胃癌組織中Artemin蛋白的表達

張晶晶,范開席

山東省醫學科學院附屬醫院內三科 濟南 250031

胃癌是世界上第四大常見惡性腫瘤，全世界有52%的胃癌患者在亞洲，其中41%的胃癌患者在中國[1]。在我國大中城市，胃癌死亡率男性為52.24/10萬，居惡性腫瘤的第2位；女性為29.26/10 萬，居惡性腫瘤的第3位。Artemin是神經膠質細胞源性神經營養因子家族配體(GFL)的一個亞型，是一種分泌性的磷酸化糖蛋白，具有促進細胞趨化、黏附和遷移的作用，可以介導各種類型神經元的存活、分化和遷移[2]。有研究[3]表明Artemin及其受體GFRα3/RET在惡性腫瘤細胞中表達升高，并且在介導腫瘤細胞的侵襲、轉移中具有重要的意義。作者通過免疫組化技術檢測胃癌組織中Artemin的表達，分析其與腫瘤患者臨床病理特征的關系，探討其在胃癌發生發展和轉移中的作用。

1 材料與方法

1.1標本來源收集山東省醫學科學院附屬醫院2008年1月至2012年12月手術切除的胃癌組織標本，所有患者術前均未接受過放療和(或)化療，術中常規取材，體積分數10%中性甲醛溶液固定，常規石蠟包埋，4 μm厚連續切片。共122例患者入組，其中男90例，女32例；年齡32～81歲,<60歲66例，≥60歲56例；高、中分化32例，低分化62例；黏液腺癌12例，印戒細胞癌16例(統計分析時黏液腺癌和印戒細胞癌歸為低分化癌)；96例伴有淋巴結轉移，26例無淋巴結轉移；按照2010年《AJCC癌癥分期手冊》7版分期標準進行分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期28例，Ⅲ期80例，Ⅳ期8例。同時另取98例距離腫瘤5 cm以上的癌旁正常胃組織作對照。

1.2正常及胃癌組織中Artemin蛋白表達的免疫組化檢測羊抗人Artemin單克隆抗體購自美國R&D公司，DAB顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。切片脫蠟至水，枸櫞酸修復，H2O2封閉內源性過氧化物酶。切片滴加羊抗人Artemin單克隆抗體(按1150稀釋)，4 ℃過夜后復溫，滴加二抗孵育20 min，DAB顯色3～8 min，蘇木素復染，脫水，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察結果。以PBS代替一抗作陰性對照，以已知陽性片作陽性對照。

1.3結果判定染色結果由2名病理科醫生采用雙盲原則評定。Artemin染色以細胞膜和(或)細胞質出現明顯的黃色或棕黃色顆粒為陽性細胞。在高倍鏡下計數20個細胞，計算陽性細胞百分比：0～5%為0分，～25%為1分，～50%為2分，～75%為3分，～100%為4分；染色強度：不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。兩者的乘積0～4分為陰性，5分及以上為陽性。

1.4統計學處理采用PEMS 3.1 進行分析。應用χ2檢驗和精確概率法比較胃癌、癌旁正常胃組織中Artemin蛋白表達的差異以及胃癌組織中該蛋白表達與臨床病理特征的關系，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1胃癌和癌旁正常胃組織中Artemin蛋白的表達見圖1。122例胃癌組織中有94例(77.1%)Artemin蛋白呈陽性表達，98例癌旁正常胃組織中陽性表達16例(16.3%)，差異有統計學意義(χ2=80.154，P<0.001)。

圖1 胃癌(A)和癌旁正常胃組織(B)中Artemin蛋白的表達(SP，×400)

2.2胃癌組織中Artemi蛋白的表達與臨床病理特征的關系見表1。

表1 胃癌組織中Artemin蛋白的表達與臨床病理特征的關系 例

*：精確概率法。

3 討論

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著人們的身體健康。胃癌起病隱匿，早期常無特殊明顯癥狀，也無明顯的體征，部分患者僅有消化不良的癥狀，且極易發生侵襲和遠處轉移，故發現時多數已是晚期。晚期胃癌多失去了手術完全切除病灶的機會，預后極差，所以胃癌的早期診斷顯得尤其重要?，F代研究認為，胃癌是一種多基因疾病，許多基因參與了胃癌的發生發展，已經證實，BNIP3L、SLP-2與胃癌的生物學行為有關[4-5]。

人artemin基因位于染色體1p32-p33區，全長約3.9 kb。其開放閱讀框編碼的前體蛋白經蛋白酶切割后被加工成113個氨基酸序列的成熟Artemin蛋白。該蛋白易于和GFRα3受體結合，形成復合物，通過糖基-磷脂酰肌醇錨定于細胞膜上，激活Ret，從而傳遞信號[6]。Artemin也可以和GFRα1結合，已有研究[7]顯示Artemin和信號傳導通路中的這些分子聯合對乳癌的進展有顯著的意義。

有研究[8-9]發現，在一些消化系統腫瘤組織中Artemin高表達，而降低患者體內Artemin的表達水平能提高療效并降低手術復發率；目前已證實Artemin和食管癌、胰腺癌的發生和發展密切相關，Artemin與其受體GFRα3能促進胰腺癌細胞的運動和侵襲，且隨著Artemin表達水平的升高，胰腺癌的侵襲轉移能力增強。也有研究[10]顯示Artemin和GFRα3通過增加MMP-2表達和下調E-cadherin表達而增強胰腺癌細胞的運動和侵襲能力。Artemin在食管癌組織中的表達水平是正常食管組織的3倍，隨著食管癌的不斷惡化，其表達水平也不斷升高[11]。有學者報道[12-13]Artemin能增強子宮內膜癌和乳癌的侵襲能力。精原細胞高表達Artemin可促使睪丸惡性腫瘤的發生[14]。另外，GFL受體Ret的突變可以導致甲狀腺癌、嗜鉻細胞瘤和多種內分泌腫瘤的發生[15]。

作者應用免疫組化的方法對胃癌組織進行了研究，結果顯示Artemin在胃癌組織中的表達水平明顯高于癌旁正常組織，提示Artemin蛋白的高表達與胃癌的發生有關。隨著腫瘤浸潤程度的加深，Artemin蛋白陽性表達率上升，說明該蛋白表達或表達升高以后胃癌的浸潤能力增強。有淋巴結轉移的胃癌組織中Artemin蛋白陽性表達率升高，提示Artemin蛋白表達水平可作為判斷胃癌轉移的指標之一。隨著臨床分期的升高，Artemin蛋白陽性表達率逐漸升高，說明Artemin蛋白在胃癌的進展中發揮了非常重要的作用，Artemin蛋白陽性表達率的高低也可作為判斷臨床分期的一個分子指標。

總之，Artemin蛋白可能參與了胃癌的發生發展，與胃癌的侵襲轉移有關，因此其可作為胃癌早期診斷的一個依據，也可作為胃腫瘤惡性程度、轉移潛能和預后判斷的一個指標。

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