丙型肝炎病毒抗體檢測的幾種方法的臨床應用

朱瑞敏 孫來芬 馬冬玲

HCV是一種有包膜的RNA病毒，其潛伏期約6～7周，50%～80%的患者可發展成慢性丙型肝炎，20%的慢性丙肝患者如發展為肝硬化，一旦到肝硬化階段，每年約有1% ～7%可進展為原發性肝細胞癌［1］。我國約有10%肝癌患者血中存在抗-HCV。其嚴重危害著人們的身體健康，本文對幾種檢測丙肝技術的相關性的應用加以闡述。

1 具體方法

1.1 實驗室有關丙型肝炎檢測的流程:

1.1.1 樣品-→初篩試驗-→陰性-→報告抗-HCV陰性。

1.1.2 樣品-→初篩試驗-→陽性反應-→用原在試劑雙孔或原有試劑加另一種不同原理(或廠家)試劑做復檢試驗-→均陽性反應或一陰一陽-→做補充試驗

1.1.3 樣品-→初篩試驗-→陽性反應-→用原在試劑雙孔或原有試劑加另一種不同原理(或廠家)試劑做復檢試驗-→均陰性反應-→報告抗-HCV陰性

1.1.4 補充試驗:①ELISA法測定吸光度值〉5倍cutoff值時-→報告抗-HCV陽性;②免疫印跡試驗陰性-→報告抗-HCV陰性;③免疫印跡試驗陽性-→報告抗-HCV陽性;④免疫印跡試驗不確定-→報告抗-HCV不確定，建議定期復查。

2 其具體操作原理及判斷標準如下所述

2.1 酶聯免疫吸附試驗我實驗室用的是上海科華試劑公司生產的試劑，其檢測原理是:所用包被抗原為合成多肽原和基因工程抗原(包括HCV病毒結構區核心抗原和非結構區抗原)。待測樣本加入已包被抗原的反應孔內孵育，若標本中含有抗-HCV抗體，則該抗體與微孔內抗原形成抗原抗體復合物，加入酶結合物，經孵育后，酶結合物連接至抗原抗體復合物上，在TMB底物參與反應的情況下，產生顯色反應。其cottoff值=陰性對照平均值+陽性對照平均值*10%(若陰性對照平均值小于0按0計算，陽性對照平均值大于2.5按2.5計算)。當所檢測樣品吸光度值小于cottoff值時，我們判定為陰性。當所檢測樣品吸光度值大于cottoff值時，分三個區間判斷a:吸光度值大于cottoff值5倍時判斷為陽性。b:吸光度值介于cottoff值3.8～5倍之間時，做膠體金試驗或化學發光試驗如果陽性則判斷為陽性，如果膠體金試驗或化學發光試驗為陰性則做確診實驗，結果判定以確診實驗為準。C:吸光度值介于cottoff值1～3.8倍之間時的結果判定以確診實驗為準。

2.2 化學發光試驗我實驗室用雅培公司生產的試劑，機器為IS2000R。其檢驗原理為:丙型肝炎病毒采用免疫檢測，定性測定人血清和血漿中的HCV抗體，技術是化學發光微粒子免疫檢測法與靈活的檢測方案的結合。第一步，將樣本HCV重組抗原包被的順磁微粒子和項目稀釋液混合。樣本中的HCV抗體結合到HCV包被的微粒子上。沖洗后進入第二步，加入啶酯標記的抗-人的結合物。再次沖洗后，身反應混合物中加入預激發興高采烈和激發液。通過相對發光單信對產生的化學發光反應進行測量。樣本中的HCV抗體含量與ARCHITECT光學系統檢測到時的RLU成正比。其參考范圍為0-1。當結果小于1時判斷為陰性。當結果介于等于1～5之間時，做確診實驗，結果判定以確診實驗為準。當結果大于等于5時，報告為陽性。

2.3 膠體金法快速試驗:1)免疫滲濾試驗:斑點免疫膠體金快速試驗以硝酸纖維膜為載體，HCV抗原點狀固定上膜上，加待檢樣品。陽性結果在膜上抗原部信顯示出有色斑點。反應時間在10 min以內。有效試驗的質控點必須顯色。2)免疫層析試驗:以硝酸纖維膜的載體，HCV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽性結果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗的質控線必須顯色。我實驗室用此法僅限于做胃腸鏡或支氣管鏡檢查的初篩試驗，還用于如上所述酶聯免疫吸附試驗結果在3.8-5倍cottoff值之間的復查的附助檢查。

3 檢測結果的解釋［2］

見表1。

表1

［1］ 中華醫學會肝病學分會.丙型肝炎防治指南.中華肝臟病雜志，2004，4.

［2］ 中國疾病預防控制中心.丙型肝炎病毒實驗室檢測技術規范，2011.