刺血療法對KOA家兔血常規及血液流變學指標的影響

楊改琴 高小利 梁東升 白冰超 陜西省中醫醫院針灸科（西安710003）

膝關節骨性關節炎 （Osteoarthritis of knee，KOA），是指由于膝關節軟骨完整性破壞以及膝關節邊緣軟骨下骨板病變，導致膝關節癥狀和體征的一組異質性疾病。陳氏［1］研究表明，以骨內血液循環障礙為特征所導致的骨內高壓是形成膝關節骨性關節炎的重要因素，能引起該病一系列臨床癥狀，主要表現為反復發作性關節疼痛、關節僵硬、絞鎖、功能障礙。KOA的治療目的是緩解疼痛、改善關節功能和提高患者生存質量，盡可能避免治療的毒副作用的發生。因此尋找一種臨床療效確切，毒副作用小的治療手段很有必要。刺血療法是中國傳統療法之一，刺血療法是用三棱針刺破淺表血絡或俞穴，根據不同病情，放出適量的血液，通過調氣血，通經活絡以治療疾病。屬活血化瘀的范疇，源于砭刺，古稱為“啟脈”、“刺絡”，作為一種古老的臨床技法，在臨床上常常是立起沉疴，頓消痼疾，在我國綿延數千年而不衰。我們臨床中應用放血療法，治療KOA均取得了不錯的療效，為進一步研究其治病機理，立項本實驗，研究“刺絡放血療法”對家兔KOA模型的可能治療機制。

1 實驗材料 1.1 實驗動物 同批、同飼養條件6月齡未孕雌性新西蘭大白兔36只，雌雄性各18只，共36只，體重1.8～2.5kg，由西安交大醫學院實驗動物中心提供。批號：醫動字第sky08－001號。

1.2 藥品與試劑 速眠新Ⅱ注射液合劑，用法用量：速眠新Ⅱ注射液每支1.5mL，可肌肉注射或靜脈給藥，但靜脈給藥劑量應為肌肉注射量的1／2～1／3。本品肌肉注射劑量按體重計算：兔每千克0.2mL～0.3mL。生產廠家：中國云南昆明市盤龍制藥廠。青霉素 （國藥準字H23021439）。英太青（雙氯芬酸納凝膠，國藥準字H10950169）。碘伏溶液，75%酒精。

1.3 主要儀器設備 國產ZHY－III型液壓測定儀、Sharp電腦自動掃描儀；SA－600型全自動血流變分析儀 （北京賽科希德公司產）；日本SYSMEX－3000型全自動五分類血細胞分析儀。

2 方 法 2.1 分組 同批、同飼養條件6月齡新西蘭大白兔36只，雌雄各半，適應性喂養一周后，分別標記稱重，按組間均衡一致的原則，隨機分為4組，空白組（A組，n＝9）、模型組（B組，n＝9）、刺血組（C組，n＝9）、藥物組（D組，n＝9）。

2.2 模型制備 2.2.1造模原理：采用手術結扎右后肢股靜脈、臀下靜脈，阻斷實驗側部分下肢靜脈回流結合膝關節制動（自制塑料管固定膝關節），造成動物體內血流動力學異常，致骨內壓升高，形成實驗兔膝骨關節退行性變動物模型。

2.2.2 造模方法：除空白組外，各組實驗兔用20%的速眠新Ⅱ注射液合劑溶液按體重0.3mL／kg作兔耳緣靜脈內注射麻醉，生效后將［2］兔子仰臥固定于手術臺上，雙髖關節外展稍屈曲、雙膝關節屈曲30°，于右腹股溝處作1cm縱行切口，分離出股靜脈，緊靠腹股溝韌帶處結扎，再于右側髖關節大轉子后約1.0cm處為中點，上下直切口3.0cm，分離髂內靜脈屬支臀下靜脈，并予以結扎，術口包扎后，右下肢以自制管形塑料管膝關節模型將膝關節固定于伸直位，以限制膝關節活動，左下肢不固定。按組放入籠中自由活動。術后每天肌肉注射青霉素20萬單位，連續7天，以預防感染。

2.3 動物分組及處理方法 造模10周后全部實驗兔于左膝關節周圍脫毛處理，以便于治療及觀察。

2.3.1 空白組、模型組正常飼養，不作任何處理。

2.3.2 刺血組、藥物組，分組每天予以不同治療。刺血組：在實驗兔的膝關節周圍尋找迂曲線狀絲絡或呈蚯蚓狀脈絡的瘀滯淺表靜脈，選好欲刺血部位，然后在欲刺部位的近心端，用繃帶或橡皮管綁住，之后先用2%碘酒消毒皮膚、再用75%酒精脫碘，戴一次性無菌乳膠手套，左手拇指按壓在欲刺部位的下端，右手拇指、食指、中指持針（5號注射用針頭），對準表淺靜脈瘀曲處，直刺后迅速退出，即刺破血管前壁，讓血液順勢流出，把繃帶或橡皮管松綁，直到血流自行停止，使針口附近積血盡出（總出血量約1mL～2mL）。針眼再用2%碘酒消毒，最后用透氣膠布封住針眼。2次／周，共治療8周。

藥物組：將英太青（雙氯芬酸納凝膠）研末至粉狀，加乳化劑調至混懸液，以9.8mg／kg給實驗兔灌服，將治療時間亦定為8周。

本實驗采用手術結扎右下肢股靜脈、臀下靜脈，阻斷實驗側部分下肢靜脈回流結合膝關節制動建立KOA模型，因此，造模過程對個人操作技術及實驗室環境要求較高，造模難度較大，動物死亡率較高（文獻報道死亡率20%左右）。因此，我們已前期進行了預實驗，以探索實驗條件，熟練實驗操作技術，提高造模成功率。造模過程中嚴格無菌操作，術后注射青霉素鈉注射液，預防感染。

3 標本采集 8周后，全部實驗兔于禁食不禁水24h后，以20%的速眠新Ⅱ注射液合劑溶液按體重0.3mL／kg作耳緣靜脈麻醉，然后將兔仰臥固定于兔臺上，右側膝關節周圍剃毛，以碘伏消毒皮膚后首先測骨內壓，隨后從耳中動脈抽取血做血常規、血液流變學檢測。

4 檢測指標 4.1 測定方法 采用美國產的電磁血流量計檢測骨內壓，隨機抽檢5～6只動物，以骨內壓達到18～20mmHg為建模成功。

4.2 統計學方法 所實驗數據收集整理后應用SPSS16.0統計軟件進行T檢驗統計分析，實驗數據用（±s）形式表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05有統計學意義，P＜0.01有顯著統計學意義。

5 結 果 5.1 刺血療法及藥物治療刺血療法及藥物治療血常規的影響 試驗結束時，從家兔耳中動脈取血1mL用日本SYSMEX－3000型全自動五分類血細胞分析儀做血常規檢測，結果見表1。

表1 刺血療法及藥物治療對血常規的影響

表1可見模型組、藥物組WBC均高于對照組，雖有統計學意義，但這是由于手術損傷引起，刺血組WBC和對照組相比無差異，說明刺絡放血療法有助于改善動物手術損傷引起的炎癥反應；表1結果說明該造模方法及刺絡放血療法能顯著降低家兔血液中的白細胞數量，對家兔血常規中紅細胞及血紅蛋白無影響。

5.2 刺血療法及藥物治療對KOA模型家兔對血液流變學的影響 取血5mL新鮮血液注入肝素抗凝試管中，采用全自動清洗旋轉式黏度分析計測定全血高切黏度、全血低切黏度、紅細胞聚集指數、紅細胞壓積和血漿黏度，結果見表2。

表2 刺血療法及藥物治療對KOA模型家兔對血液流變學的影響

從表2中可以看出模型組動物血液流變學各項指標與空白組相比均有所升高；刺血組與模型組比較各項指標都顯著降低（P＜0.01），說明刺絡放血療法有助于改善骨內壓升高（詳見后續論文）及骨關節退行性改變所引起的血液流變學改變。

6 討 論 本實驗采用家兔為研究對象，觀測記錄了血常規及血液流變學的變化。文獻報道膝關節骨性關節炎屬于我國傳統醫學記載的“痹癥”、“骨痹”等范疇，《內經》曰：“病在骨，骨重不可舉，骨髓酸痛，寒氣至，名曰骨痹。”刺血療法是針灸治療中廣泛使用的一種針刺方法，《素問·血氣形志》篇說“凡治病必先去其血。”“久痹不去身者，視其血絡，盡出其血。《靈樞·壽夭剛柔》”。應用的原則是“宛陳則除之”（靈樞·九針十二原》）。放血的方法是“絡刺者，刺小絡之血脈也”，“贊刺者，直出直入，數發針而淺之出血”，通過刺血療法達到疏通經絡，促進血液循環，使氣血通暢的目的。血液流變學是一門研究血液及其組成成分流動變形規律的科學。生命的維持與血液流動時分不開的，機體正常機能活動和防御功能都必須有正常的血液流變狀態［3］。現代研究表明［4］，祖國醫學血瘀證的實質是血液處于濃、粘、聚、凝的“高凝狀態”，從而使全身或局部血液循環和微循環發生障礙，而產生一系列疾病，這就是血瘀證產生的病理基礎。1982年中國中西醫結合研究會活血化瘀專業委員會成立時，血液流變學成為活血化瘀臨床與基礎研究中的重要指標，血液流變學正式列入血瘀證診斷標準的客觀指標，并可作為反應各種活血化瘀藥物等治療作用，改善血液循環障礙，增加血液流量的一個評定標準［4］。

國外學者認為膝關節骨性關節炎的主要病因［5］，在于蛋白多糖的合成紊亂和膠原構架組織的分解，提出兩個主要因素，一是骨內高壓，另一個就是機械作用方面：主要為骨小梁微細骨折愈合，致使軟骨下股質變硬，致關節軟骨進行性損害。骨內靜脈瘀滯是形成骨內高壓的主要因素，而骨內微循環的病理改變是引起骨內高壓持續存在的主要的原因。胡氏等［5］以中醫腎虛理論為綱，現代基礎研究為體，解釋膝骨性關節炎的發病機制：也認為血液循環障礙最為重要。有醫學研究發現刺血療法是通過神經體液的調節作用，改善微循環及血管功能，改變血液成份，排除血中有毒有害的物質，促進人體新陳代謝，提高機體的免疫功能，刺激骨髓的造血功能，使循環中的年幼紅細胞增加，代謝活性旺盛。所以，刺血療法降低骨內高壓是通過改善骨內高壓下微循環病理狀態這一本質，阻斷了骨內高壓形成的惡性循環路徑，從而介入KOA的病理發展過程。為刺血療法在治療膝關節骨性關節炎時對血液流變學的影響提供了最初的理論依據。本研究者［7］采用刺絡放血療法，取病變膝關節處瘀曲的血絡治療膝骨關節炎，刺出血20～30mL，總有效率為97.2%。以上資料均證明刺絡放血治療KOA有效可行。

從本立項實驗研究結果容易看出刺血法能顯著降低血液中的白細胞數量，說明刺絡放血對病變機體局部的炎性物質有良性刺激作用，同時說明每天放血1～2mL不足以引起機體失血反應，血中紅細胞及血紅蛋白并沒有受到影響。另外通過對血液流變學各項指標的觀測發現，血液流變學中的全血高切黏度、全血低切黏度、紅細胞聚集指數、紅細胞壓積和血漿黏度五項指標在治療前后均有顯著性差異。進而說明刺血療法治療KOA模型家兔的機理，主要是改善了KOA模型家兔臨床癥狀與血液中的異常指標，具有降低病變機體的炎性細胞，改善血液微循環的障礙，起到活血化瘀、通絡止痛的作用。由此可知臨床上刺血療法是通過KOA患者機體的改善機體的血液循環，進一步消除局部的炎性細胞，改善或解除血液高粘滯狀態，取得了治療膝骨性關節炎的良好療效。這也豐富了刺血療法治療膝關節骨性關節炎的機理，并為臨床推廣提供了依據。

［1］陳 群.骨性關節炎發病機制的研究進展［J］.福建中醫藥，2002，33（6）：50.

［2］許學猛，王羽豐，鄧晉豐，等.補腎活血膠囊影響兔膝關節退變性疾病骨內壓化的實驗研究［J］.中國中醫骨傷科，2001，9（4）：24－27.

［3］黃迪君，駱永珍，周志昆，等.灸刺法對實驗性RA大鼠血液流變學的影響［J］.成都中醫藥，1996，5：41－43.

［4］姜春華.活血化瘀研究新編［M］.上海.上海醫科大出版社，1990：31.

［5］王新于.綜合刺血療法治療膝骨性關節炎的臨床研究［D］.廣州中醫藥，2007：10.

［6］胡勁松，曾一林.退行性膝關節炎的發病機理研究［J］.中醫正骨，1999，11（12）：49－50.

［7］楊改琴，黃麗萍，蘇同生，等.刺血療法治療膝骨關節炎106例［J］.陜西中醫，2010，31（7）：887.