祛風止痛丸藥效學實驗研究

萬宏

（湖北中醫藥大學附屬襄陽醫院，湖北 襄陽 441000）

祛風止痛丸為我院協定處方制劑，具有疏風通絡、清熱利濕、消腫止痛之功效，臨床應用具有作用快速、療效肯定的特點。本文對其藥效學進行實驗研究，現將結果報告如下。

1 材料與儀器

1.1 藥品與試劑

祛風止痛丸，襄陽市中醫院制劑室生產，批準文號：鄂藥制字 Z20112330，批號：20110212；痛風定膠囊，成都中匯制藥有限公司生產，國藥準字Z10970025，批號：030101；次黃嘌呤，上海試劑二廠生產，批號：851226；尿酸，Lancaster公司生產，批號：10057758；尿酸試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司生產，規格 5 mL×10支，批準文號：（95）衛藥準字 D-19（1）號，批號：330091。

1.2 動物

昆明種小鼠、Wistar大鼠、新西蘭大白兔均由新疆醫學院實驗動物中心提供，合格證號分別為：SCXK（新）090001，SCXK（新）090014，SCXK（新）090003。

1.3 儀器設備

SABA-18型血生化自動分析儀（意大利）；OLYMPUS 顯微鏡（日本），型號：379330；電子恒溫干燥箱，上海躍進醫療器械一廠，型號：GZXDH30X35。

2 方法

2.1 微晶尿酸鈉（MSU）的制備

取8 g尿酸置1 600 mL沸水中，調節pH至7.4，再加熱至95℃，室溫冷卻并輕輕攪拌，過濾，得MSU，高溫（200℃）滅菌。用前以無菌生理鹽水配成100 mg/mL的混懸液。

2.2 觀察祛風止痛丸對MSU誘導的大鼠足跖腫脹的影響[1-2]

取 Wistar大鼠 50只，雄性，體質量（163.0±33.0）g，隨機分為 5組，每組 10只，即模型組、陽性對照藥組及祛風止痛丸3個劑量組。祛風止痛丸劑量分別為：1.0，2.0，4.0 g/kg，分別用生理鹽水配制成濃度為 10%，20%，40%的溶液，按 1 mL/100 g灌胃，每日1次，連續10 d。給藥最后一天，無菌操作，于大鼠右后足跖皮下注射0.1 mL MSU混懸液（100 mg/mL）致炎。通過測量大鼠左后足跖周徑測定致炎前后左右后足跖周徑的變化，致炎前及致炎后 0.5，1，2，4，6 h 檢測足跖周徑，以致炎前后足跖周徑之差作為腫脹度。觀察祛風止痛丸對MSU致大鼠足跖腫脹的影響。計算各組大鼠足跖腫脹度均值與標準差、各用藥組抑制率，并作t檢驗。

2.3 觀察祛風止痛丸對MSU誘導的兔急性關節炎模型的影響[3-4]

取家兔48只，隨機分組，每組8只，體質量（2.64± 0.48）kg，雄性。設生理鹽水對照組、模型組、痛風定膠囊組和祛風止痛丸3個劑量組（分別為 0.5，1.0，2.0 g/kg），灌胃給藥，每天 1 次，連續10 d，末次給藥1 h后致炎。致炎時無菌操作，膝關節內注射 0.3 mL MSU（100 mg/mL）混懸液致炎。致炎后5 h處死家兔，收集關節積液，進行白細胞計數，并取滑液膜進行組織學檢查。主要觀察滑膜組織、滑膜細胞腫脹、壞死、白細胞和淋巴細胞浸潤等炎癥反應的程度。比較用藥組和模型組關節液中白細胞和病理組織檢查的差異，并進行顯著性檢驗。

2.4 觀察祛風止痛丸對小鼠的鎮痛作用[5-6]

取昆明種小鼠50只，雌雄兼用，體質量（20.3±1.5）g。隨機分成5組。設生理鹽水對照組、痛風定膠囊組及祛風止痛丸3個劑量組 （1.5，3.0，4.5 g/kg），小鼠依體質量灌胃給藥，每天1次，連續3 d。末次給藥后1.0 h，腹腔注射HAc，觀察各組小鼠每15 min內扭體次數。作組間均數t檢驗，計算抑制率。

2.5 觀察祛風止痛丸對小鼠高尿酸血癥的影響[7-8]

采用尿酸生成的前體物質次黃嘌呤來建立高尿酸血癥動物模型，并通過血中尿酸的含量來評價祛風止痛丸的藥效。

2.5.1 建立高尿酸血癥動物模型 取小鼠15只，單次腹腔注射次黃嘌呤1 000 mg/kg，形成高尿酸血癥模型，分別在造模前、造模后 0.5，1，2，4 h各處死3只，取血清測定尿酸濃度作曲線，觀察各時段模型小鼠血清尿酸值。

2.5.2 實驗方法 取昆明種小鼠144只，體質量（20.3± 1.5）g，雌雄兼用。依體質量隨機分為6組，每組24只，設生理鹽水對照組、模型組、痛風定組和祛風止痛丸 3個劑量組（1.5，3.0，4.5 g/kg），灌胃給藥，每天1次，連續6 d。末次給藥后60 min造模，給小鼠腹腔注射次黃嘌呤1 000 mg/kg，造模后 0.5，1，2 h，分別處死小鼠，取血制備血清，依尿酸試劑盒方法測定各組血清尿酸值。作組間均數t檢驗，評定祛風止痛丸有無降低血清尿酸作用。

3 結果

3.1 祛風止痛丸對MSU誘導的大鼠足跖腫脹的影響

痛風定膠囊在致炎后2～6 h內對大鼠MSU誘導的足跖腫脹有抑制作用，祛風止痛丸3個劑量均有明顯抑制作用，中、大劑量可持續作用6 h以上。祛風止痛丸對大鼠MSU誘導的足跖腫脹的抑制率為12.3% ～ 68.5%，結果見表1，2。

表1 祛風止痛丸對MSU誘導的大鼠足跖腫脹的影響（n=10，±s）

表1 祛風止痛丸對MSU誘導的大鼠足跖腫脹的影響（n=10，±s）

注：與模型組比較，**P＜0.05，***P＜0.01

組別 劑量（g/kg） 正常值（cm） MSU致炎后足跖腫脹度（cm）0.5 h 1 h 2 h 4 h 6 h模型組 - 2.99±0.09 0.34±0.12 0.15±0.08 0.63±0.07 0.71±0.08 0.91±0.15痛風定膠囊組 0.5 2.93±0.09 0.24±0.10** 0.35±0.08** 0.45±0.10*** 0.81±0.18 1.00±0.16祛風止痛丸組 1.0 2.94±0.14 0.22±0.12** 0.39±0.16** 0.49±0.16** 0.62±0.15 0.72±0.18**2.0 2.95±0.08 0.18±0.08** 0.29±0.10** 0.39±0.12*** 0.56±0.14*** 0.74±0.15**4.0 2.91±0.06 0.11±0.08** 0.18±0.11*** 0.24±0.13*** 0.35±0.14*** 0.40±0.14***

表2 祛風止痛丸對MSU誘導的大鼠足跖腫脹的抑制率（n=10）

3.2 祛風止痛丸對MSU誘導的兔急性關節炎模型的影響[3-4]

模型組與生理鹽水對照組比較WBC顯著增加，提示模型成立。祛風止痛丸各劑量組與模型組比較WBC顯著減少，并呈現劑量依賴性（見表3）。病理檢查顯示祛風止痛組炎癥表現明顯減輕。

表3 祛風止痛丸對MSU誘導的兔急性關節炎關節液中WBC的影響（n=8，±s）

表3 祛風止痛丸對MSU誘導的兔急性關節炎關節液中WBC的影響（n=8，±s）

注：***與模型組比較P＜0.01；+++與對照組比較P＜0.01

組別 劑量（g/kg） WBC（×109/L）生理鹽水對照組 2.0 0.5±0.2模型組 - 15.7±2.2+++痛風定膠囊組 0.2 4.9±1.6***祛風止痛丸組 0.5 13.2±1.4***1.0 8.5±3.3***2.0 2.6±1.0***

3.3 祛風止痛丸對小鼠的鎮痛作用[5-6]

祛風止痛丸組與對照組比較，扭體次數明顯減少（見表 4）。

3.4 祛風止痛丸對小鼠高尿酸血癥的影響[7-8]

3.4.1 觀察各時段模型小鼠血清尿酸值 見圖1。

由圖1可見，造模后血中尿酸含量在0.5 h達到高峰值，而后隨時間延長而降低。

表4 祛風止痛丸對HAc引起的小鼠扭體反應的影響（n=10，±s）

表4 祛風止痛丸對HAc引起的小鼠扭體反應的影響（n=10，±s）

注：***與生理鹽水對照組比較，P＜0.01。

組別 劑量（g/kg） 扭體（次/15min） 抑制率（%）生理鹽水對照組 2.0 47.9±12.4 -痛風定膠囊組 0.7 18.0± 9.9*** 62.4祛風止痛丸組 1.5 18.7±14.1*** 61.0 3.0 19.1±12.4*** 60.1 4.5 7.6± 8.6*** 84.1

圖1 不同時間段模型組小鼠血清中尿酸值變化

3.4.2 依尿酸試劑盒方法測定各組鼠血清尿酸值模型組與對照組比較各時段血清尿酸值均顯著升高，表明模型成立。各給藥組與模型組比較，血清尿酸值隨著劑量增加而降低，見表5。

表5 祛風止痛丸對各時段血清尿酸含量的影響（n=24，±s）

表5 祛風止痛丸對各時段血清尿酸含量的影響（n=24，±s）

注：***與模型組比較，P＜0.01；+++與對照組比較，P＜0.01

不同時間段尿酸值的變化（u g/d L，×1 0 4）0.5 h 1 h 2 h生理鹽水對照組 2.0 0.3 2±0.0 9 0.2 9±0.0 4 0.3 1±0.0 6模型組 - 2.9 7±0.9 6+++ 3.6 0±0.8 9+++ 2.3 0±1.1 8+++痛風定膠囊組 0.7 0.7 9±0.2 2*** 0.9 0±0.1 6*** 0.5 9±0.1 5***祛風止痛丸組 1.5 0.9 5±0.0 5*** 0.9 0±0.1 3*** 0.3 3±0.0 8***3.0 0.7 8±0.1 5*** 0.6 9±0.1 6*** 0.3 8±0.1 4***4.5 0.5 3±0.1 6*** 0.5 0±0.2 0*** 0.2 3±0.1 1***組別 劑量（g/k g）

3 小結

痛風又稱“高尿酸血癥”，中醫認為屬于“熱痹”的范疇，是一種常見的疾病，發病率在0.35%左右[10]，相近于癌癥的發病率。本研究發現祛風止痛丸對MSU誘導的大鼠足跖腫脹、兔急性關節炎模型有明顯的抑制作用；使腹腔注射HAc引起的小鼠扭體反應明顯減少。祛風止痛丸能明顯降低由次黃嘌呤引起的小鼠高尿酸血癥模型中血尿酸含量，對實驗性痛風模型有明顯的防治作用，且有劑量依賴性，為其用于臨床治療痛風提供了藥理學依據。

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