原發性膽汁性肝硬化患者自身抗體檢測分析

翁厚光，曹維克，張迎梅，吳尚農

（南京醫科大學附屬淮安第一醫院，江蘇 淮安223300）

原發性膽汁性肝硬化（PBC）是一種病因尚不明確、慢性進行性膽汁淤積性自身免疫性肝臟疾病。可能在一定遺傳背景下，由于持續性感染（細菌、病毒、真菌等）、環境因素或毒物作用等，導致免疫調節紊亂和自身免疫反應。病理學特點為匯管區炎癥及免疫介導的肝內膽管的破壞，最終造成肝纖維化、肝硬化及肝衰竭［1］。臨床上多見于40－60歲女性，實驗室檢查除堿性磷酸酶（ALP）、γ－谷氨酰轉肽酶（GGT）等明顯升高及抗線粒體亞型－丙酮酸脫氫酶復合物（抗AMA－M2抗體）陽性外。還有抗M2－3E（BPO）抗體、抗早幼粒細胞性白血病（PML）抗體、抗核包膜蛋白（GP210）抗體、抗多核點（SP100）抗體等自身抗體陽性。本文擬對62例經病理檢查確診為PBC的患者進行自身抗體聯合檢測并分析其臨床意義，以提高對本病的早期診斷。

1 資料與方法

1．1 研究對象 收集我院2005年3月至2010年5月原發性膽汁性肝硬化患者62例血清標本，其中男6例，女56例，年齡38－65歲，平均年齡51歲；血清γ－谷氨酰轉肽酶（GGT）（483．0±75．3）U／L、堿性磷酸酶（ALP）（538．0±83．3）U／L。排除：（1）病毒性肝炎；（2）肝內外占位、梗阻及原發性硬化性膽管炎；（3）藥物性及酒精性肝損害；（4）肝豆狀核變性及血色病。PBC診斷標準符合2009年美國肝病學會PBC診斷指南［2］。同時收集乙肝后肝硬化患者30例（疾病對照組）及健康體檢者50例（正常對照組）血清標本。病毒性肝炎病原學分型符合2000年9月西安會議病毒性肝炎防治方案中診斷標準［3］。正常對照組所有對象均無心、肝、肺等器官疾患，肝功能檢測無異常。PBC患者與兩對照組年齡、性別差異無顯著性。

1．2 檢測項目及檢測方法 免疫印跡法檢測包括：抗AMA－M2抗體、抗 M2－3E抗體、抗SPl00抗體、抗PML抗體、抗GP210抗體、抗LKM－1抗體、抗LC－1抗體、抗SLA／LP抗體等自身抗體。試劑為德國歐蒙醫學實驗診斷股份公司產品。操作按試劑盒說明進行。結果判定：用標準對照膜條圖觀察特定區域膜條，清晰可見著色者判為陽性。

1．3 肝臟穿刺活檢組織病理學檢查 B超引導下穿刺，標本長1．5－2．0cm，鏡下包括至少6個匯管區，10%甲醛固定，石蠟包埋，HE及Masson染色。由我院病理科經驗豐富的主任醫師采用統一標準一次性閱片。

1．4 統計學方法 應用SPSS15．0統計軟件包進行統計學處理，計數資料采用χ2檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 各種自身抗體陽性率檢測結果 見表1。

抗AMA－M2抗體對PBC診斷的敏感度82．3%，特異度91．2%；抗 M2－3E抗體對PBC診斷的敏感度90．3%，特異度93．8%；抗SPl00抗體對PBC診斷的敏感度35．5%，特異度98．8%；抗PML抗體對PBC診斷的敏感度29．0%，特異度98．8%；抗GP210抗體對PBC診斷的敏感度41．9%，特異度97．5%，由此說明，抗 AMA－M2抗體、抗3E抗體、抗SPl00抗體、抗PML抗體、抗GP210抗體的聯合檢測對PBC的診斷有著較高的應用價值，對于PBC的篩查可起到重要作用。

表1 各種自身抗體陽性檢出率 ［%（例）］

2．2 自身抗體陽性和陰性患者肝功能衰竭的發生率 62例PBC患者中，抗GP210抗體陽性患者肝功能衰竭的發生率明顯高于抗體陰性患者（P＜0．05）。而抗 AMA－M2 抗 體、抗 SPl00 抗體、抗PML抗體陽性和陰性患者組之間肝功能衰竭發生率差異無統計學意義（P＞0．05）。見表2。

表2 各種自身抗體與肝功能衰竭發生率 （%）

3 討論

PBC屬于自身免疫性肝病之一，近年來隨著國內外對此病的研究和診斷技術的提高以及臨床醫生對該病認識程度的加深，PBC在我國肝病患者中檢出比例逐年增多。其早期可無癥狀，部分患者僅有乏力、納差等非特異性表現。對該病早期的積極治療不僅可以延緩病程的發展，而且一定程度上可以改善預后。很多患者發現確診時，已達到后期嚴重的肝硬化及其并發癥。因此早期診斷至關重要。

抗線粒體抗體M2亞型是PBC的特異性抗體。AMA－M2的靶抗原主要是抗線粒內膜上的丙酮酸脫氫酶復合體（PDC－E2）、酮戊二酸脫氫酶復合體（OGDC－E2）和支鏈二氧酸脫氫酶復合體（BCOADC－E2），3個靶抗原（BPO）聯合檢測，其敏感性和特異性都會升高［4］。本研究發現，在PBC的診斷中以天然M2抗原和BPO融合蛋白M2－3E為靶抗原的免疫印跡法比傳統的僅以PDC為靶抗原的免疫印跡法有更高的敏感性和特異性。此結果與文獻報道一致［5］。

核點型抗核抗體主要的靶抗原包括：①SP100蛋白，主要存在于PBC患者中的一種轉錄激活蛋白；②早幼粒細胞白血病蛋白（PML），為細胞轉化和生長抑制蛋白，異常表達在早幼粒細胞白血病細胞，最早在急性早幼粒白血病患者的白血病細胞中發現，是和維甲酸受體融合的蛋白。據文獻報道，PBC中抗SP100抗體的陽性率大約為35%，在排除了其他疾病的可能性，并且符合PBC的臨床表現的情況下，特別是對于抗線粒體抗體陰性的患者來說，抗SP100抗體對PBC的診斷具有高度的特異性；約90%的PBC患者可同時檢測到抗SP100抗體和抗PML抗體，兩者具有相同的敏感性和特異度，且出現抗SP100抗體和抗PML抗體的PBC患者病情進展快，預后較差。以上說明，在PBC中這種特殊的抗SP100抗體和抗PML抗體實際上預示了PBC的早期診斷，提高了PBC檢出率，并且具有高度特異性，是檢測PBC的重要診斷標志［6，7］。本研究結果顯示：抗SP100抗體和抗PML抗體的敏感性分別為35．5%和29．0%、特異度均為98．8%，與文獻報道基本一致。

GP210為核孔復合物的主要相關糖蛋白，核孔區域是PBC抗體識別核包膜自身抗原的另一個區域，25%的PBC患者存在抗核包膜蛋白自身抗體，GP210抗體診斷PBC的特異性為99%，被認為是PBC的高特異性抗體［8，9］。核孔復合體具有將核質轉運至細胞質及維持細胞功能的作用，從理論上分析，該位點受損可直接影響細胞功能并加重病情，因此抗GP210抗體與PBC的嚴重程度和預后具有更為緊密的相關性。抗GP210抗體與嚴重的界面性肝炎和小葉炎癥有關，陽性提示易進展為肝衰竭［10］。本次研究結果表明，抗GP210抗體的敏感度41．9%、特異度97．5%，抗GP210抗體陽性患者中肝功能衰竭的發生率為30．8%，明顯高于抗GP210抗體陰性患者，僅為2．8%，與文獻報道相符。而與PBC相關的自身抗體：抗AMA－M2抗體、抗SPl00抗體、抗PML抗體陽性與陰性患者中肝功能衰竭的發生率差異無統計學意義（P＞0．05），表明它們與該病的預后并不相關。因此抗GP210抗體不僅可協助早期診斷PBC，對該病的預后亦有重要意義。

綜上所述，抗AMA－M2抗體、抗 M2－3E抗體、抗SP100抗體、抗PML抗體、抗GP210抗體檢測在PBC患者血清中具有很高的特異度和相當的敏感度，可作為PBC診斷的高度特異性抗體，聯合檢測極大地增加了PBC的診斷率，使臨床不容易漏診。將使更多的PBC患者得到早期診斷和正確治療，并為進一步開展PBC發病機制及臨床研究奠定基礎。

［1］Lleo A，Invernizzi P，Gershwin ME，et al．Etiopathogenesis of primary biliary cirrhosis［J］．World J Gastroenterol，2008，14（21）：3328．

［2］Lindor KD，Gershwin ME，Poupon R，et al．American Association for Study of Liver Diseases．Primary biliary cirrhosis［J］．Hepatology，2009，50（1）：291．

［3］中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會．病毒性肝病防治方案［J］．中華肝臟病雜志，2000，8（6）：324．

［4］Braun S，Berg C，Buck S，et al．Catalytic domain of PDC－E2contains epitopes recognized by antimitochondrial antibodies in pri－mary biliary cirrhosis［J］．World J Gastroenterol，2010，16（8）：973．

［5］張 洋，李永哲，馮 雪，等．抗線粒體抗體 M2亞型抗體三種檢測方法的比較及其對原發性膽汁性肝硬化的診斷價值研究［J］．中國實驗診斷學，2008，12（9）：1073．

［6］Wichmann I，Montes－Cano MA，Respaldiza N，et al．Clinical significance of anti－multiple nuclear dots／Sp100utoantibodies．Scand J Gastroenterol 2003，38（9）：996．

［7］李晞，李永哲．原發性膽汁性肝硬化自身抗體譜研究新進展［J］．中國實驗診斷學2011，15（5）：945．

［8］張麗萍，劉元明，郝欽芳，等．自身免疫性肝病的實驗室診斷［J］．肝臟，2010，15（3）：225．

［9］堯 穎，楊晉輝，徐智媛，等．原發性膽汁性肝硬化血清免疫學檢測的臨床意義［J］．胃腸病學和肝病學雜志，2007，16（5）：417．

［10］Nakamura M，Kondo H，Mori T，et al．Anti－GP210and anti－centromere antibodies are different risk factors for the progression of primary biliary cirrhosis［J］．Hepatology，2007，45（1）：118．