切取全層胎盤組織，分成4個組織塊，大小約1.5 cm×1.5 cm×0.3cm，再入中性甲醛固定24h，石蠟包埋切片，HE染色，鏡下觀察每例切片，再選取一塊母體面完整、無明顯梗死、無纖維素沉積及出血的組織蠟塊做免疫組化實驗。

1.3 免疫組化染色 鼠抗人單克隆抗體CD31抗體及二抗均購于福建邁新公司，嚴格按照試劑盒說明書指導步驟進行染色。所有組織蠟塊5μm層厚切片，常規脫蠟至水，3% H2O215min阻斷內源性過氧化物酶活性，置入預熱到95℃的EDTA中加熱15min，室溫中冷卻20min后洗滌。滴加一抗CD31后濕盒中孵育，在37℃恒溫箱2h，PBS充分洗滌（含吐溫20，pH7.2），滴加二抗，溫室孵育30min，PBS充分洗滌，滴加增強劑，溫室孵育10min，PBS充分洗滌，DAB顯色。蘇木精復染，鹽酸乙醇分化，脫水、透明、水溶性樹脂封片，光鏡下觀察。以毛細胞血管瘤陽性作對照，PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結果判定 MVD計數判斷標準：在100倍光鏡下挑選微血管分布最高密度區域，再于400倍光鏡下觀察5個視野，計數每個視野內的微血管數目，取平均值作為MVD值。任何染成棕黃色且與相鄰微血管明顯分離的血管內皮細胞及內皮細胞簇均視為獨立的微血管，是否有血管腔都不作為計數微血管的必要條件，分支血管結構只要不相連也視為另一個微血管，但管腔>8個紅細胞面積或血管周圍有平滑肌包繞不納入計數范圍。

1.5 統計學方法 采用SPSS 12.0統計軟件處理所有數據，計量資料用（）表示，各組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 組織病理學 對照組胎盤發育成熟，終極絨毛體積小、數量多，間質血管多。妊娠期高血壓疾病中：胎盤發育不良及不成熟，末梢絨毛數量減少，間質纖維化、血管減少，基底膜增厚，合體滋養結節明顯增多，伴有梗死，血管內可見血栓形成，病變以重度子癇前期、妊娠子癇、HELLP綜合期等更明顯。見圖1、圖2。

圖1 妊娠高血壓胎盤合體滋養細胞結節增多(HE,40×10)

圖2 妊娠高血壓胎盤絨毛纖維化，血管減少(HE,10×10)

2.2 CD31表達情況 在胎盤絨毛及底蛻膜的血管內皮細胞均有表達。

2.3 MVD值比較 各試驗組胎盤MVD值見表1。除輕度子癇前期組與對照組比無統計學差異外，其它各組明顯低于對照組（P<0.01）；重度子癇組與輕度子癇組比（P<0.01），妊娠子癇組與重度子癇組（P<0.05），差異有統計學意義。見圖3、圖4及表1。

圖3 正常胎盤絨毛CD31表達及MVD (SP,40×10)

圖4 妊娠高血壓胎盤絨毛CD31表達及MVD(SP,40×10)

表1 各組胎盤絨毛微血管密度測定值（n）

3 討論

妊娠高血壓疾病的病因目前尚不清楚。但近年來實驗表明：妊娠早期足夠的胚胎侵入、血管重塑對于正常妊娠的維系起著關鍵性作用；妊娠高血壓疾病滋養細胞侵入子宮內膜過淺；尤其是血管重塑障礙是其主要發病機制[2]。本試驗引入了胎盤MVD值，它是評價血管生成的指標，通過計算各組妊娠高血壓疾病患者及正常對照組孕婦胎盤中MVD的數值來反映胎盤微血管的發育情況。CD31是血小板-內皮細胞粘附因子-1（plataeletendochelial cell adhesion molecule.PECAM-1）,屬于免疫球蛋白超家族成員，主要表達于內皮細胞、血小板、單核細胞、中性白細胞、幼稚的CD8+T細胞及NK細胞表面[3]。近年研究發現CD31一種新型的微血管標記物，在顯示血管內皮細胞的特異性優于其它內皮細胞標記物[4]。故本試驗選用CD31標記胎盤微血管的內皮細胞，測出MVD值。試驗結果：雖然輕度子癇前期MVD為（219.33±35.52）與正常組織（233.75±39.56）比差異無統計學意義；但重度子癇組為（154.25±49.9）；妊娠子癇組為（126.67±43.57）；HLEEP綜合征組為（158.32±40.12）與正常組織比較明顯減少，具有顯著性統計學差異。而且重度子癇組與輕度子癇組比（P＜0.01），妊娠子癇組與重度子癇組（P＜0.05），均具有統計學差異。本試驗結果表明妊娠子癇隨著輕度子癇前期、重度子癇前期、妊娠子癇疾病的發展，其MVD值也逐漸降低。與Coelho[5]等研究發現的子癇前期胎盤血管內皮損傷及血管減少，及國內文獻報告的重度子癇前期胎盤MVD值降低相符[6-7]。亦直接證實了妊娠高血壓疾病患者胎盤血管形成障礙和生長受限，造成了胎盤血管網絡生長發育受限，影響胎盤床血管重塑[7]。對照組胎盤組織病理學：胎盤發育成熟，終極絨毛體積小數量多，間質血管多；妊娠高血壓疾病胎盤發育不良和/或發育不成熟，終極絨毛數量及血管減少，間質纖維化，基底膜增厚，合體滋養結節明顯增多伴有梗死，血管內可見血栓形成，病變以重度子癇前期、妊娠子癇、HELLP綜合期等更明顯。說明胎盤病變與胎盤缺血缺氧互為因果[6]，為妊娠高血壓疾病的發生、發展奠定了基礎。

總之，筆者認為胎盤血管形成減少與妊娠期高血壓疾病密切相關，并隨著疾病的進展，胎盤血管形成減少更明顯，為妊娠期高血壓疾病的發生、發展提供了理論依據。

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