通絡定眩方對椎動脈型頸椎病兔血液流變學、ET、NO的影響

胡兆斌,傅 強

(南京中醫(yī)藥大學,南京,210046)

椎動脈型頸椎病(CSA)是頸椎病的常見類型之一,好發(fā)生于中老年人,是以眩暈、頭痛甚至猝倒等臨床表現(xiàn)為主的椎-基底動脈供血不足癥候群。其研究在國內(nèi)日漸增多,目前大多數(shù)臨床醫(yī)生首選保守治療。通絡定眩方是揚州市中醫(yī)院研制的院內(nèi)合劑,是歷代醫(yī)家在治療CSA過程中總結(jié)出來的經(jīng)驗用方。為探討通絡定眩方對CSA的療效及其與NO、ET、血液流變學的關(guān)系,進行了通絡定眩方的實驗研究,現(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 材料和方法

1.1 實驗動物與分組

選用來自封閉群的普通大耳白兔雌性,合格證號:SCXK(蘇)2007-0008,由南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場提供,體質(zhì)量2.0～2.5 kg,實驗前適應性喂養(yǎng)3 d后隨機分為4組,即空白組、通絡定眩方治療組、模型組、頸復康治療組,每組10只。

1.2 試驗條件

給藥前后,試驗動物分籠飼養(yǎng),喂飼全價飼料(由南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場提供),自由飲水,室溫(24±5)℃。

1.3 實驗藥物及試劑

消痔靈注射液:北京雙鶴高科天然藥物有限責任公司生產(chǎn),批號:110503;頸復康顆粒:承德中藥集團有限公司生產(chǎn);ET、NO放免分析測定盒:上海越研生物科技有限公司生產(chǎn),通絡定眩方:揚州市中醫(yī)院藥劑科生產(chǎn),為骨科臨床專用藥;烏拉糖:上海貝合化工有限公司,批號20030522;低分子肝素:深圳市天道醫(yī)藥有限公司,批號:040319;戊巴比妥鈉:北京化學試劑公司,020402,Q(H82-F158-2002)。

1.4 實驗儀器

722分光度計(上海美譜達儀器有限公司生產(chǎn));THERMOMultiskan MK3全自動酶標儀;離心機H-1600RW(上海利鑫堅離心機有限公司);恒溫水浴DU-30G(杭州匯爾儀器設備有限公司);普利生血流變儀LBY-N6A(北京普利生儀器中心制造)。

1.5 造模方法

采用成都中醫(yī)藥大學臨床醫(yī)學院朱明雙等[1]注射硬化劑法建立椎動脈型頸椎病家兔模型,用脫毛劑硫化鈉去除各家兔頸部和枕后的體毛,經(jīng)顱多普勒(TCD)檢測各家兔椎-基底動脈血流速度并記錄。緊接著抽取10 mL消痔靈硬化劑注射于兔左側(cè)C3～C5頸椎橫突側(cè)面,并在第2周和4周重復注射。然后再次行TCD檢測,選取其中左右兩側(cè)椎動脈和基底動脈血流速度均減小大于10 cm/s的家兔作為成功模型。

1.6 給藥方式

采用揚州市中醫(yī)院院內(nèi)合劑通絡定眩方(川芎10g、當歸10g、天麻10g、黃芪15g、葛根15 g、茯苓 15 g、白術(shù) 15 g、半夏 6 g、陳皮 6 g、甘草6 g)及頸復康顆粒,均按計量換算公式[2]:dB=dA×RB/RA×(WA/WB)1/3計算,通絡定眩方以5.20g(生藥)/(kg·d)的劑量以體質(zhì)量10 mL/kg熬制成為藥液,頸復康顆粒0.72 g/(kg·d)的劑量以體質(zhì)量10 mL/kg蒸餾水稀釋制成混懸液,灌胃,另2組以也以體質(zhì)量10 mL/kg生理鹽水灌胃。

1.7 觀察指標

1.7.1 血液流變學檢測:采用肝素抗凝血5mL在普利生血流變儀上測定。

1.7.2 ET、NO檢測:各動物心臟采血,抗凝血3000 r/min,離心15 min,分離血漿,-20℃保存;非抗凝血2000 r/m離心10 min,分離血清,-20℃保存,酶聯(lián)免疫法檢測血漿中ET含量,化學法檢測血清中NO含量。

2 結(jié) 果

2.1 動物一般情況

4組動物造模4周后因各種原因減少,其中模型組成功模型最少,只有6只造模成功,故每組選取6只成功模型,加上空白組總共24只。造模各組動物早期注射側(cè)頸部肌肉出現(xiàn)條索狀和肌張力增高,后期部分動物頸部出現(xiàn)偏斜甚至扭曲。

2.2 血液流變學檢測結(jié)果

見表1、表2。

表1 各組血液流變學的結(jié)果比較(,n=6)

表1 各組血液流變學的結(jié)果比較(,n=6)

組別 全血高切黏度/(mPa/s)全血中切黏度/(mPa/s)全血低切黏度/(mPa/s)空白組 2.70±0.40 3.73±0.53 7.30±0.70模型組 2.78±0.25 3.79±0.13 6.88±0.14頸復康治療組 3.99±0.28 4.44±0.28 8.36±0.40通絡定眩方治療組 2.58±0.68 3.43±0.65 8.47±0.12

表2 各組血液流變學的結(jié)果比較(,n=6)

表2 各組血液流變學的結(jié)果比較(,n=6)

注:經(jīng)統(tǒng)計學檢驗所有數(shù)據(jù)均符合正態(tài)性方差齊性,組內(nèi)比較采用配對t檢驗,組間比較采用成組t檢驗,分別檢驗血液流變學各項指標。

組別 血漿黏度/(mPa/s) 紅細胞壓積/% 血沉/(mm/h)空白組 1.24±0.03 0.29±0.040 1.33±0.50模型組 1.23±0.04 0.27±0.040 1.00±0.00頸復康治療組 1.57±0.05 0.37±0.016 1.33±0.50通絡定眩方治療組 1.27±0.06 0.28±0.040 1.00±0.00

從表現(xiàn)1、2結(jié)果得出,全血高切:模型組與空白組相比P<0.001,通絡定眩方與模型組相比P<0.001,通絡定眩方與頸復康相比P=0.876;全血中切:模型組與空白組相比P=0.001,通絡定眩方與模型組相比P=0.02,通絡定眩方與頸復康相比P=0.810;通絡定眩方與頸復康相比p=0.301;全血低切:模型組與空白組相比P=0.001通絡定眩方與模型組相比P=0.001。通絡定眩方與頸復康相比P=0.276;血漿黏度:模型組與空白組相比P<0.001,通絡定眩方與模型組相比P<0.001,通絡定眩方與頸復康相比P=0.949;壓積:模型組與空白組相比P<0.001,通絡定眩方與模型組相比P<0.001,通絡定眩方與頸復康相比P=0.345。這說明模型組全血低切、中切、高切黏度明顯高于空白組、頸復康治療組、通絡定眩方治療組(P<0.05),而頸復康治療組、通絡定眩方治療組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。提示:通絡定眩方改善家兔實驗性椎動脈型頸椎病的血液流變學的作用較好,與頸復康顆粒相當。

表3 ET、NO測定結(jié)果(,n=6)

表3 ET、NO測定結(jié)果(,n=6)

注:經(jīng)統(tǒng)計學檢驗所有數(shù)據(jù)均符合正態(tài)性方差齊性,組內(nèi)比較采用配對 t檢驗,組間比較采用成組t檢驗,分別檢驗ET、NO。

組別 NO實驗前/(ng/L) NO實驗后/(ng/L) ET實驗前/(μ mol/L) ET實驗后/(μ mol/L)空白組 114.34±25.94 - 242.80±96.93 -模型組 76.21±14.71 74.40±11.40 278.28±40.27 524.62±127.62頸復康治療組 70.00±13.54 102.23±21.72 393.66±22.05 334.04± 34.16通絡定眩方治療組 76.93±10.67 97.31±10.40 343.46±19.67 215.59±101.92

2.3 NO、ET測定結(jié)果

從表3結(jié)果得出,ET:治療前后比較,頸復康 t=-3.223,P=0.023;模型組 t=4.781,P=0.005;通絡定眩方,t=-2.727,P=0.041;通絡定眩方和模型組比較,t=-5.372,P<0.001;頸復康和通絡定眩方比,t=2.401,P=0.037,差異均有統(tǒng)計學意義。NO:治療前后比較,頸復康 t=3.054,P=0.028;通絡定眩方t=4.957,P=0.004;模型組t-4.362,P=0.007;通絡定眩方和模型組比較,t=6.010,P<0.001,差異有統(tǒng)計學意義;通絡定眩方和頸復康比較,t=1.045,P=0.320,差異無統(tǒng)計學意義。提示:通絡定眩方在增加血清NO、降低血漿ET方面有較好效果,甚至對后者的作用優(yōu)于頸復康顆粒。

3 討 論

血液動力學因素在椎-基底動脈缺血發(fā)病機制中占有重要地位,陳軍等[3]臨床觀察發(fā)現(xiàn),CSA患者的血液黏度基本都偏高,當對患者進行相應治療后檢測發(fā)現(xiàn)血液黏度水平均有所下降,提示高血黏度可能是CSA患者發(fā)病的一個誘因,臨床上針對CSA患者癥狀給予服用一些降低血黏度的藥物,其癥狀可得到一定程度的緩解,也從另一個側(cè)面支持這個觀點。陳健等[4]對椎動脈型頸椎病患者的血液流變學進行檢測,發(fā)現(xiàn)多項指標明顯異常,當患者進行相應治療后各項異常血液流變學指標均有明顯改善,說明血液黏度的變化具有一定的可逆性,且患者全血黏度得到改善后其相應癥狀也有明顯好轉(zhuǎn)或消失,但針對血液黏稠度的治療并不能使患者本身椎體骨質(zhì)增生及椎基動脈血管彈性發(fā)生改變。根據(jù)近年相關(guān)實驗結(jié)果作者認為,血液本身的黏稠度增加、灌流量減少是導致椎動脈型頸椎病的主要原因。

ET是由血管內(nèi)皮細胞中產(chǎn)生的具有生物活性的縮血管活性肽,其可導致血管痙攣甚至破壞組織器官的功能。馮世慶等[5]采用放射免疫方法研究ET在CSA患者血漿中的變化,發(fā)現(xiàn)CSA患者血漿內(nèi)ET含量約為正常對照組3倍;相關(guān)手術(shù)治療后CSA患者的血漿ET含量約為術(shù)前的2/3。目前大多數(shù)學者認為,ET作為一種體液因子參與心腦血管疾病的發(fā)病,并有可能是椎動脈型頸椎病發(fā)病的重要體液因素之一,李俊華等[6]通過手術(shù)方法建立一側(cè)椎動脈受壓模型,實驗中觀察到模型組的5次血漿內(nèi)皮素測值均明顯高于正常組,說明CSA發(fā)病與ET水平之間有著必然聯(lián)系,并認為ET含量的高低可以作為衡量CSA的指標。伍海昭等[7]測得46例CSA患者在發(fā)作期內(nèi)ET、NO水平逐漸升高,當CSA患者病情處于穩(wěn)定期時,ET升高、NO減低,結(jié)果說明ET和NO可能參與了椎動脈型頸椎病人的發(fā)病。

NO是由L-精氨酸和分子氧為底物經(jīng)幾種不同的氧化亞氮合酶(NOS,Nitric oxide synthase)催化合成,屬于一種內(nèi)源性的血管舒張劑,同時NO也可以作為血小板聚集抑制因子、炎癥介質(zhì)和神經(jīng)遞質(zhì)參與機體其他反應。由于NO具有松弛血管平滑肌、舒張血管和抑制內(nèi)皮細胞過度增殖等生理功能,血管內(nèi)皮細胞通過釋放NO來松馳血管平滑肌,使血管擴張,并抑制內(nèi)皮細胞的松弛,在調(diào)節(jié)血管張力、血液流速和血管內(nèi)皮細胞的增殖中起著極其重要的作用。CSA患者的血管內(nèi)皮受到損害,血清中NO含量減少,且缺血缺氧亦可直接抑制內(nèi)皮細胞合成、釋放NO,缺氧產(chǎn)生的自由基也抑制NO活性,NO的失調(diào)刺激會內(nèi)皮毒素釋放,引起血管內(nèi)皮細胞迅速增殖,同時進一步加重了椎-基底動脈的狹窄和缺血,甚至導致腦部供血不足。

本病病機主要為虛、寒、瘀、痰四氣雜合而致病,其中以氣虛為本,寒、瘀、痰為標,而氣虛血瘀的本虛標實之證伴隨疾病的始終,采用自擬方通絡定眩方治療本病,取得良好的臨床療效。通絡定眩方由川芎、當歸、天麻等10味藥物組成,其主要功效是燥濕化痰、補氣活血,通絡止眩,方中葛根味甘辛性涼,輕揚升散,為太陽經(jīng)之表藥,善治因經(jīng)氣不利、筋脈失養(yǎng)所致的項背頭痛,是為君藥;白術(shù)、茯苓健脾燥濕,陳皮燥濕化痰,半夏祛濕化痰、止眩,川芎能“上行頭目、下行血海、中開郁結(jié)、旁通經(jīng)絡”,為“血中氣藥”,具有活血行氣、祛風止痛之功效,俱為臣藥;當歸辛行溫通,為補血活血要藥,可補血活血,通絡止痛,天麻祛風通絡,既平肝,又息風,為治療眩暈、頭痛之要藥,不論虛證、實證,隨不同配伍皆可應用,黃芪補氣以行血,同為佐藥;甘草調(diào)藥和中,是為使藥。諸藥合用,共奏燥濕化痰、補氣活血,通絡止眩之功。本方可隨癥加減,在改善頭痛、眩暈癥狀方面效果顯著。

本研究結(jié)果表明,“通絡定眩方”對椎動脈型頸椎病模型兔具有降低血黏度,抑制血小板的黏附與聚集的作用,能增加大腦血流量和供氧量,并且能夠降低椎動脈型頸椎病患者的紅細胞聚集指數(shù)、血漿黏度、全血黏度,增強紅細胞變形的能力,改善血液流變學,通過降低血液黏度,擴張血管,改善局部血液循環(huán),從而達到患者患者臨床癥狀與體征的效果。

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