胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2蛋白的表達

陳 浩，許 浪

1)荊州市中心醫院胃腸外科 荊州 434100 2)武漢科技大學醫學院病理學教研室 武漢 430064

胃癌是消化道常見惡性腫瘤之一，在我國胃癌呈高發狀態，每年新發病例占全球的40%[1]。1，25-二羥維生素D3既是一種維生素，也是一種類固醇激素，其通過與免疫細胞中的維生素D受體結合，特異性作用于靶組織而發揮作用，與多科疾病有關[2-3]。作為一種全新的抗腫瘤藥物，1，25-二羥維生素D3在肺、乳腺、前列腺、結腸等腫瘤的化療中有重要價值[4]。轉化生長因子-β1 (transforming growth factor β1，TGF-β1)是一種多功能的細胞因子，其介導的TGF-β/Smads信號通路與多種腫瘤的發生及浸潤轉移密切相關。作者對胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1及Smad2蛋白的表達進行了檢測，初步探討1，25-二羥維生素D3及TGF-β/Smads信號通路與胃癌的關系，以期為胃癌的治療提供新的方向。

1 材料與方法

1.1標本收集荊州市中心醫院病理實驗室手術切除的凍存胃癌標本93例。患者年齡41～76(50.1±7.2)歲，其中男56例，女37例；按2010年WHO標準，高、中分化 53例，低分化和未分化40例；臨床分期Ⅰ、Ⅱ期 41例，Ⅲ、Ⅳ期52例；未浸及漿膜層48例，浸及漿膜層45例；無淋巴結轉移39例，有淋巴結轉移54例。患者術前未進行任何放、化療。另取30例正常胃黏膜組織作為對照。

1.2主要試劑與儀器1，25-二羥維生素D3免疫組化檢測試劑盒購自上海研吉生物科技有限公司；TGF-β1及Smad2免疫組化檢測試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司；FITC-IgG、兔抗人TGF-β1多克隆抗體、兔抗人Smad2多克隆抗體、PBS緩沖液均購自武漢博士德生物工程有限公司。M388834酶標儀購自西化儀北京科技有限公司。

1.3 1，25-二羥維生素D3、TGF-β1及Smad2蛋白的檢測用免疫組化 SP 法檢測。將組織標本常規石蠟包埋，4 μm厚切片，脫蠟水化，在EDTA緩沖液中修復，DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封固，鏡下觀察。細胞內出現棕黃色顆粒即為陽性細胞。每張切片觀察5個以上視野(×400)，共計數500個細胞，計算陽性細胞百分數。按陽性細胞百分數評分，≤10%為 1分，>10%且≤50%為 2分，>50%且≤75%為3分，>75%為4分；同時根據染色程度評分，無染色為1分，弱染色為2分，中度染色為3分，強染色為4分。以兩項分數的乘積表示目標蛋白表達水平[5]。

1.4統計學處理采用SPSS 15.0進行數據分析，胃癌與正常胃黏膜組織及不同臨床病理特征胃癌組織中3種蛋白表達水平的比較采用兩獨立樣本t檢驗，采用Pearson相關分析對胃癌組織中3種蛋白表達水平的關系進行分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1正常胃黏膜和胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達1，25-二羥維生素D3、TGF-β1陽性信號定位于胞質和胞核，為粗細不一的棕黃色深染顆粒；Smad2蛋白陽性信號主要位于胞質，少數位于胞核，為棕黃色深染顆粒，見圖1。1，25-二羥維生素D3在胃癌組織中的表達水平低于正常胃黏膜組織，TGF-β1和Smad2在胃癌組織中的表達水平高于正常胃黏膜組織，見表1。

圖1 正常胃黏膜和胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達(SP，×200)

2.2 1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達與胃癌臨床病理特征的關系1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達與胃癌的分化程度、臨床分期、浸潤深度及淋巴結轉移關系密切，見表2。

2.3胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2表達的相關性經Pearson相關分析，胃癌組織中1，25-二羥維生素D3與TGF-β1、Smad2的表達呈負相關(r=-0.583、-0.462，P<0.001)，TGF-β1與Smad2的表達呈正相關(r=0.425，P<0.001)。

表1 正常胃黏膜和胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達

表2 1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達與胃癌臨床病理特征的關系

3 討論

細胞內游離鈣和需鈣蛋白酶在細胞分化中起著重要作用。作為維生素D最主要的活性形式，1，25-二羥維生素D3在鈣、磷代謝中起重要作用。因此1，25-二羥維生素D3可能與腫瘤的發生與分化轉移密切相關。盧娟等[6]研究認為1，25-二羥維生素D3可明顯抑制胃癌細胞分化，促進凋亡，從而發揮抗腫瘤作用。作者觀察到，胃癌組織中1，25-二羥維生素D3的表達水平低于正常胃黏膜組織，同時低分化胃癌組織中1，25-二羥維生素D3的表達水平低于高分化胃癌組織，由此推測1，25-二羥維生素D3的表達下降導致體內鈣代謝紊亂，從而抑制了腫瘤細胞的分化。

TGF-β/Smads信號通路在腫瘤發生的開始階段具有抑制細胞生長的功能，而在進展期則起著促進腫瘤浸潤轉移的作用，此信號通路中任何一個環節出現異常都可導致信號轉導的紊亂，從而導致腫瘤的發生與發展[7]。Smads 蛋白是 TGF-β信號通路中的重要成員，是將 TGF-β信號從細胞外轉導到細胞核內的關鍵因素。已有文獻[8]報道，TGF-β1在胃癌組織中呈高表達，并能增強癌細胞的侵襲力和惡性程度。該研究發現，胃癌組織中TGF-β1和Smad2表達水平均高于正常胃黏膜組織，低、未分化胃癌組織中TGF-β1和Smad2的表達水平高于高、中分化胃癌組織，與文獻[7]報道一致。

作者還觀察到，胃癌組織中1，25-二羥維生素D3與TGF-β1、Smad2的表達呈負相關，TGF-β1與Smad2的表達呈正相關；1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達水平與胃癌的分化程度、臨床分期、浸潤深度及淋巴結轉移有關；提示1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2參與了胃癌的分化、浸潤及轉移。有研究[9-10]報道，1，25-二羥維生素D3可以抑制TGF-β1的表達及其生物活性。由此推測，1，25-二羥維生素D3表達下調，通過調控TGF-β/Smads信號通路使TGF-β1及Smad2表達升高，3者共同參與了胃癌的發生發展。

綜上所述，1，25-二羥維生素D3可能通過調控TGF-β/Smads信號通路參與胃癌的發生發展，這為胃癌的治療提供了新思路。

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