蒙藥菥蓂子中多糖的含量測定

中國人民解放軍263醫院（101149）田碩

內蒙古醫學院（010059）王美霞 高建萍Δ

菥蓂子為十字花科植物遏藍菜（又名菥蓂）的種子，菥蓂子名稱源于其植物名，蒙藥名為恒日格一烏布斯，恒日格一額布斯。故將菥蓂子作為正名收入質量標準中。作為蒙藥“恒日格一烏布斯”始載于《認藥白晶鑒》、《無誤蒙藥鑒》?！墩J藥白晶鑒》中稱：“生于松軟的土地及田間。莖如竹箭，葉厚，綠色，開白色小花，果實狀如手鼓，種子類似芝麻，紅黑色，油性，味苦?！薄稛o誤蒙藥鑒》中稱：“……種子如芝麻，紅紫色，具鼬鼠皮樣斑點。”

目前，蒙醫臨床和蒙藥生產企業使用的勃日嘎即“恒日格一烏布斯”均為菥蓂子[1][2]。本品主要用于清熱，滋補，開胃，利尿，消腫。主治肺熱，肝熱，腎脈損傷，睪丸腫墜，遺精，陽萎，腰腿痛，惡心等癥。隨著菥蓂子日益被人們所認識，其應用范圍也越來越廣泛，但因它原來為內蒙古地區習用蒙藥，使用方面并沒有達到國家標準，因此需要對其品種質量進行統一規范，從而達到用藥準確安全有效。本文特對菥蓂子這一藥材中多糖的含量進行了研究，希望能有一定的科學參考價值[3][4][5][6][7][8]。

1 儀器、試劑及實驗材料

1.1 主要儀器 725N型紫外可見分光光度計（上海精密科學儀器有限公司制造）；FA-1004電子分析天平（上海新諾儀器設備有限公司制造）；DZKW-D-2電熱恒溫水浴鍋（北京永光明醫療儀器廠）； 超聲波提取儀（昆山市超聲儀器有限公司制造）；旋轉蒸發儀（鞏義英峪子華儀器廠制造）。

1.2 試劑及材料 葡萄糖標準品（天津市化學試劑三廠）；丙酮（北京化工廠）；乙醚（天津市化學試劑三廠）；無水乙醇（天津市化學試劑三廠）；石油醚（60～90℃）；5%苯酚溶液（天津市化學試劑一廠）；濃硫酸（天津市化學試劑三廠）；以上試劑均為分析純，中藥材菥蓂子為待檢品。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 葡萄糖標準品溶液的制備 精密稱取干燥葡萄糖標準品25.00mg，置250ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。

附圖 葡萄糖標準曲線

2.1.2 樣品溶液的制備 精密稱取鎖陽樣品粉末0.5g，置于250ml具塞三角瓶中，依次用石油醚30ml，無水乙醇30ml，超聲提取30min，所得殘渣揮干溶劑，再加水30ml，超聲提取30min，重復此操作兩次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至20ml，加入無水乙醇，至純含量約為70%，密閉靜置24h，抽濾，濾餅依次用95%乙醇，丙酮，乙醚洗滌，60℃水浴揮干，殘留物60℃水浴溶解，定容至100ml容量瓶中，搖勻，備用[9][10]。

2.2 最大波長的確定 精密吸取葡萄糖標準品溶液和樣品溶液0.5ml，分別置于具塞刻度比色管中，各補加蒸餾水至2.0ml，再各加5%苯酚溶液1.0ml，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放10min，40℃水浴加熱10min，取出冷卻至室溫，空白試劑調零，在300～600nm波長范圍連續測定吸光度。結果表明，標準品溶液和樣品溶液均在490nm有最大吸收，故確定490nm為測定波長。

2.3 標準曲線的繪制 精密稱取葡萄糖標準品溶液0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8ml、0.9ml，分別置于10ml具塞刻度比色管中，加水補足2ml，各加入5%苯酚溶液1.0ml，然后迅速加入濃硫酸5.0ml，搖勻，放置10min，40℃水浴加熱10min，取出后冷卻至室溫，以空白試劑作對照，于490nm處測其吸光度，以葡萄糖質量濃度（C）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線（見附圖），求得葡萄糖質量濃度（C）和吸光度（A）關系的線性回歸方程為A＝8.4855C－0.0038，相關系數R＝0.9990（n＝6），此結果表明葡萄糖標準品溶液在0.03623～0.08172mg/ml范圍內吸光度A與濃度C呈良好線性關系，可按標準曲線法進行定量分析，見附表1。

2.4 穩定性實驗 精密吸取樣品溶液0.5ml，按2.3方法操作，間隔30min測定其吸光度，RSD＝0.7527%（n＝4），結果表明樣品溶液在顯色后2h內穩定，見附表2。

2.5 精密度實驗 精密吸葡萄糖標準品溶液0.5ml，平行5份，按2.3方法操作，測定其吸光度，以葡萄糖標準品計算，得RSD＝1.443%（n＝5），見附表3。

附表1 濃度與吸光度的關系

附表2 穩定性實驗

附表3 精密度實驗

附表4 回收率實驗

附表5 菥蓂子多糖含量測定結果

2.6 重復性實驗 精密吸取樣品溶液0.5ml，平行5份，按2.3方法操作，測定其吸光度，以樣品含量計算，得RSD＝1.868%（n＝5）。

2.7 回收率實驗 精密吸取樣品溶液0.5ml，平行5份，分別加入葡萄糖對照品溶液0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，補加水至2ml，按2.3方法操作，測定其吸光度，以加入量計算，回收率在96.26%～100.07%之間，平均回收率為98.38%，RSD＝1.45%（n＝5），見附表4。

2.8 樣品含量測定 精密稱取樣品溶液0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.7ml，0.8ml，0.9ml，按2.3方法操作，測定其吸光度，得樣品多糖含量（以葡萄糖計）為3.945%，見附表5。

3 討論

實驗中，加入硫酸試劑時會產生熱量，導致反應溫度和時間不易控制。置于冰水浴中冷卻，再平行加熱相同時間后冷卻，可以較好地提高實驗結果的重現性和準確性。試驗結果顯示，超聲波輔助提取法具有產率高、提取時間短和節約能耗的優勢，并且微量分析法測定菥蓂子多糖的含量準確性高，重現性好，方法簡便易操作。

菥蓂子中多糖百分含量為3.945%，穩定性較好。此方法精密度和重現性也較好，回收率為96.26%～100.07%，變異系數（RSD）均小于2%，結果表明此方法適用于對其多糖含量的微量分析。

本實驗在原有“苯酚-硫酸”[11]法測定的基礎上，對菥蓂子多糖進行了提取，并選擇采用微量分析法測定其含量，為評價菥蓂子質量和新資源的開發利用提供了依據。目前，國內外有關菥蓂子多糖的結構組成、生物學活性的研究還不是很完善，因此這有待我們對其進一步探討與改進。