蛋雞J亞群白血病臨床、病理和病原學研究

齊鵬飛，李衛華，何羽婷，趙 鵬，崔治中

（1．山東農業大學動物科技學院，山東 泰安271018；2．中國動物衛生與流行病學中心，山東 青島266032）

禽白血病病毒（ALV）屬于反轉錄病毒科反轉錄病毒屬，可引起禽類多種腫瘤性疾病。共10個亞群，其中 A、B、C、D、E、J存在雞群中［1］。1989年，白羽肉雞中發現了致病性和傳播能力都很強的ALV－J，給肉雞業造成巨大損失［2］。過去十幾年，ALV－J的發病日趨嚴重，蛋雞發病率也明顯增高，國內有不少ALV－J誘發蛋雞腫瘤／血管瘤的報道［3－5］，多為單個病例。2010年山東某雞場暴發腫瘤性疾病，我們從6 000余只的群體中隨機抽取28只，做連續50d臨床病理觀察并逐只做病毒分離鑒定。

1 材料與方法

1．1 病雞來源 新泰某蛋雞場，飼養8 000余只海藍褐蛋雞，90日齡發病，臨床主要表現血管瘤，240日齡剩6 000余只。

1．2 觀察大體病變及剖檢 連續觀察病雞50d，記錄發病及死亡情況，最后剖檢。

1．3 病毒分離鑒定

1．3．1 病毒分離 采無菌抗凝血，血漿接種DF－1，2 h后換液維持7d檢測上清p27，確定是否外源ALV感染。

1．3．2 間接免疫熒光試驗（IFA） p27陽性細胞消化后接種于放有蓋玻片的平皿里培養9d，固定蓋玻片上細胞，ALV－J特異性單抗JE9［6］為一抗，FITC標記的羊抗鼠IgG為二抗，熒光顯微鏡觀察。

1．3．3 模板DNA制備env基因擴增及亞群確定DF－1接毒后維持7d，提取細胞DNA，擴增env基因［7］。為確定病毒亞群，據參考文獻［8］，擴增env基因的引物 F：5′－GGATGAGGTGACTAAGAAGG－3′；R：5′－ACACTACATTTCCCCCTCCCTAT－3′，PCR 產物（預期大小約2．2kb）電泳回收純化，連接轉化后篩選陽性克隆測序。DNAStar比較7個分離株與Gen－Bank中已發表的各亞群ALV的gp85氨基酸序列的同源性，確定亞群。比較同一毒株5個不同準種。參考株基本信息見表1。

2 結果

2．1 病雞群長期觀察及剖檢病理變化 35只雞因應激等原因死亡7只，飼養中死亡7只，21只做了病毒分離。主要表現肝、脾腫大，白色增生性腫瘤結節。部分有肝臟或趾部血管瘤，15號左腿變粗并有腫瘤組織于胸骨下、腸系膜處。見表2。

表1 各亞群參考株基本信息

表2 病雞群長期觀察及剖檢病理變化

2．2 病毒分離和鑒定 將病雞血漿接種DF－1后培養7d，檢測上清液p27均陽性，表明這些雞均存在外源ALV感染。

2．3 IFA檢測 所有p27陽性的細胞均顯示胞質綠色熒光、胞核無熒光的典型感染（圖1）。確定分離到ALV－J，分別命名SDAU10C1－21（表2）。

圖1 SDAU10C1接種DF－1細胞培養9d后IFA結果

2．4env基因擴增和gp85氨基酸序列同源性比較PCR產物電泳，凝膠成像儀下觀察分子量標記2kb處有特異性條帶，約2．2kb，符合預期。gp85氨基酸序列同源性比較顯示，這7個分離株與ALV－J同源性最高，87．1%～95．5%，7個分離株間gp85同源性95．2%～98．2%（表3）。5個準種間同源性98．1%～100%（表4）。

表3 SDAU10C1與各亞群參考株gp85氨基酸序列同源性比較

表4 SDAU10C1株五個準種間gp85氨基酸序列同源性比較

3 討論

ALV－J是從肉雞中首次發現和分離鑒定的新亞群［2］。自2003年國內首次報道蛋雞ALV－J越來越多的報道顯示，ALV－J在我國蛋雞中流行日趨嚴重［11］。商品代蛋雞的白血病會引發很高死淘率，帶來巨大經濟損失，因為這種死亡通常發生在性成熟后開始產蛋時［12］。由此，不斷引發商品代蛋雞場和種雞場糾紛。

本文對來自嚴重發生ALV－J誘發的腫瘤／血管瘤雞群的28只可疑病雞做了50d連續的臨床和病理觀察，顯示了多種多樣的臨床表現和病理學變化，分 離到2 1株ALV－J。對7株克隆測序，gp 8 5氨基酸序列同源性與A～E亞群50．8%～52．7%，與J亞群86．9%～95．5%。與原型株 HPRS－103同源性95．0%，與另一原型株 ADOL－7501同源性86．9%，與海藍灰蛋雞分離株SD07LK1同源性92．6%。可見，近年來ALV－J的gp85變異很快并發生了同源回歸［9－10］。這7株間同源性95．2%～98．2%，同一毒株5個準種的同源性98．1%～100%，一定程度上說明gp85有很高變異性。ALV－J引起的腫瘤形態多種多樣，有血管瘤、肝、脾增生性結節、骨硬化，有的無特征性腫瘤變化，僅表現消瘦。這些差異的產生可能與基因組變異性相關，也可能由個體差異引起。對一群可疑病雞做長期逐日臨床病理觀察，國內還是首次，有助于更深入地了解白血病的發病過程和病變多樣性。

HPRS－103是遲發型致瘤病毒。近年出現的一些毒株，自然感染情況下即可引發5周齡肉雞髓細胞 瘤，并 伴 隨 較 高 的 傳 染 性 和 發 病 率［12］。SDAU10C1人工感染后8d使不同日齡、品系雞發生腫瘤，是急性轉化型病毒。

［1］ Fadly A M，Nair V．Leukosis／Sarcoma Group［M］／／Saify M，Fadly A M，Diseases of Poultry．12thed．Blackwell Publishing Ames，2008：514－568．

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［5］ 孫淑紅，崔治中．表現腺胃炎的蛋用型雞J亞群白血病病毒的分離鑒定［J］．畜牧獸醫學報，2010，41（2）：251－254．

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［12］崔治中．雞白血病及其鑒別診斷和預防控制［C］／／雞淋巴白血病防控技術研討會論文集，北京：中國畜牧獸醫學會禽病學分會，2010：1－12．