當歸地上部分中綠原酸和金絲桃苷的含量測定

胡淑毅 劉東來

當歸地上部分中綠原酸和金絲桃苷的含量測定

胡淑毅 劉東來

目的建立當歸地上部分中綠原酸與金絲桃苷的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為GRACE C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動相為乙腈 (A)-0.5%甲酸水溶液 (B)梯度洗脫；流速1.0 ml/min；檢測波長為325 nm(綠原酸)和355 nm(金絲桃苷)。結果綠原酸和金絲桃苷的線性范圍分別為0.29～5.8μg/μL(R2=0.9996)，0.1～2.0μg/μL(R2=0.9999)；平均加樣回收率分別為為97.34%(RSD=4.77%)，101.70%(RSD=3.07%)。結論該方法準確可靠、簡便可行，可用于當歸地上部分藥材的質量控制。

當歸；綠原酸；金絲桃苷；含量測定

當歸為傘形科植物當歸Angelica sinensis (Oliv.) Diels.的干燥根，是一種常用中藥，具有補血活血，調經止痛，潤腸通便之功效[1]。另一方面，在亞洲各國當歸還被廣泛用作食材，并且在歐美也是一種重要的膳食補充劑[2,3]。隨著現代醫藥工業的不斷發展，各種中藥材資源急劇減少，因此，如何合理綜合利用現有資源也成了中藥研究的熱門課題。傳統中當歸的非藥用部位也被深入研究，并分離得到很多具有顯著活性的化學成分，并且發現當歸地上部分中含有的綠原酸和金絲桃苷是重要的抗凝血及抗菌活性成分[4]。為了更好地開發利用豐富的當歸地上部分資源，本文首次對其中的綠原酸和金絲桃苷含量測定方法進行了研究。

1 儀器與試劑

Waters 2695高效液相色譜系統 (包括四元泵溶劑系統，在線脫氣機和自動進樣器，2998 PDA 檢測器，EmpowerTM工作站)；電子分析天平(BT-125D，北京賽多利斯儀器系統有限公司)；超聲波清洗器(KH2200B，昆山禾創超聲儀器有限公司)。綠原酸和金絲桃苷對照品購于中國藥品生物制品鑒定所。甲醇為分析出，乙腈為色譜純；水為超純水。當歸地上部分樣品采自甘肅岷縣，經作者鑒定為傘形科植物當歸Angelica sinensis (Oliv.) Diels的干燥地上部分。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱為GRACE C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動相為乙腈(A)-0.5%甲酸水溶液(B)梯度洗脫 (0 ～ 30 min, 5% ～ 35%A)；流速1.0 ml/min；檢測波長355 nm(金絲桃苷)，325 nm(綠原酸)；柱溫25 ℃；進樣量20 μl。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的綠原酸和金絲桃苷對照品適量，加70 %甲醇制成濃度分別為30 μg/ml和10 μg/ml的混合對照品溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備 精密稱取干燥藥材粉末1.0 g，置具塞三角瓶中，精密加入70%甲醇50 ml，稱定重量，超聲45 min，放冷，再稱定重量，以70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液過0.45 μm的微孔濾膜，即得。

2.4檢測限與定量限 以信噪比為3:1確定綠原酸的檢測限為4.0 ng，金絲桃苷的檢測限為5.8 ng；以信噪比為10 ∶ 1確定綠原酸的定量限為13.5 ng，金絲桃苷的定量限為18.4 ng。

2.5線性關系考察 取干燥至恒重的綠原酸和金絲桃苷對照品適量，緊密稱定，置50 ml量瓶中，以70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含綠原酸57.12 μg/ml，金絲桃苷21.04 μg/ml的對照品貯備液，精密吸取對照品貯備液適量，分別稀釋成含綠原酸濃度為1.428，2.856，5.712，8.568，11.424，14.280，22.848，28.560，57.12 μg/ml，含金絲桃苷濃度為0.526，1.052，2.104，3.156，4.208，5.260，8.416，10.52，21.04 μg/ml的梯度對照品溶液，準確吸取上述對照品溶液各20 μl，按上述確定的色譜條件進行測定，分別以對照品的含量(X)為橫坐標，峰面積積分值(Y)為縱坐標，得綠原酸回歸方程為Y=282550X-841.07，R2=0.9999，線性范圍0.02856～1.1424 μg；金絲桃苷回歸方程為Y=128923X+735.46，R2=0.9996，線性范圍0.01052～0.4208 μg。

2.6精密度試驗 準確吸取供試品溶20 μl，連續進6次，測定綠原酸和金絲桃苷的峰面積，計算相對標準偏差分別為0.24%和0.99%，結果表明儀器精密度良好。

2.7穩定性試驗 取同一批次(20101025)當歸地上部分藥材粉末約1.0 g，精密稱定，按“2.3”項下操作，在上述色譜條件下，分別于0、2、4、6、8、12 h測定，測得綠原酸和金絲桃苷色譜峰面積，計算相對標準偏差分別為1.44%和1.20%，結果表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.8重復性試驗 取同一批次(20101025)當歸地上部分藥材粉末6份，精密稱定，按“2.3”項下操作，在上述色譜條件下進樣測定，測得綠原酸和金絲桃苷色譜含量，計算相對標準偏差分別為3.38%和0.16%。

2.9加樣回收試驗 取已知含量的當歸地上部分藥材(20101025)粉末6份，約0.5 g，精密稱定，分別按已知含量100%加入綠原酸和金絲桃苷對照品，按“2.3”項下操作，在上述色譜條件下進樣測定，平均加樣回收率分別為97.34% (RSD=4.77%)，101.70% (RSD=3.07%)。

2.10樣品測定 分別取不同批次當歸地上部分藥材粉末約1.0 g，精密稱定，按“2.3”項下操作，制成供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μl，注入高效液相色譜儀，測定，結果見表1，色譜圖見圖1。

表1 當歸地上部分中綠原酸和金絲桃苷的含量測定結果(n=3)

圖1 高效液相色譜圖

A 對照品；B 當歸地上部分藥材；1 綠原酸；2 金絲桃苷

3 討論

當歸為一種藥食兩用的常用中藥材，但在傳統用藥習慣中當歸僅僅以根為入藥部位，每年當歸采收后都有大量的地上部分廢棄，不但造成極大浪費，還會污染環境。通過對當歸地上部分有效成分的研究發現其中含有很多具有顯著活性的化學成分，特別是所含有的綠原酸和金絲桃苷是重要的抗凝血及抗菌活性成分[4]。本文首次對當歸地上部分中的綠原酸和金絲桃苷含量測定進行了研究，為當歸地上部分的開發利用提供參考。提取條件的優化通過對提取溶劑，提取方法及提取時間的考察，確定50 ml 70%甲醇，超聲45 min，可以完全提取1.0 g當歸地上部分藥材中的綠原酸和金絲桃苷。

[1] 南京新醫學院. 中藥大辭典. 上海: 上海科學技術出版社, 2006, 1207.

[2] Zhao KJ, Dong TX, Tu PF, et al. Molecular genetic and chemical assessment of radix Angelica (Danggui) in china. J Agric Food Chem, 2003, 51(9): 2576-2583.

[3] Deng SX, Chen SN, Yao P, et al. Serotonergic activity-guided phytochemical investigation of the roots of Angelica sinensis. J Nat Prod, 2006, 69(4): 536-541.

[4] Zhou GS, Yang NY, Tang YP, et al. Chemical constituents from the aerial parts of Angelica sinensis and their bioactivities. Chin J Nat Med, 2012, 10(4): 295-298.

DeterminationofchlorogenicacidandhyperosideintheaerialpartofangelicasinensisbyHPLC

HUShu-yi,LIUDong-lai.

LiMinPharmaceuticalFactoryofLIVZONPharmaceuticalGroup,Shaoguan,Guangdong512028,China

ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of chlorogenic acid and hyperoside in the aerial part of angelica sinensis.MethodsThe chromatographic separation was achieved on a GRACE C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) column at a variable wavelength from 325 nm (Chlorogenic acid) to 355 nm (hyperoside) using a gradient mobile phase consisted of a mixture of acetonitrile (A) and 0.5% formic acid (B) at a flow rate of 1.0 ml/min.ResultsLinearity relationships of chlorogenic acid and hyperoside were 0.29～ 5.8 μg/μl (R2=0.9996), 0.1 ～ 2.0 μg/μl (R2=0.9999), respectively; the average recoveries were 97.34% (RSD=4.77%)，101.70% (RSD=3.07%).ConclusionThe results showed that the method is accurate, simple, repeatable and it is suitable for the quality control of the aerial parts of Angelica sinensis.

Angelica sinensis;Chlorogenic acid;Hyperoside;Content determination

512028 廣東省麗珠集團利民制藥廠