腺苷脫氨酶自建檢測系統及評價

汪小葛，唐 新，浦雄勇，孫王偉

（江蘇省昆山市第一人民醫院檢驗科 215300）

關于檢測系統，目前還沒有一個權威機構對此作出確切的定義，但一般認為，完成一個檢驗項目的測定所涉及的儀器、試劑、校準品、質控品、消耗品、操作程序、質量控制程序、維護保養程序等的組合［1］。國際上特別強調使用固定組合的檢測系統，稱為標準檢測系統，使用這樣的檢測系統對患者樣本進行檢驗，其檢驗結果可溯源至參考方法，具有溯源性和可比性［2］。保證不同的檢測系統檢測同一個項目時其結果的一致性以及準確性是實驗室質量管理的最終目的，這個目標主要是通過方法學之間的比較來實現的。腺苷脫氨酶（adenosine deaminase ADA）是嘌呤核苷代謝過程的重要限速酶，能催化（脫氧）腺苷脫氨轉變為次黃嘌呤（脫氧）核苷，再經嘌呤核苷磷酸化酶作用生成次黃嘌呤，最終氧化成尿酸排出體外，ADA與機體細胞免疫活性關系密切，測定血清、體液中的ADA及其同工酶水平對某些疾病的診斷、鑒別診斷、治療及免疫功能的研究有著重要的臨床意義［3］。原裝ADA試劑雖然有很好的溯源性，但成本高，限制了臨床常規開展，而Roche Modolar DPP全自動生化分析儀有部分開放的試劑通道，可以使用國產ADA試劑，其成本相比原裝試劑低，適合臨床常規開展，但是檢測結果的溯源性不足。為了能夠實現自建ADA檢測系統的檢測結果與參考系統的檢測結果具有可比性，本文依據臨床和實驗室標準化協會（CLSI）標準中EP9-A文件對北京利德曼ADA檢測試劑盒進行評估并建立檢測系統，與Roche Modolar DPP參考系統進行方法學比較。

1 材料與方法

1.1 標本來源 采用門診患者新鮮血清標本，標本無溶血、脂血、黃疸。每天采用8份標本，連續5d一共40份，標本濃度要盡量覆蓋方法檢測的線性范圍。

1.2 儀器與試劑 Roche Modolar DPP全自動生化分析儀。北京利德曼ADA檢測試劑盒及配套校準品，Roche原裝試劑，Cfas校準品，美國Randox質控品。

1.3 方法

1.3.1 檢測系統建立 自建系統（Y）：Roche Modolar DPP全自動生化分析儀，北京利德曼ADA檢測試劑盒及配套校準品。參考系統（X）：Roche參考系統，參考系統的室內質控在控，參加江蘇省室間質控評比成績優秀。兩個系統檢測都嚴格按試劑盒的說明書進行操作，所有標本都在2h以內測定完畢。

1.3.2 方法學比對試驗 每天測定8份標本，每份標本都用自建系統和參考系統進行雙份檢測，連續5d，共40份標本。測定時先對標本排序，再按1→8，8→1各測定1次，檢測結果取均值。

1.3.3 統計學方法 方法內以及方法間的離群點檢驗，判斷限為配對資料小于其4倍的差值均值；一般情況下，若相關系數（r）≥0.975或r2≥0.95時，認為 X的取值范圍合適，然后計算線性回歸方程Y＝aX＋b。使用Excel軟件按CLSI EP9-A統計程序操作。

2 結 果

2.1 兩個檢測系統的精密度評價 使用Randox水平2，水平3質控品連續20次盲測，計算均值（x）、標準差（s）和變異系數（CV%），結果見表1，其CV均小于廠家聲明的5%。

表1 兩個系統精密度評價

2.2 自建檢測系統和參考系統之間比較 自建檢測系統與參考系統結果均數及標準差分別為12.2、6.5，12.1、6.5，二者之間差異無統計學意義（P＞0.05）。回歸方程為Y＝1.001 4 X＋0.073 2，r2＝0.998 4，顯示自建系統和參考系統之間具有顯著相關性，結果見圖1。自建系統和參考系統偏倚圖見圖2，其平均偏差為2.32%。

圖1 自建系統與參考系統比較

圖2 自建系統和Roche系統偏倚

3 討 論

一致性是指在統一計量單位的基礎上，無論何種檢測系統其測量結果都應該在給定的區間內一致。也就是說，測量結果應是可重復、可再現、可比較的［4］。由于原裝試劑價格較貴，如果在保證標本的檢驗質量不降低的前提下，使用既適合本科室檢測儀器，能夠降低成本，又能讓臨床上接受的國產試劑成為作者要解決的問題。現在很多醫院的檢驗科都有根據自身情況選擇儀器、校準品、試劑等建立檢測系統的情況，雖然降低了檢測的成本，但是需要解決的是自建檢測系統的結果可比性和臨床可接受性。同一儀器使用不同試劑的現象在國內較為普遍，對不同試劑系統檢測結果的可比性評估就顯得非常重要［5］。在目前國產試劑建立的檢測系統還不完善的情況下，可以對自建的檢測系統進行方法學比較，以保證臨床檢測結果的準確性以及可比性。CLSI標準中EP9-A文件為臨床各實驗室提供了方法學比較的標準化途徑。由表1可見，兩個檢測系統的精密度均符合臨床要求，對比實驗數據是可靠的，這是進行下一步對比實驗的前提。兩個檢測系統相關性分析顯示，其回歸方程為Y＝0.998 7 X＋0.090 2，r2＝0.998 4，兩個系統的平均偏差為2.32%，表明北京利德曼ADA檢測試劑盒在Roche Modolar DPP全自動生化分析儀上建立的檢測系統與Roche參考系統之間具有很好的可比性，相關性好，自建系統的檢測結果可以被臨床所接受。但是自建檢測系統與參考檢測系統結果有很好的可比性，相關性好，只能表明自建系統的檢測結果可以替代參考系統檢測臨床標本，其檢測結果可以被臨床接受，但不能證明自建系統具有與參考檢測系統一樣的可溯源性。

［1］ 葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程［M］.3版.南京：東南大學出版社，2006：14-16.

［2］ 叢玉隆.臨床實驗室管理［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2004：48-50.

［3］ 劉九江，張立.腺苷脫氨酶活性測定方法學及臨床應用［J］.國際檢驗醫學雜志，2007，30（7）：690-691.

［4］ 楊振華.臨床實驗室質量管理［M］.北京：人民衛生出版社，2003：143-146.

［5］ 馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎［M］.上海：上海科學技術文獻出版社，2003：12-16.