疏肝健脾安神和胃法對D－IBS結腸粘膜肥大細胞、P物質和血管活性腸肽的影響

于豐彥 遲宏罡，2 鄒 穎，2 呂汝西，2 鄭學寶

（1.廣東醫學院中醫研究室 廣東 湛江 524023；2.南方醫科大學中醫藥學院 廣東 廣州 510515）

腸易激綜合征是臨床常見的胃腸功能性疾病，是一組包括腹痛、腹脹伴排便習慣改變、糞便性狀異常等臨床表現的癥候群，持續存在或間歇發作，但無器質性疾病的證據。IBS已成為全球性的胃腸功能性疾病。其發病機制目前仍未明了，本文旨在探討肝郁脾虛型IBS患者的結腸肥大細胞密度及肥大細胞脫顆粒密度變化和P物質和血管活性腸肽及觀察中藥康泰方對其影響，初步探討疏肝健脾安神和胃法治療IBS的可能機制。現將有關研究結果報告如下。

1 對象和方法

1.1 研究對象和治療分組

1.1.1 診斷標準和排除標準：病例選擇符合IBS診斷標準（羅馬III標準）和中醫肝郁脾虛辨證標準及評分標準（衛生部1993年頒布的《中藥新藥臨床指導原則》及國家中醫藥管理局1994 年頒布《中醫病證診斷療效標準》）［1］的受試對象。排除以下情況：①年齡在18歲以下或65歲以上；②妊娠或哺乳期婦女；③腸道器質性疾病；④嚴重的心腦血管系統、肝、腎、造血系統疾病以及腫瘤等患者；⑤有消化道手術記錄報告；⑥嚴重原發性疾病及精神病患者；⑦應用可能影響胃腸道功能及內臟敏感性的藥物的患者；⑧有過敏史及受試期間有藥物及食物過敏者；⑨未按規定用藥，無法判斷療效或資料不全等影響療效或安全性判斷者。

1.1.2 分組方法：2009年1月至2011年12月期間廣州中醫藥大學第一附屬醫院門診及住院患者按符合上述標準的合格受試者，共收集合格病例70例，按照隨機、對照的原則，從入選合格受試者的聯系電話末位數，偶數為康泰方治療組（37例），奇數為對照組（33例）；同時設立健康對照組（15例）。治療組中有5位患者失訪，對照組中有2位患者失訪，最終完成療程的合格病例共63例，治療組32例，對照組31例。治療組完成療程后再次結腸鏡取標本的病例共17例，對照組完成療程后再次結腸鏡取標本的病例16例，健康對照組收集到結腸粘膜標本的共15例。臨床資料兩組患者按性別、年齡、病程等情況進行了統計學處理，結果差異均無統計學意義，兩組具有可比性。

1.1.3 治療：治療組：康泰方（主要由白術、白芍、元胡、夜交藤等中藥組成，廣州中醫藥大學第一附屬醫院制劑），200mL，2次／d。對照組：得舒特（匹維溴銨片，法國蘇威藥廠出品），50mg，3 次／d；兩組療程均為8周。

1.2 標本來源：受檢者取回盲部結腸黏膜各3塊，行SP、VIP免疫組化染色以及MC特殊化學染色。

1.3 主要試劑：SP、VIP兔抗人單克隆抗體和SABC 試劑盒由上海長嘉生物科技有限公司提供。MC染色試劑由國藥集團化學試劑有限公司產品提供。

1.4 方法：受檢者活檢黏膜以4% 甲醛溶液固定。常規石蠟包埋。按試劑盒說明書操作步驟行免疫組化染色，MC 染色采用改良甲苯胺藍染色法。

1.5 染色結果分析：細胞質呈現棕色顆粒為SP和VIP表達陽性隨機計數10個腺體的SP或VIP陽性細胞數。總數＜1個為陰性（一），記1分；2～25個為（＋），記2 分；26－49 個為（＋＋），記3 分；＞50 個為（＋＋＋），記4分。Olympus－CH 光學顯微鏡下隨機計數10個高倍視野（×400）內的MC數取均值。

2 結果

2.1 兩組治療前后主要癥狀比較，見表1。

2.2 各組治療前后回盲部肥大細胞密度及肥大細胞脫顆粒密度，見表2、3。

表1 兩組治療前后主要癥狀比較（Mean±SD）

表2 各組回盲部肥大細胞密度及肥大細胞脫顆粒密度

表3 各組治療前后回盲部肥大細胞密度及肥大細胞脫顆粒密度

2.3 SP陽性細胞數／VIP陽性細胞數免疫組化檢測結果，見表4：治療組治療前、對照組治療前與健康對照組SP 免疫反應陽性細胞數／VIP陽性細胞數之間比較，P＜0.05；治療組治療前、后SP免疫反應陽性細胞數／VIP陽性細胞數之間比較，P＜0.05；治療組治療前與對照組治療前的SP免疫反應陽性細胞數／VIP陽性細胞數之間比較，P＞0.05。

表4 各組回盲部SP免疫反應陽性細胞數／VIP陽性細胞數

2.4 肝郁脾虛型D－IBS主要臨床癥狀與回盲部肥大細胞密度、SP、VIP的相關性研究，見表5。

2.5 肝郁脾虛型D－IBS結腸粘膜回盲部肥大細胞密度、SP、VIP之間的相關性研究，表6。

3 討論

腸易激綜合征（IBS）是一種常見的以腸功能紊亂為主的胃腸功能性疾病，其癥狀主要包括腹痛、腹脹及排便習慣改變等。IBS的病因及發病機制尚未完全闡明。

肥大細胞（MC）在胃腸道有廣泛的分布，近年來的研究發現MC 在IBS的發病中起重要作用。SLlllivall等［2］發現IBS患者盲腸的MC 數目明顯高于對照組。MC是人體具有重要免疫活性的細胞，可以分泌多種抗炎遞質和神經遞質如5－HT、組胺等。有學者發現：67% 腸肥大細胞接觸上皮下神經，而還有20%在2um 之間，這為肥大細胞與神經系統交流信息提供結構基礎。肥大細胞表面有P物質等肽類受體［3］，微量P物質能改變肥大細胞的興奮性；同時動物試驗已表明：肥大細胞介導腸神經元興奮性增加［4］，提示肥大細胞和神經之間的信息交流是雙向的。我們的研究也發現肝郁脾虛型腹瀉型IBS結腸粘膜肥大細胞表達脫顆粒與SP、VIP表達呈正相關。

表5

表6

P物質（SP）是由l1個氨基酸組成的多肽，其分泌細胞分布于全部胃腸道，其生理作用為促進胃腸平滑肌和括約肌收縮、胃腸蠕動，參與內臟痛覺反射及擴張內臟血管等。國外Wheatley等［5］發現，80%的便秘患者結腸平滑肌中缺乏SP；Dong［6］等研究發現IBS患者結腸末端中SP能神經纖維和肥大細胞明顯多于對照組，認為腸粘膜中SP能神經纖維和肥大細胞的改變是IBS患者內臟高敏感性的重要因素。我們的研究發現肝郁脾虛型腹瀉型IBS治療前結腸粘膜SP表達明顯高于健康對照組，康泰方治療后SP表達下降與治療前呈顯著性差異，對照藥物治療后也明顯下降，說明了結腸粘膜SP表達確實與腹瀉型IBS致病有關，與以往的研究結果相似。

血管活性腸肽（VIP）是一種含28個氨基酸殘基的堿基多肽，國外相關研究［7］認為VIP與IBS患者的腹痛、腹瀉等癥狀關系密切。國內陳芝蕓等研究也發現腹瀉型IBS患者VIP含量高于正常對照組，便秘型則與對照組無明顯差異。本研究發現肝郁脾虛型腹瀉型IBS結腸粘膜肥大細胞密度、肥大細胞脫顆粒密度及SP、VIP 的表達較正常健康對照組明顯增高，通過多因素相關因素分析發現結腸粘膜肥大細胞密度、肥大細胞脫顆粒密度及SP、VIP的表達之間存在明顯的相關關系，同時主要癥狀與結腸粘膜肥大細胞密度、肥大細胞脫顆粒密度及SP、VIP 的表達成明顯正相關，并隨著中藥康泰方的應用肝郁脾虛型腹瀉型IBS的主要癥狀的改善也同時伴有結腸粘膜肥大細胞密度、肥大細胞脫顆粒密度及SP、VIP的表達的明顯下降，并也成正相關關系。說明了結腸粘膜的肥大細胞密度、肥大細胞脫顆粒密度及SP、VIP的表達是其臨床表現的致病機理，康泰方可能是通過上述機理改善臨床癥狀。

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