KiSS－1蛋白和MMP－2在宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義

張小平，李明玉

（1．吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春130033；2．吉林省婦幼保健院）

宮頸癌是女性最常見(jiàn)的生殖道惡性腫瘤之一，近年來(lái)，在我國(guó)宮頸癌的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且趨于年輕化，其中鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率占到80%－85%。早期宮頸癌無(wú)明顯癥狀，診斷比較困難，而晚期宮頸癌的預(yù)后極差［1］。臨床數(shù)據(jù)表明，80%以上的宮頸癌患者死于腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，盡管一些學(xué)者們做了大量關(guān)于宮頸癌侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究，但是到目前為止，其確切機(jī)制仍不清楚。

本研究采用免疫組化（S－P）法，檢測(cè)宮頸鱗癌石蠟包埋組織中KiSS－1蛋白和MMP－2的表達(dá)情況，探討其與宮頸鱗癌的組織學(xué)分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并分析二者有無(wú)相關(guān)性。

1 材料與方法

1．1 標(biāo)本 78例標(biāo)本均來(lái)自吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院2008年3月－2011年3月間門診及住院患者宮頸組織的存檔蠟塊，臨床病理資料完整。宮頸癌均為宮頸鱗狀細(xì)胞癌，共38例，年齡為26－68歲，平均年齡44歲。通過(guò)婦科查體記錄腫瘤直徑，根據(jù)2000年FIGO標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰa期14例，Ⅰb期12例，Ⅱ期12例，均實(shí)施廣泛性子宮切除及盆腔淋巴結(jié)切除術(shù)，術(shù)后病理回報(bào)伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的8例，不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的30例；深肌層浸潤(rùn)（≥1／2）22例，淺肌層浸潤(rùn)（＜1／2）16例；術(shù)后病理組織學(xué)分級(jí)：高分化9例，中、低分化29例。同期門診行宮頸錐形切除術(shù)，術(shù)后病理：CINⅠ者7例，CINⅡ者6例，CINⅢ者9例，共計(jì)22例。取同時(shí)期因子宮肌瘤手術(shù)切除的正常宮頸組織18例作為對(duì)照組。所有宮頸癌患者手術(shù)前均未接受過(guò)放療或化療。

1．2 試劑 兔抗人KiSS－1蛋白單克隆抗體、兔抗人MMP－9單克隆抗體均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，SP試劑盒購(gòu)自北京龍邁達(dá)生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1．3 方法 采用鏈菌素親生物素－過(guò)氧化物酶法（SP法），以PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照，試劑盒中陽(yáng)性片為陽(yáng)性對(duì)照。

1．4 結(jié)果判定 根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分（A）：無(wú)色為0分，弱染色為1分，中等染色為2分，強(qiáng)染色為3分；按細(xì)胞總數(shù)中染色陽(yáng)性的細(xì)胞所占比例評(píng)分（B）：＜5%為0分，5%－25%為1分，26%－50%為2分，＞50%為3分；總分（A＋B）≥3分為陽(yáng)性表達(dá)，＜3分為陰性表達(dá)。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法 采用χ2檢驗(yàn)、Fisher精確檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)相關(guān)性分析。所有數(shù)據(jù)在SPSS17．0統(tǒng)計(jì)軟件上進(jìn)行。

2 結(jié)果

2．1 正常宮頸、CIN及宮頸癌組織中KiSS－1蛋白的表達(dá) KiSS－1蛋白主要定位于細(xì)胞漿，偶見(jiàn)于細(xì)胞膜。其在正常宮頸組織、CIN和宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為77．8%、86．4%和44．7%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。

2．2 正常宮頸、CIN及宮頸癌組織中MMP－2的表達(dá) MMP－2主要定位于細(xì)胞漿，在細(xì)胞間質(zhì)中有少量表達(dá)，其在正常宮頸組織、CIN、宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率依次升高，分別為16．7%、31．8%及63．2%。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），見(jiàn)表1。

表1 KiSS－1蛋白和MMP－2在不同宮頸組織中的表達(dá)

2．3 KiSS－1蛋白、MMP－2的陽(yáng)性表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系，見(jiàn)表2。

表2 宮頸癌中KiSS－1蛋白與MMP－2的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

在宮頸癌組織中KiSS－1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，中、低分化組陽(yáng)性率為31．0%，明顯低于高分化組的88．9%（P＜0．05）。與肌層浸潤(rùn)深度也有關(guān)，肌層浸潤(rùn)深度≥1／2組的陽(yáng)性表達(dá)率（22．7%）明顯低于肌層浸潤(rùn)深度＜1／2組的陽(yáng)性表達(dá)率（75%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。KiSS－1蛋白在臨床分期為Ⅰ期、Ⅱ期的宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為57．7%和16．7%，二者之間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。MMP－2的陽(yáng)性表達(dá)率隨著肌層浸潤(rùn)深度加深而增加，肌層浸潤(rùn)深度≥1／2組的陽(yáng)性表達(dá)率（81．8%）明顯高于肌層浸潤(rùn)深度＜1／2組的陽(yáng)性表達(dá)率（37．5%），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。MMP－2在臨床分期Ⅰ期中的陽(yáng)性表達(dá)率為50%，明顯低于臨床分期Ⅱ期的91．7%，二者間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，差異有意義（P＜0．05）。MMP－2與宮頸癌的組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)（P＞0．05），而二者的陽(yáng)性表達(dá)與是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無(wú)顯著性差異（P＞0．05）。

2．4 宮頸癌組織中KiSS－1蛋白和MMP－2表達(dá)的相互關(guān)系，見(jiàn)表3。

表3 KiSS－1蛋白和MMP－9在宮頸鱗癌中表達(dá)的關(guān)系

進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示：宮頸癌中KiSS－1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與MMP－2的陽(yáng)性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r＝－0．427，P＜0．05），表明兩者之間存在某種負(fù)調(diào)控作用。

3 討論

宮頸癌是最常見(jiàn)的生殖道惡性腫瘤，其發(fā)病率居女性惡性腫瘤第二位，僅次于乳腺癌，嚴(yán)重危害女性健康。侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致宮頸癌手術(shù)切除率及生存率大幅下降的主要原因之一。近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，研究者們發(fā)現(xiàn)在腫瘤發(fā)生發(fā)展、侵襲過(guò)程中存在著多種癌基因的激活和抑癌基因的失活。

3．1 KiSS－1蛋白在宮頸組織中的表達(dá)及其意義

1996年Lee等［2］應(yīng)用遞減雜交和差異顯示技術(shù)在人類黑色素瘤細(xì)胞株中分離出的一個(gè)嶄新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，位于1號(hào)染色體長(zhǎng)臂1q32－q41區(qū)，KiSS－1基因在胎盤和腦等正常組織中可檢測(cè)到較高水平表達(dá)［3］，在腫瘤組織中往往表達(dá)過(guò)低或缺失，Ohtaki等［4］研究發(fā)現(xiàn)，KiSS－1編碼的 KiSS－1蛋白羧基末端（68－121）的54個(gè)氨基酸是GPR54的內(nèi)源性配體，因?yàn)樗幸种坪谏亓龊腿橄侔┘?xì)胞轉(zhuǎn)移的作用，亦被命名為轉(zhuǎn)移抑素（Metastin）。KiSS－1蛋白與GPR54受體結(jié)合后可上調(diào)細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平而抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，還可以抑制腫瘤細(xì)胞的移行能力、削弱基質(zhì)金屬蛋白酶活性而發(fā)揮其抑制腫瘤細(xì)胞的趨化和侵襲的作用。

本研究結(jié)果顯示，KiSS－1蛋白在宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于其在正常宮頸組織及CIN組織中的陽(yáng)性表達(dá)率，這提示KiSS－1蛋白在宮頸癌組織的低表達(dá)可能是宮頸癌發(fā)生的早期事件，且下降程度隨著宮頸癌的惡性進(jìn)展而增加。在分析KiSS－1蛋白與宮頸癌的各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系中我們發(fā)現(xiàn)，KiSS－1蛋白的表達(dá)水平與宮頸癌的組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)深度及臨床分期密切相關(guān)，其陽(yáng)性表達(dá)率是隨著疾病進(jìn)展而顯著下降的，這與姜濤等［5］在不同子宮內(nèi)膜組織中有研究結(jié)果基本相一致。這說(shuō)明，癌變?cè)缙陔A段就已經(jīng)出現(xiàn)了KiSS－1蛋白的低表達(dá)，其低水平表達(dá)促進(jìn)了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移，而其高表達(dá)可阻止宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展的惡性進(jìn)程，提示可將KiSS－1蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)情況作為宮頸癌的分期指標(biāo)，并用于判斷預(yù)后。

3．2 MMP－2在宮頸組織中的表達(dá)及其意義

腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者死亡的主要原因之一，腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤脫離后向周圍和（或）遠(yuǎn)處組織擴(kuò)散的過(guò)程，在這個(gè)過(guò)程中，需要蛋白酶類降解細(xì)胞外基質(zhì)，破壞基底膜的完整性，為腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供“通道”。MMPs是一組發(fā)揮此作用的鋅離子依賴性蛋白水解酶超家族，迄今為止，已發(fā)現(xiàn)20多個(gè)成員［5］。MMP－2是一種非糖化的明膠酶，是該家族中較為重要的一員，基因位于人類染色體16q21。MMP－2主要通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)中主要成分Ⅳ型膠原而在腫瘤的惡性進(jìn)展過(guò)程中起著不可小視的作用［6］。MMP－2還可促進(jìn)腫瘤形成新生血管，與腫瘤侵襲密切相關(guān)。組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑（tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMPs）是機(jī)體內(nèi)存在的MMPs天然抑制蛋白，其中TIMP－2對(duì) MMP－2有高度的選擇性抑制。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)［7］表明，MMP－2與惡性腫瘤晚期轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，而與TIMP－2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。MMP－2的作用受TIMP－2等眾多因素的調(diào)控，目前的研究結(jié)果也提示人們可以通過(guò)阻斷MMP－2的作用來(lái)抑制腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移，從而達(dá)到控制和治療腫瘤的目的。

本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中 MMP－2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常宮頸組織及CIN組織中的陽(yáng)性表達(dá)率，這與Amalinei C等［8］在子宮內(nèi)膜癌組織中的研究得到相似結(jié)論，國(guó)內(nèi)譚琛等［9］也得到與此相一致的結(jié)果，這表明MMP－2參與了惡性腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果表明，MMP－2的表達(dá)水平在臨床分期Ⅱ期組及肌層浸潤(rùn)≥1／2組明顯高于Ⅰ期組及肌層浸潤(rùn)＜1／2組，且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示MMP－2的表達(dá)可能與宮頸癌細(xì)胞的侵襲力呈正相關(guān)，在宮頸癌惡性進(jìn)展過(guò)程中，起了推進(jìn)作用，預(yù)示著檢測(cè)宮頸癌組織中MMP－2的表達(dá)水平可望做為評(píng)估患者預(yù)后的有力指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，MMP－2在宮頸癌G1和G2＋G3及有無(wú)盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)顯著性差異，與羅儀等［10］的研究結(jié)果不盡一致，可能與樣本例數(shù)過(guò)少有關(guān)，需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步探討。

3．3 KiSS－1蛋白和 MMP－2在宮頸癌組織中表達(dá)的關(guān)系

本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中KiSS－1蛋白和MMP－2的陽(yáng)性表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，與陳妍瓊等［11］在食管鱗狀細(xì)胞癌中的研究結(jié)果相一致，這提示KiSS－1蛋白表達(dá)降低或缺失與MMP－2蛋白的過(guò)表達(dá)是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的重要事件。KiSS－1基因可能是通過(guò)抑制NF－kB與MMP－2啟動(dòng)子結(jié)合使后者表達(dá)降低［12］。Takino［13］等研究發(fā)現(xiàn)，MMPs可與KiSS－1蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，活化的MMPs能夠裂解KiSS－1蛋白，使其失去配體活性而失活。由此可見(jiàn)，KiSS－1蛋白可通過(guò)減少M(fèi)MP－2表達(dá)的途徑而發(fā)揮其抑制腫瘤細(xì)胞侵襲的作用，而MMP－2可通過(guò)裂解KiSS－1蛋白全長(zhǎng)或與之結(jié)合形成復(fù)合物的方式發(fā)揮其抑制KiSS－1蛋白的抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。

綜上所述，KiSS－1蛋白的低表達(dá)或表達(dá)缺失與MMP－2過(guò)表達(dá)在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，二者在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中既相互抑制又相互獨(dú)立，將兩者聯(lián)合檢測(cè)用于診斷宮頸癌、判斷惡性程度、評(píng)估預(yù)后可克服單一因子檢測(cè)的敏感性差、準(zhǔn)確率低的缺點(diǎn)，可更加真實(shí)、客觀地反映宮頸癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的過(guò)程。

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