血清肌酸激酶活性檢測的分析測量范圍建立與評價

潘錫龍

（廣東省中山市第三人民醫院檢驗科 528451）

血清肌酸激酶（CK）活性與精神病發病期的陽性癥狀及病情關系密切且平行，特別在發病期會異常升高；在協助精神疾病診斷、療效監測和預后判斷中有重要作用［1－3］。現結合臨床和實驗室標準化協會（CLSI）EP6-A 文件要求及相關文獻［4－6］，針對其活性檢測分析測量范圍的建立展開相關試驗與分析討論。

1 材料與方法

1.1 標本準備 收集足夠量來自中山市第三人民醫院就診患者高值CK血清混合標本，要求超過廠家提供的線性范圍，離心后取上清液作為高值標本（H）；以同樣方法收集CK盡可能低的低值標本（L）；要求標本新鮮、無黃疸、無脂濁和無溶血。

1.2 儀器與試劑 日立7020全自動生化分析儀；上海科華公司生產的CK試劑（批號20120112）；英國朗道的質控品（批號714UN、608UE）；eppendorf精度移液槍。

1.3 方法

1.3.1 一系列試驗標本配制 將標本 H和L按9L，8L＋1H，7L＋2H，6L＋3H，5L＋4H，4L＋5H，3L＋6H，2L＋7H，1L＋8H，9H的配比關系進行配制，得到10個試驗標本（S1～S10）。

1.3.2 試驗標本檢測 使用7020生化儀配合科華試劑對10個試驗標本進行檢測，每個標本重復測定2次。7020生化儀經過校準并且質控在控，記錄檢測結果。各種操作應嚴格執行相應操作規程，要求在當天內完成檢測。

1.4 統計學方法 對試驗所得數據應用SPSS19.0統計軟件進行多項回歸分析。設定本實驗室重復性和線性允許誤差分別為3%和5%。

2 結 果

2.1 一系列試驗標本檢測結果，見表1。

表1 10個不同濃度試驗標本檢測結果（U／L）

i＝S1，S2，…S10，Ri1為第i個試驗標本測量結果1與測量均值的百分比，Ri2為第i個試驗標本測量結果2與測量均值的百分比，L為試驗標本總數，2為重復測定2次。計算得誤差CVr＝1.784%，小于3%的設定目標，不精密度符合要求，可直接用于多項回歸分析。

2.2 下面將對表1數據進行多項式回歸分析，結果見表2。

表2 多項式線性回歸分析結果

在表2中，二次回歸多項式非線性系數b2（t＝－0.097，P＝0.926＞0.05）不具顯著性，三次回歸多項式b2（t＝3.080，P＝0.022＜0.05）與b3（t＝－3.156，P＝0.020＜0.05）均具顯著性，且有較小的回歸標準誤，所以，最適多項式為三次。

2.3 線性偏倚分析 從表2可知，一次多項式為Y＝396.255 X＋1.955，三次多項式為Y＝－0.492 X3＋6.584 X2＋374.079 X＋13.687。三次多項式與一次多項式預期值及線性偏離結果見表3。

表3 三次多項式與一次多項式預期值及線性偏離結果

由表3可見，第一個濃度點大大超過實驗室設定的5%允許偏差，因而判斷CK在13.5～3 554.0U／L呈非線性，且其引入的誤差不能被接受。故必須進行修正重新分析。

2.4 多項式回歸修正 以加入H相對量為X軸，標本實測均值為Y軸繪制散點圖，見圖1。從圖1可以看出，最后一個濃度點可能存在較大偏差，試圖去掉此點后，重新作多項式回歸修正分析，結果見表4。從表4可知，二次回歸多項式非線性系數b2（t＝1.213，P＝0.271＞0.05）和三次回歸多項式b2（t＝1.974，P＝0.105＞0.05）、b3（t＝－1.753，P＝0.140＞0.05）均不具顯著性。一次多項式b1（t＝273.253，P＝0.000＜0.05）具顯著性，可直接判斷為線性，其一次多項式為Y＝397.442 X－1.211。

圖1 H相對加入量與實測均值散點圖

表4 多項式回歸修正分析結果

3 討 論

分析測量范圍是反映實驗方法學性能的重要指標之一。在日常檢測過程中標本真實濃度只有在分析測量范圍內才能保證其檢測結果的可靠性，否則，可能會導致分析結果的假性偏高或偏低。故分析測量范圍的建立有助于獲得準確可靠的檢測結果。分析測量范圍的評價主要有平均斜率法、EP6-A方法和CAP-IRC方法，但相對最好的為 EP6-A方法［7］。為了盡量避免由于基質效應帶來的影響，試驗使用了低值混合血清（L）作為稀釋介質［7］。

應用科華試劑在日立7020生化儀上檢測CK有理想的精密度，得到誤差CVr＝1.784%，小于3%的設定目標，可直接用于對精密度要求較高的多項式回歸分析。從表2和圖1可以看出，三次多項式非線性系數b2、b3與0之間的差異性顯著（P＜0.05），存在非線性關系；且有最小的回歸標準誤，故，最適多項式為三次。接著進行線性偏倚分析，即每個試驗樣本濃度處線性偏倚與設定誤差的比較。如果偏倚小于設定誤差說明非線性只是在統計學上的結論，但在臨床工作中是可以接受的，否則就不可接受。經分析發現第一個濃度點處的偏倚為86.90%大于設定的5%，并由圖1觀察到可能由于最后一個濃度點存在較大偏差引起。故去掉該濃度點重新分析，得到二次和三次多項式非線性系數與0之間差異無統計學意義（P＞0.05），直接判斷為線性，最適模型為一次多項式Y＝397.442 X－1.211，其檢測在13.5～3 178.5U／L范圍內呈線性，比試劑說明書規定的（0～2 000U／L）要寬得多。也包含CK參考范圍25～200U／L在內。故可確定13.5～3 178.5 U／L為其分析測量范圍。由表4中一次多項或b0（t＝－0.175，P＞0.05）與0的差異無統計學意義，說明截距只是由統計引入的，而實際的曲線通過原點。

通過本次研究可知，應用科華試劑配合日立7020生化儀檢測CK可得到比較理想的分析測量范圍，能夠滿足大部分精神臨床常規檢測。對高于3 178.5U／L的標本應使用低值或滅活血清進行稀釋，使得稀釋后濃度在13.5～3 178.5U／L內，然后重測，以保證檢測結果的可靠性。

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［6］ 楊有業，張秀明.臨床檢驗方法學評價［M］.北京：人民衛生出版社，2008：168-192.

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