PTEN和P27kip1蛋白在胃癌及癌前病變中的表達和意義

鹿 強，臧愛民，馮樹明

（1.河北大學附屬醫院病理科，河北保定 071000；2.河北省徐水縣婦幼保健院內科，河北保定 072550）

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，胃癌及癌前病變的發生是一個多基因、多步驟、多因素和多階段綜合作用的結果［1］。胃癌的發生、發展不僅與細胞的過度增殖有關，同時也和凋亡有密切關系［2］。第10號染色體同源缺失性磷酸酶-張力蛋白基因（PTEN）、細胞周期素依賴激酶抑制劑蛋白（P27kip1）是細胞周期調控因子的重要成分，檢測其在胃癌及癌前病變中的表達，旨在診治胃癌提供理論及實驗依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河北大學附屬醫院2009年1月至2012年5月期間的50例胃癌手術切除標本，癌旁正常組織50例及癌前病變18例，其中腸上皮化生8例、不典型增生10例，每例選取蠟塊4μm連續切片，進行常規HE染色和免疫組化染色。癌旁組織距瘤緣約5cm，均經病理學確認為正常組織作為對照。所有患者術前均未接受治療，新鮮組織采用手術分離立即置于10%中性甲醛中，常規石蠟包埋。本研究中50例胃癌組中男30例，女20例，年齡32～78歲，平均55歲；18例胃癌前病變組中男12例，女6例，年齡30～58歲，平均44歲。所有切片均按全國胃癌協作組提出的標準，由具有豐富經驗的病理科主任醫師進行復檢。

1.2 主要試劑 P27kip1鼠抗人單克隆抗體、兔抗人PTEN多克隆抗體（即用型）、光譜純試劑（SP）盒及二氨基聯苯胺（DAB）顯色劑試劑盒購自北京新生物技術開發中心，免疫組化測定按試劑盒說明書進行各項指標檢測。

1.3 實驗方法 組織切片常規HE染色，均經病理學檢查確診，并根據中國抗癌學會胃癌分類（1990年）標準進行胃癌病理學分型，分為高、中、低分化腺癌及黏液癌，其他分為腸上皮化生、不典型增生。組織標本常規石蠟切片，經二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，磷酸鹽緩沖液（PBS）洗2次，每次3min。經梯度乙醇脫水至二甲苯，中性樹脂封片，鏡下觀察結果。各步驟之間均以PBS洗3次，3min／次。每種抗體均設陽性和陰性對照，陽性對照為已知表達陽性的組織切片，陰性對照以PBS代替一抗。

1.4 結果判定標準 PTEN、P27kip1蛋白以細胞核或胞漿出現棕黃色顆粒為陽性細胞，染色結果以每張切片在400倍鏡下均觀察整體染色情況，選擇有代表性的區域，隨機讀取100個細胞，陽性細胞率=陽性細胞數／總細胞數×100%。切片中陽性細胞率大于或等于5%為陽性病例，小于5%為陰性病例。

1.5 統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件對PTEN、P27kip1蛋白表達應用χ2檢驗和校正χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 PTEN在各組中表達 PTEN正常胃黏膜組陽性率98%，腸上皮化生組、不典型增生組陽性率分別為75%、70%，胃癌組陽性率58%，呈逐漸下降趨勢（P＜0.01）。見表1，圖1、2。

圖1 PTEN在正常胃黏膜中表達（SP×100）

圖2 PTEN在胃癌中表達（SP×100）

2.2 P27kip1在各組中表達 P27kip1正常組陽性率98%，腸上皮化生組陽性率75%，不典型增生組陽性率40%，胃癌組陽性率38%，呈逐漸下降趨勢（P＜0.01）。見表2，圖3、4。

表2 P27kip1在各組中表達

圖3 P27kip1在正常胃黏膜中表達（SP×100）

圖4 P27kip1在胃癌中表達（SP×100）

2.3 胃癌病理組織不同類型PTEN、P27kip1的表達 PTEN的陽性率在胃癌高中分化、低未分化、黏液癌中分別為80.00%、57.7%、22.22%，組間卡方檢驗P=0.021，P＜0.05，差異有統計學意義；P27kip1的陽性率在胃癌高中分化、低未分化、黏液癌分別為13.3%、50%、55.55%，組間卡方檢驗P=0.037，P＜0.05，差異有統計學意義，見表3。

表3 胃癌病理組織不同類型PTEN、P27kip1的表達

2.4 胃癌中PTEN和P27kip1之間的表達關系 50例胃癌患者中PTEN和p27kip1表達的具有正相關性，差異有統計學意義（χ2=9.975，P＜0.05），見表4。

表4 胃癌中PTEN與p27kip1的表達關系（n）

3 討 論

3.1 PTEN表達與胃癌的關系 PTEN是1997年由3個研究小組克隆到的新的腫瘤抑癌基因［3］，是位于人染色體10q23.3的抑癌基因。實驗證明細胞質、核膜及核內都有表達［4］，其編碼產物為403個氨基酸組成的蛋白質，通過使磷脂酰肌醇3，4，5-三磷酸去磷酸化而抑制磷脂酰肌醇-3激酶依賴的蛋白激酶B（Akt），導致細胞增殖抑制和細胞凋亡，被認為是調節細胞凋亡和腫瘤發生的關鍵因素［5］。當PTEN抑癌基因突變或缺失可能構成一個新的信號轉導途徑，與人類惡性腫瘤的發生、發展關系密切［6］，PTEN蛋白高表達的胃癌細胞系，其黏附和遷移能力顯著降低，目前認為PTEN可能通過降低細胞間的黏附、細胞的運動性和血管形成而參與胃癌演進，在調控細胞的生長發育和凋亡、細胞信號轉導及細胞浸潤、轉移過程中起重要的作用［7］。

本研究結果PTEN在胃正常組織、腸上皮化生、不典型增生、胃癌中的陽性表達率呈逐漸下降趨勢，與Yang等［8］的研究結果相近似，正常胃黏膜及腸化生組織中的PTEN蛋白表達陽性率明顯高于不典型增生及胃癌組織。

PTEN低表達的腫瘤細胞更易浸潤、轉移，因而侵襲性強、惡性度高、預后差［9］，本研究結果PTEN陽性率與胃癌組織類型密切相關，胃高中分化腺癌組織中PTEN陽性率明顯高于胃低分化腺癌組織，有顯著差異，這可能是基因水平改變的結果，提示PTEN的檢測，可能為判斷胃癌患者的惡性程度及預后提供依據。相關研究表明PTEN的表達與患者3年生存率相關，表達缺失者生存率低，是影響胃癌患者預后的生物學指標之一［10］。

3.2 P27kip1表達與胃癌的關系 P27kip1是細胞周期素依賴激酶抑制劑（CDKIs）家族成員之一，P27kip1主要定位于胞核，但在胞漿和胞核中均有表達［11］，對腫瘤細胞的增殖起負性調節的作用，低表達加速腫瘤細胞合成增多，促使腫瘤發展［12］，P27kip1對細胞周期負性調控作用主要是通過抑制CDKIs復合物的激活或抑制已激活的CDKIs復合物的活性來實現的，使得細胞生長停滯，從而調控著細胞的生存與增殖。目前研究證實在多種腫瘤組織中存在P27kip1的異常表達［13］，它不但直接調控細胞周期，還作為胞外刺激信號的潛在媒介來調控細胞周期，與腫瘤的發生、發展及侵襲密切相關。

本研究結果P27kip1在胃癌、腸上皮化生、不典型增生（P＜0.01）低表達較顯著，在胃癌高、中、低、未分化、黏液腺癌表達（P＜0.05），提示P27kip1表達下調可能影響胃癌分化程度及侵襲能力，與胃癌浸潤深度、淋巴結轉移、分化程度呈負相關，這一研究結果與Ohtani等［14］研究發現P27kip1基因缺失導致的P27kip1蛋白表達缺失，與胃癌進展和預后密切相關一致。

3.3 胃癌中PTEN與p27kip1表達的關系 本研究結果表明在胃癌中PTEN的表達與P27kip1表達呈正相關，PTEN低表達可降低P27kip1表達。P27kip1是PTEN調節細胞周期的下游信號分子，PTEN可以使P27kip1去磷酸化，降低其在細胞中的分解代謝水平，負性調控細胞周期［15］，在胃癌的發生、發展過程中，PTEN和P27kip1可能起著協同的作用，PTEN和P27kip1的表達可作為診斷胃癌的一個重要依據。

綜上所述，該檢測PTEN、P27kip1蛋白表達下調與胃癌的發生、發展方式呈正相關，對胃癌的早期診斷、治療、判斷預后提供了實驗依據，具有重要指導意義。

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