小檗堿抗炎活性研究

李宇馨，李瑞海

炎癥是機體對各種損害的防御性反應，炎癥過程中的細胞組織損傷對機體也可造成損害，許多常見病如慢性支氣管炎、肺炎、腸炎、腎炎、風濕病、外傷感染及各種傳染病等都是炎癥性疾病，具有炎癥病變的共同規律［1］。因此，研究抗炎作用的藥物，為預防及治療各種炎癥性疾病，具有重要的意義。

小檗堿(Berberine)又名黃連素，是由黃連、黃柏、三棵針等植物中提取的生物堿，其抗菌譜較廣、毒性和副作用較小，廣泛用于臨床治療細菌性痢疾和腸炎等。目前，研究發現小檗堿還具有抗心律失常和降壓、降血脂的作用，臨床上用于治療高血壓、糖尿病、心功能不全，調血脂，抗心律失常等［2］。

本實驗采用甲醛致小鼠足腫脹法觀察其對炎癥局部組織中前列腺素(PGE2)的影響，研究了小檗堿的抗炎作用，現報道如下［3］。

1 實驗材料

1.1 儀器 4孔恒溫水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司)、分光光度計(上海分析儀器廠)、電子天平 MettlerAE240、紫外掃描儀 ShimaduzuUV265FW。

1.2 藥品與試劑 生理鹽水、甲醇、甲醛、氫氧化鉀等為分析純(國藥集團);PGE2對照品(中國藥品生物制品檢定所);吲哚美辛、黃柏藥材(購自大連開發區保健大藥房);鹽酸小檗堿(實驗室分離純化，純度92%)。

1.3 實驗動物 昆明種小鼠，雌雄兼用，普通，體質量18～22 g;由大連大學實驗動物中心提供。動物分性別飼養于室內，室溫20～24℃，濕度55%～65%，喂標準顆粒飼料，自由飲水和攝食。

2 方法與結果

2.1 PGE2含量測定方法

2.1.1 標準曲線的繪制 精密稱取PGE2對照品0.2 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，充分振搖，得濃度為0.002 0 mg/mL的儲備液，備用。精密吸取 PGE2溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于10 mL量瓶中，各精密加1.0 mol/L氫氧化鉀-甲醇液2 mL，置50℃水浴中加熱20 min，取出，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。同法做一空白，在278 nm波長處測定吸收度，見表1。得線性回歸方程:A=94.585 C+0.004 42，r=0.999 0。結果表明，PGE2在0.002 0～0.010 0 mg/mL濃度范圍內線性關系良好。

表1 線性范圍試驗結果

2.1.2 PGE2含量方法學考察試驗 ①精密度試驗:按照標準曲線制作方法，配制樣品溶液，分別于1d內(n=5)和1周內(n=5)進行測定，計算日內、日間RSD分別為1.23%、0.30%，符合相關規定。②回收率試驗:按照標準曲線制作方法，采用3個濃度的樣品處理后測定吸收度，將測得的吸收度代入標準回歸方程，計錄測得量與加入量，計算回收率，結果見表2。

表2 回收率試驗(%)

2.2 對甲醛致小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響 取昆明種小鼠40只，雌雄各半，體質量18～22 g，隨機分成5組，即生理鹽水組，吲哚美辛陽性對照組，小檗堿低、中、高劑量組。給藥容積為20 mL/mg，對照組給予等量的生理鹽水，1次/d，連續5d。末次給藥后1 h，各小鼠右后足跖皮下注射2.5%甲醛生理鹽水溶液50 μL/只，24 h后處死小鼠，距右踝關節上1 cm處剪下右足，剝皮后浸泡于5 mL生理鹽水中1 h，以1 500 r/min離心10 min，吸取上清液0.5 mL，加入0.5 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液2 mL，在50℃水浴箱中水浴異構化20 min，加甲醇稀釋至20 mL，于紫外分光光度計278 nm處測定吸收值，并按下列公式計算PGE2含量:PGE2含量(μg/g)=(E278×0.01×V×D)/W［注:V=PGE2浸泡液總體積，D=稀釋倍數，W=右下肢重量(g)，E278=278 nm 處的吸收值］［3-5］。比較各組間差異。見表3。

表3 小鼠足腫脹組織中PGE2含量(μg/g)

2.3 結果 見表4。由表4可見，吲哚美辛組及小檗堿中、高劑量組PGE2含量較低，而低劑量組差異無統計學意義。

表4 小檗堿對小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響(n=8，)

表4 小檗堿對小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響(n=8，)

注:與生理鹽水組比較，*P＜0.05

組別 劑量(mg/kg)動物(只) PGE2含量(μg/g)8 60.43±16.44吲哚美辛組 20 8 30.64±9.19*小檗堿低劑量組 10 8 61.86±9.41小檗堿中劑量組 20 8 39.60±13.68*小檗堿高劑量組 30 8 33.22±10.34生理鹽水組-*

3 討論

炎癥介質PGE2等會使血管擴張和組織水腫，并使機體痛覺增敏。本實驗采用甲醛致小鼠足腫脹法測定炎癥組織中PGE2，結果表明，小檗堿中、高劑量組抑制小鼠PGE2的產生，提示小檗堿的抗炎作用機制與減少炎癥組織中PGE2含量有關。

［1］鐘祥，李應東.小檗堿藥理作用研究進展［J］.亞太傳統醫藥，2012，8(3):185-186.

［2］吳迪，范明松，李志雄，等.小檗堿對心血管藥理作用的研究進展［J］.中國醫藥指南，2012，1(10):61-62.

［3］李林，高自立，屈愛桃，等.蒙藥忠倫阿湯的抗炎鎮痛作用及對膠原誘導關節炎大鼠足腫脹的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17(3):184-186.

［4］王本祥，馬金凱，鄧文龍，等.現代中藥藥理學［M］.天津:天津科學技術出版社，1997:303.

［5］王燕燕，陳超，楊洪發.虎參痛風膠囊對大鼠足腫的抗炎作用［J］.中國醫院藥學雜志，2005，25(3):206-208.