羅云敬,朱西平,安學靜,王 珺
(北京工業大學生命科學與生物工程學院,北京100124)
黃酮類化合物具有清除自由基、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒和調節免疫等功能[1,2],因此,研究天然產物中黃酮類化合物的生物與化學特性十分重要。蕓香科植物柚子產量高,其果皮中除含有芳香油、果膠和色素外,還含有豐富的黃酮類物質[3-5]。柚皮中黃酮類化合物可分為蘆?。ㄊ|香苷)、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷[3,6]4種,其中,新橙皮苷與橙皮苷的二苯基色原酮部分結構相同。
目前的研究主要集中在柚皮黃酮類化合物的提取工藝和其中單一成分的性質方面,針對柚皮黃酮清除自由基的作用研究還較少,對其中的關鍵作用成分還不明確。
鑒于此,作者采用紫外可見分光光度計測定酪氨酸硝化產物3-硝基酪氨酸(3-NT)的有效含量,評價蘆丁、柚皮苷、橙皮苷3種柚皮黃酮在抑制過氧亞硝酸根硝化損傷酪氨酸(Tyr)方面的作用,并測定3種柚皮黃酮對Fenton反應產生的羥基自由基(·OH)和鄰苯三酚自氧化產生的超氧陰離子自由基)的清除效果。
準確配制1mg·mL-1的3-硝基酪氨酸溶液,用0.05mmol·L-1磷酸鹽緩沖溶液稀釋成不同濃度的標準溶液,用紫外可見分光光度計測定其吸光度并繪制標準曲線。
取100mL堿性 H2O2溶液(pH 值為12.5~13.0)與等摩爾量的亞硝酸異戊酯,在0~4℃(冰水混合物)反應9h左右;用MnO2清除剩余H2O2溶液,所得溶液和1mol·L-1NaOH溶液于-20℃混合,即得27mmol·L-1過氧亞硝酸根溶液,保存備用。