消腫噴劑對急性軟組織損傷大鼠血清PGE2、IL－6影響的實驗研究＊

牛淑亮 劉鳳霞 王水泉 廖 靜 王海龍 新疆醫(yī)科大學(xué) （烏魯木齊830011）

消腫噴劑為蘇梔消腫膏改良制劑，主要有蘇木、梔子、姜黃、延胡索、制乳香、制沒藥、三七、血竭、冰片等多味中藥組成，具有明顯活血祛瘀、舒筋活絡(luò)、消腫止痛作用。臨床應(yīng)用治療跌打損傷，各種骨折后軟組織腫脹、疼痛1583例，效果良好。為探討其促進(jìn)急性軟組織損傷修復(fù)的作用機(jī)理，我們進(jìn)行了消腫噴劑對急性軟組織損傷大鼠血清PGE 2、IL－6影響的實驗研究。

1 實驗材料 1.1 實驗動物 健康SD大白鼠72只，雌雄各半，8周齡，體重216.3±11.4g（新疆醫(yī)科大學(xué)大學(xué)實驗動物中心提供）。

1.2 實驗用藥 消腫噴劑（蘇木、梔子、姜黃、延胡索、制乳香、制沒藥、三七、血竭混勻，浸泡于60%酒精中，每天攪拌1次，10后過濾，取濾液，再加冰片，溶解后分裝）。對照藥物選用正紅花油（成都東洋百信制藥有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z20033087）。

1.3 實驗儀器 軟組織打擊器（自制），Labsystems Multiskan MS352型酶標(biāo)儀，TG16W微量高速離心機(jī)，GNP－9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱，ELISA Kit for Rat PGE2（美國RD公司進(jìn)口分裝，生產(chǎn)批號：20120610）、ELISA Kit for Rat IL－6（美國RD公司進(jìn)口分裝，生產(chǎn)批號：20120615）

2 實驗方法 2.1 造模與分組 造模方法參照文獻(xiàn)［1］略加改造：SD大白鼠54只，實驗前1天禁水禁食，以8%硫化鈉溶液右后肢脫毛。實驗前，水合氯醛腹腔注射麻醉（0.1mL／100g），麻醉成功后將大鼠固定在自制打擊器上，將200g重的砝碼通過與砝碼直徑相當(dāng)?shù)乃芰瞎苤凶?0cm高處垂直自由落體沖擊大鼠大腿外側(cè)肌肉豐厚處，連續(xù)打擊2次，打擊面積約1×2cm2，造成打擊局部出現(xiàn)散在出血點，皮下瘀腫創(chuàng)面及腫脹的非開放性軟組織損傷模型。排除皮膚破損或骨折者，并已經(jīng)解剖及組織學(xué)驗證成功率為100%。

造模成功的大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為將大鼠隨機(jī)等分為3組，各18只。模型組，正紅花油藥物對照組和消腫噴劑藥物治療組。18只未打擊大鼠為空白組。模型組、空白組不予給藥，對照組與治療組每天早晚各外拭給藥一次，連續(xù)給藥5d。各組均給予正常飼食。

2.2 取材 造模后1，3，5d二次給藥前，分3批處死大鼠。水合氯醛腹腔注射麻醉（0.1mL／100g），腹主動脈采血，血液室溫靜置5min，2500r／min離心5min，收集上清，保存、備用。然后以打擊部位為中心，沿?fù)p傷處切取肌肉組織，10%甲醛溶液固定，備用。

2.3 指標(biāo)檢測與方法 2.3.1 損傷局部組織，石蠟包埋，切片，染色，鏡下進(jìn)行組織學(xué)觀察，并計數(shù)嗜中性粒細(xì)胞及浸潤情況。

2.3.2 嚴(yán)格按試劑盒操作說明測定血清PGE2、IL－6含量。

4 實驗結(jié)果 4.1 組織學(xué)觀察 治療后1d，模型組肌纖維水腫，部分肌纖維碎裂，肌束間距增寬，創(chuàng)傷病灶中嗜中性粒細(xì)胞浸潤密度高。紅花油組與消腫噴劑組鏡下觀察結(jié)果與模型組類似，僅紅細(xì)胞瘀積，肌纖維水腫及微血管擴(kuò)張程度稍輕。消腫噴劑組較模型組，嗜中性粒細(xì)胞明顯減少（P＜0.05），消腫噴劑組與紅花油組無顯著差異性（P＞0.05）。

治療后3d，模型組見廣泛充血水腫，肌核增生，較多中性白細(xì)胞浸潤。紅花油組與消腫噴劑組充血、水腫減輕，肌間質(zhì)及血管周圍可見少量中性細(xì)胞浸潤。

治療后第5d，模型組部分肌纖維紅染，偶見肌纖維排列紊亂、紅細(xì)胞瘀積現(xiàn)象，細(xì)胞呈彌漫性浸潤。紅花油組與消腫噴劑組見少量充血水腫，細(xì)胞浸潤以及肌漿碎裂不明顯，肌纖維形態(tài)大致正常。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠治療后不同時期創(chuàng)傷病灶中嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)變化（±s，個／視野）

表1 各組大鼠治療后不同時期創(chuàng)傷病灶中嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)變化（±s，個／視野）

組別 第1d 第3d 第5d模型組43.22±10.05 14.56±11.22 7.35±3.13紅花油組 32.08±16.41 6.67±3.01 2.30±0.76消腫噴劑組31.51±13.11 6.70±1.92 0.00

4.2 大鼠血清PGE2含量 各實驗組血清PGE2含量峰值均出現(xiàn)在第3d，至第5d大幅降低。較空白組相比，造模各組均具有顯著差異，P＜0.01。第1d、第3d、第5d，紅花油組、消腫噴劑組較模型組均有差異性，P＜0.01或P＜0.05。結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠治療后不同時期血清PGE2含量（ng／L，±s）

表2 各組大鼠治療后不同時期血清PGE2含量（ng／L，±s）

組別 第1d 第3d 第5d空白組6.91±2.07 － －模型組 181.67±29.51 190.32±33.40 135.83±12.04紅花油組 134.00±41.62 147.41±23.09 104.63±13.75消腫噴劑組113.16±21.75 126.37±14.42 81.27±7.90

4.3 大鼠血清IL－6含量 各實驗組血清IL－6含量峰值均出現(xiàn)在第3d，至第5d大幅降低。較空白組相比，造模各組均具有顯著差異，P＜0.01。第1d、第3d、第5d，紅花油組、消腫噴劑組較模型組均有差異性，P＜0.01或P＜0.05。結(jié)果見表3。

5 討 論 急性軟組織損傷是因皮膚以下骨骼之外的組織受外來應(yīng)力作用且達(dá)到一定的強度，超過軟組織承受負(fù)荷，造成的急性破壞和組織生理功能暫時紊亂而誘發(fā)的癥狀、損傷。氣滯血瘀，筋脈阻滯是其主要病機(jī)，臨床表現(xiàn)為腫、痛、功能障礙，病理表現(xiàn)為炎性介質(zhì)的釋放增加、損傷局部的炎癥反應(yīng)和微循環(huán)障礙。

表3 各組大鼠治療后不同時期血清IL－6含量（pg／L，±s）

表3 各組大鼠治療后不同時期血清IL－6含量（pg／L，±s）

組別 第1d 第3d 第5d空白組2.41±0.57 － －模型組 49.77±19.41 57.36±13.42 38.89±8.09紅花油組 39.65±9.98 44.40±8.69 31.96±7.57消腫噴劑組30.96±7.57 36.59±6.11 21.44±3.09

IL－6主要由T、B細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，能促進(jìn)中性粒細(xì)胞的活化、聚集，多在細(xì)胞受到 TNF－α、IL－1β刺激后產(chǎn)生，血清中IL－6水平可反應(yīng)組織損傷程度［2］。PGE2是重要的炎癥介質(zhì)，能夠降低痛閾，激活外周感覺神經(jīng)末梢EP受體，敏化外周痛覺感受器［3］，其持久廣泛的擴(kuò)張血管、致痛和免疫功能的影響，在創(chuàng)傷中起重要作用。

抑制無菌性炎性滲出，改善微循環(huán)，促進(jìn)水腫吸收，減輕局部損傷，有利于創(chuàng)傷組織的修復(fù)愈合［4，5］。消腫噴劑所含藥物蘇木可以減少細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL－2的生成［6］。梔子提取物京尼平苷具有較好的治療軟組織損傷的作用。姜黃素對IL－8、MIP－1α、MCP－1、IL－1b及 TNF－α有抑制作用。乳香乙醇提取物可抑制大鼠體內(nèi)的多形核白細(xì)胞浸潤。諸藥合用可改善急性軟組織損傷動物模型癥狀、癥候，加速傷肢組織修復(fù)，抑制損傷局部炎性細(xì)胞因子IL－1β表達(dá)［7］。

本研究結(jié)果表明消腫噴劑能夠抑制急性軟組織損傷大鼠血清PGE2和IL－6表達(dá)，且在治療1d，3d，5d后與模型組比較具有顯著差異性。消腫噴劑對損傷局部炎癥反應(yīng)具有抑制作用，從而發(fā)揮發(fā)揮對急性軟組織損傷動物模型有治療作用。

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［6］姚全勝，周國林.梔子抗炎、治療軟組織損傷有效部位的篩選研究［J］.中國中藥雜志，1991，16（8）：486－488.

［7］牛淑亮，劉鳳霞，王海龍，等.消腫噴劑促進(jìn)急性軟組織損傷大鼠損傷修復(fù)的實驗研究［J］.陜西中醫(yī)，2011，32（7）：918－920.