全自動血細胞分析儀Sysmex XE-2100復檢規則的建立及應用評價＊

姜 華，吳軍錄，戴 燕，萬海英

（同濟大學附屬同濟醫院檢驗科，上海 200065）

Sysmex XE-2100血細胞分析儀是目前國內中小型醫院應用最為廣泛的一種血細胞分析工具，它將先進的流式細胞技術、染料結合技術和電阻抗原理結合起來，可進行全血細胞計數（CBC）、白細胞分類（DC）、有核紅細胞（NRBC）和網織紅細胞（RET）多種模式檢測，具有較高的工作效率和準確率。但由于血細胞分析儀尚不完全具備識別細胞形態的能力，在形態學檢查方面只能作為篩查手段，對可疑或異常的標本必須進行顯微鏡復檢。因此，2001年，國際著名血液檢驗專家Berend Houwen發起關于血細胞分析儀全血細胞計數和白細胞分類的顯微鏡復檢規則的研究［1－2］。2005年國際血液學組織制定了復檢規則統一的參考標準“血涂片復審41條國際規則”［3］。2008年，由解放軍總醫院、四川大學華西醫院、復旦大學華山醫院和Sysmex公司成立了“XE-2100復檢協作組”［4］，制定了針對Sysmex XE-2100血細胞分析儀白細胞分類涂片復檢規則。但是，這只是指導意見，每個臨床實驗室必須根據科室情況制定出適合于本科室的復檢規則。

1 資料與方法

1.1 一般資料 血液標本來自2011年3～5月同濟醫院門、急診和住院患者，標本均用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）真空抗凝管采集，所有標本均在2h內用XE-2100自動進樣模式檢測并推片染色完畢。

1.2 儀器與試劑 Sysmex XE-2100全自動血細胞分析儀、原裝配套試劑、質控物由日本Sysmex公司提供；Olympus CX31雙筒顯微鏡購自日本奧林巴斯光學工業株式會社，用于血涂片的顯微鏡檢查；EDTA-K2真空抗凝管購自廣州陽普醫療用品有限公司；瑞氏染液購自貝索公司。

1.3 方法

1.3.1 人員培訓 根據《全國臨床檢驗操作規程》和《白細胞分類計數參考方法》中制定的操作程序，對參與人員進行培訓［5－6］。儀器操作和結果判斷由1名有經驗的主管技師負責；涂片染色和鏡下檢查分別由另外2名主管技師負責，進行雙盲檢驗。

1.3.2 儀器準備 由Sysmex公司工程師對儀器進行校準，且每天的室內質控檢測必須在控。

1.3.3 檢測方法 將收集的標本于采血后2h內用Sysmex XE-2100自動進樣模式進行檢測，包括CBC、DC，將檢測結果備份存檔。同時，每份標本制備2張血涂片，用瑞氏染液進行染色，保證涂片和染色良好。由有經驗的檢驗人員按培訓方法進行鏡檢。內容包括：（1）白細胞分類計數：每張血涂片分類200個白細胞，并觀察形態；（2）白細胞和血小板數量估計；（3）紅細胞和血小板的大小及形態；（4）有無巨大血小板；（5）有無有核紅細胞及血液寄生蟲。

1.4 建立復檢規則

1.4.1 儀器復檢標準 參考2008年XE-2100血細胞分析復檢標準制定協作組制定的《XE-2100自動血細胞計數和白細胞分類涂片復檢規則》［4］，并結合本實驗室實際情況，添加了兒童的復檢規則和歷史結果審核規則組成了本實驗室血常規復檢要求，具體見表1。

表1 血常規復檢要求

1.4.2 涂片鏡檢陽性判斷標準 （1）紅細胞明顯大小不等（細胞大小相差1倍以上）；中空淡染（大于1／2淡染區的紅細胞多于30%）；只要發現瘧原蟲均認為有紅細胞形態改變；（2）巨大血小板大于15%；（3）血小板聚集；（4）Dohle小體的粒細胞大于10%；（5）中毒顆粒粒細胞大于10%；（6）空泡變性粒細胞大于10%；（7）原始和幼稚細胞大于或等于1%；（8）早幼粒細胞和中幼粒細胞大于或等于1%；（9）晚幼粒細胞大于2%；（10）異形淋巴細胞大于5%；（11）NRBC大于或等于1%；（12）漿細胞大于或等于1%［4］。

1.4.3 復檢規則的驗證及結果判斷方法 以鏡檢結果為金標準，對1 020例標本檢測結果進行分析，統計應用本科室制定的復檢規則后的涂片復檢率（真陽性率加上假陽性率）、真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率。真陽性定義為觸犯復檢規則且人工鏡檢結果為陽性；假陽性定義為觸犯復檢規則但人工鏡檢結果為陰性；真陰性定義為未觸犯復檢規則且人工鏡檢結果為陰性；假陰性定義為未觸犯復檢規則但人工鏡檢結果為陽性。

2 結 果

2.1 復檢規則的應用 標本在檢測時，如果觸及到相關復檢規則時，則按照不同提示進行操作，（1）觸及標本情況類：觀察標本情況，溶血、脂血、黃疸、乳糜血、抗凝劑比例不合適時，若有必要重新采樣后再行檢測。（2）觸及儀器復測類：儀器未出結果、各類計數結果超出規定的范圍、與既往結果不符的，立即與臨床聯系和詢問病情并進行復測。（3）推片染色評估類：觀察紅細胞形態、染色有無異常，有無寄生蟲，血小板和白細胞形態和數目（通過血片中的分布比例估計與儀器給出的數據的比較）有無異常。（4）人工計數各類細胞類：儀器計數超出規定范圍的，與鏡下估算不一致的，儀器提示有細胞碎片或有核紅細胞、圖形有偏移的需人工血細胞計數。（5）鏡下 WBC分類計數類：需鏡檢標本，重點是儀器報警的標本。

2.2 復檢規則的效果驗證

2.2.1 應用1 020例標本對血常規復檢情況進行了分析，見表2。

表2 血常規復檢情況分析

2.2.2 統計分析了1 020例標本真陽性率、假陽性率及真陰性率、假陰性率4項指標，真陰性761例（74.6%），真陽性193例（18.92%），假陰性26例（2.55%），假陽性40例（3.92%）。

3 討 論

Sysmex XE-2100全自動血細胞分析儀具有靈活的檢測和隨機進樣分析模式，能滿足臨床不同標本檢測要求。然而全自動血細胞分析儀雖然有良好的分析性能，但細胞形態多樣性、復雜性使得儀器對細胞的具體形態和結構的識別仍具有一定的局限性，而染色后手工鏡檢除根據細胞大小還根據染色后胞核的大小、形狀、染色質的結構、胞質的顏色及胞質內顆粒的變化而確定細胞種類，是直觀而準確的結果，這是血細胞分析儀無法完成的［7］。為了彌補血細胞分析儀對細胞形態識別能力的不足，需要建立適合本實驗室的復檢規則，對儀器提示的報警信息進行必要的復檢。其復檢率的高低與諸多因素相關，如儀器的狀況、患者的情況、臨床醫生的要求以及檢驗者的經驗等［1］。所以實驗室內部應制定統一的復檢規則，來確保檢測報告的質量，而假陰性率是復檢規則制定的關鍵參數，既不能出現漏掉有診斷價值的陽性結果，也要盡量使復檢率低。本科室制定的28條復檢規則，經1 020例標本的驗證，假陰性率僅為2.55%，且無血液病細胞漏檢。其中漏報的2例術后患者雖然漏檢了幼稚細胞，但是二者的中幼粒細胞僅為1%。

使用1 020例標本對本實驗室28條血常規復檢規則進行驗證，結果顯示需要復檢的有233例（其中包括血液病患者的標本），復檢率為22.84%；準確率（真陽性率和真陰性率）為93.52%，其中假陽性率為3.92%，其主要原因是儀器提示有未成熟的粒細胞和異常淋巴細胞，但鏡檢只發現有少量的桿狀核細胞和少量的異形淋巴細胞（≤5%）。假陰性率為2.55%，符合國際血液學復審協作組關于假陰性率小于5.0%的規定，且無血液病患者漏檢，最大限度地減少了不必要的復檢工作，提高了檢驗人員的工作效率，有助于規范檢測操作及進一步完善儀器性能的評價，為臨床提供更加可靠、直觀的信息，協助臨床診斷。

［1］ 盧興國，叢玉隆.應重視和提升傳統血液形態學檢驗診斷水平［J］.中華檢驗醫學雜志，2006，29（6）：481-482.

［2］ 熊立凡，劉成玉.臨床檢驗基礎［M］.4版.北京：人民衛生出版社，2007：86.

［3］Elkin Simson.全自動血液分析儀的復檢標準［J］.崔巍譯.中華檢驗醫學雜志，2007，30（4）：371-373.

［4］ XE2100血細胞分析復檢標準制定協作組.Sysmex XE2100自動血細胞分析和白細胞分類的復檢規則探討［J］.中華檢驗醫學雜志，2008，31（7）：752-757.

［5］ 葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程［M］.3版.南京：東南大學出版社，2006：133.

［6］ 中華人民共和國衛生部.白細胞分類計數參考方法［M］.北京：人民衛生出版社，2005：4.

［7］ Pierre RV.Peripheral blood film review，the demise of the eyecount leukocyte differential［J］.Clin Lab Med，2002，22（1）：279-297.