HPLC法測定勞木布阿瓦中甘草苷含量

魯瑞芹

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10ATvp泵，SCL-10 Avp型系統(tǒng)控制器，SPD-10Avp型檢測器，CLASS-VP色譜工作站。島津 μ V-1700型紫外-可見分光光度計，德國 Satori μ s BP211 d型電子天平[2]。

1.2 試藥 甘草苷對照品(批號:111610-200503);中國藥品生物制品檢定所;甲醇、乙醇、乙腈為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。原藥材由烏蘭察布市中心醫(yī)院提供，由烏蘭察布市藥檢所中藥室模擬處方。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 流動相:乙腈-0.5%冰乙酸(19∶81)。柱溫30℃。流速:1.0 ml/min。進樣量:10 μl。檢測波長276nm。理論板數(shù)按甘草苷峰計不得低于4000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取甘草苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液。即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇20 ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率500W，頻率50 kHz)30 min，取出，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5 ml，置 50 ml量瓶中，用 20%乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得[3]。

2.4 陰性對照溶液的制備 取按處方比例制備的缺甘草的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備法制成陰性對照溶液。

2.5 系統(tǒng)適應性試驗 分別吸取對照品溶液、供試品溶液 、陰性對照溶液各10 μl，注入色譜儀，同法測定，結果在峰相應的位置上，陰性對照無干擾[4]，結果見圖 1，2，3

圖1 甘草苷高效液相色譜

圖2 樣品高效液相色譜圖

2.6 線性關系 取濃度為73.4 μg/ml的對照品溶液，精密吸取 0.5、1、2、3、4、5 ml溶液分別置 5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各取10 μl進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對進樣量進行回歸分析[5]，得回歸方程:Y=2.658640X-381.25

r=0.9999，表明甘草苷在0.0734 μg～0.7340 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

圖3 陰性高效液相色譜圖

2.7 精密度 取同一模擬樣品供試品6份，各約1 g，精密稱定，分別按含量測定項下方法操作，測定每份供試品含量，RSD為0.85%，表明精密度良好。

2.8 重現(xiàn)性試驗 取模擬樣品，精密稱定5份，按‘2.3'項下方法測定甘草苷的含量，平均為 3.243 mg/g，RSD為0.72%，表明本方法重復性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h進樣測定甘草苷峰面積，RSD為0.49%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收試驗 取供試品(模擬樣品，含量3.215 mg/g)9份，各約0.3 g，精密稱定，在其中3份中各精密加入用甲醇配制的甘草苷對照品溶液(濃度為0.40 mg/ml)1 ml(約相當于供試品含有量的50%)、另3份中各精密加入上述對照品溶液2 ml(約相當于供試品含有量的100%)、其余3份中各精密加入上述對照品溶液3 ml(約相當于供試品含有量的150%)分別按含量測定項下的方法操作，測定每份供試品含量[6]，計算回收率，結果平均回收率為99.65%。見表1。

表1 甘草苷加樣回收試驗結果

2.11 樣品含量測定 分別吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μl，注入色譜儀，測定6份樣品的含量，結果分別 3.221、3.219、3.250 、3.285 、3.256 、3.230 mg/g。

3 討論

甘草中的甘草苷含量測定方法采用反相色譜法結果準確易行，重現(xiàn)性好。

[1]國家藥典委員會.一部.中國藥典，2005.

[2]李翠，徐必學，張永萍，梁光義.甘草中甘草苷的含量測定方法研究.時珍國醫(yī)國藥，2009，(03).

[3]劉育辰.甘草質(zhì)量評價多指標檢測方法的建立及其在不同來源甘草藥材鑒別上的應用.北京中醫(yī)藥大學，2011.

[4]HPLC法測定養(yǎng)血愈風酒中人參皂苷Rg1的含量.2003全國苗醫(yī)藥學術研討會特輯，2003.

[5]段天璇，馬長華，王文全，閻永紅，魏勝利，李梢.HPLC-MS法鑒定甘草的指紋圖譜.中國藥師，2009，(04).

[6]伍蔚萍，閻宏濤，孫文基.HPLC法測定甘草中甘草苷的含量.藥物分析雜志，2004，(04).