蛋黃卵磷脂提取工藝探索

何深知，邵建群，宮寧強，陳 敏，顧 微

（首都醫科大學 化學生物學與藥學院實驗教學中心，北京 100069）

卵磷脂是一種含磷的極性脂類物質，由法國人Gobley于1846—1847年從腦和蛋黃中首先發現［1］，目前，它被譽為與蛋白質、維生素并列的 “第三營養素”。卵磷脂有極高的營養和醫學價值，具有延緩衰老、提高大腦活力、治療動脈硬化、解除心腦血管疾病、預防脂肪肝、潤澤皮膚等多種生理功能，同時還具有很好的乳化作用和抗氧化性能［2］。因此，卵磷脂在食品、醫藥、化妝品等行業應用廣泛［3］。

卵磷脂主要存在于大豆、蛋黃、菜籽、堅果、肉類、魚類及動物內臟中［4］。卵磷脂主要包括蛋黃卵磷脂和大豆卵磷脂。蛋黃卵磷脂純度高，其中含磷脂酰膽堿（PC）達78%，而大豆卵磷脂中只有16%；另外，蛋黃卵磷脂富含飽和脂肪酸，其氧化穩定性也優于大豆卵磷脂，對人而言，蛋黃卵磷脂比大豆卵磷脂更易被人體吸受，因此蛋黃卵磷脂的功能特性及應用開發現在正日益受到人們的關注［5］。

提取卵磷脂的方法主要有：有機溶劑萃取法、柱層析法、乙酰化法、高效液相色譜法、半透膜法、復合鹽沉淀法以及超臨界二氧化碳萃取法等［6］。用上述方法研究大豆卵磷脂的文獻很多，方法成熟，而對蛋黃卵磷脂的研究起步較晚，其提取方法的研究特別是將其用于教學研究的文獻相對較少。目前，蛋黃卵磷脂由于受到提取技術的限制，成功制取的量非常少，致使其價格相當昂貴，故市場上的卵磷脂多為大豆磷脂。因此，系統研究蛋黃卵磷脂的提取技術具有重要價值。

本文采用不同的有機溶劑，對蛋黃中的卵磷脂在不同的工藝條件下進行了提取，以期找到較合理的提取工藝條件。此外，本文還對不同的提取方法進行了比較，為最終廉價高效地提取蛋黃卵磷脂的工業化奠定基礎實驗數據。

1 實驗

1.1 試劑與儀器

試劑：市售鮮雞蛋，體積分數為95%的乙醇，無水乙醇，乙醚，丙酮，氯仿，石油醚（北京現代東方精細化學品有限公司，AR）。

儀器：電子分析天平（TE212－L），賽多利斯科學儀器有限公司；循環水式多用真空泵（SHB－ⅢA），鄭州長城科工貿有限公司；超聲波清洗儀（KQ－500型），昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 卵磷脂的提取步驟

稱取煮熟的雞蛋黃并研磨，加入體積分數為95%的乙醇研細抽濾；濾渣再加入95%的乙醇研細抽濾，合并兩次濾液，并轉移至燒瓶中，蒸餾除去乙醇；殘余物加少量無水乙醇，蒸發皿上蒸干，得到黃色油狀物；冷卻后加入氯仿使其完全溶解，再慢慢加入丙酮，即有卵磷脂析出。重復加入氯仿和丙酮的操作，最后得到較純凈的卵磷脂，并計算提取率。

1.3 探索提取工藝的實驗設計

生物活性物質的提取效果受多種因素的影響，比如提取溶劑的種類、提取溫度、溶液的pH値、浸泡時間，提取方式、提取次數、溶劑用量等［7］。考慮到卵磷脂不耐高溫，在25℃時活性最強，高于50℃時，其中的不飽和脂肪酸極易氧化而失去生理活性；同時溶液的pH値也不宜使溶液呈堿性條件，因為在堿性環境中卵磷脂易發生分解，喪失生理活性［8］。所以，我們把提取溫度定在25℃，溶液的pH値定在中性環境，然后在上述提取實驗的基礎上從溶劑種類、浸泡時間，提取方式、提取次數、溶劑用量5個方面進行對比實驗，從而獲得卵磷脂的最優提取條件。

2 結果與討論

2.1 溶劑種類對卵磷脂提取率的影響

卵磷脂為兩性分子，既有脂溶性，又具有親水性。卵磷脂易溶于氯仿，可溶于乙醇、乙醚、甲醇、苯、石油醚等，不溶于丙酮。以往文獻常選用95%的乙醇作為提取劑，再用氯仿和丙酮把卵磷脂分離出來［9］。由于乙醇溶解性好、廉價、無毒且可回收利用［10］，本文中也用它作為提取劑。氯仿作為溶劑毒性大，污染環境并危害操作者的健康，應以其他綠色溶劑替代。為此，選用兩種較為安全的溶劑，即乙醚和石油醚，與氯仿進行對比實驗，其他條件不變，實驗結果見表1。

表1 3種溶劑提取率的對比

比較可知，除氯仿外，用乙醚分離得到的卵磷脂提取率較石油醚高，因此本文用乙醚代替氯仿。

2.2 浸泡時間對提取率的影響

抽濾前將蛋黃放在95%的乙醇中浸泡一下（下述的浸泡的含義同此），然后按上述的提取步驟提取，對比不同浸泡時間的提取率。選取15、30、60、120、240 min進行實驗，其他條件不變。提取溫度25℃；1次提取。結果如圖1所示。

圖1 浸泡時間對卵磷脂提取率的影響

從圖1可以看出，在實驗時間范圍內，卵磷脂的提取率隨著浸泡時間的增加而增加，可見延長浸泡時間有利于提高卵磷脂提取率。但考慮到教學課時及效率問題，將浸泡時間控制在40～60min范圍內較為合適。

2.3 超聲對提取率的影響

超聲提取技術被譽為“中藥和天然產物提取的技術革命”，利用超聲波產生的強烈震動、高的加速度、強烈的空化效應、攪拌等特殊作用，破壞細胞壁，使溶劑易滲透到細胞中，加速天然活性成分的溶出［11］。實驗中我們在浸泡的同時加上超聲強化，彌補了傳統有機溶劑浸泡提取法的不足。

抽濾前，浸泡時加超聲進行實驗，選取15、30、60 min進行實驗，提取溫度25℃，1次提取，其他條件不變。結果如圖2。

圖2 浸泡加超聲時間對卵磷脂提取率的影響

從圖2可看出，超聲強化技術的采用明顯提高了卵磷脂的提取率。單純浸泡與浸泡加超聲兩種提取方式的提取率的比較見圖3。從圖3可知，加入超聲技術提取的優越性是很明顯的，尤其在30min左右時間段內，浸泡加超聲比單純浸泡的提取率提高了3.16個百分點。因此，只要條件允許，應采用浸泡加超聲的提取方式。

圖3 單純浸泡與浸泡加超聲提取率比較

2.4 1次浸泡與2次浸泡提取的提取率比較

在總提取時間、總溶劑量相同條件下，1次浸泡與2次浸泡的實驗結果比較見圖4。

圖4 1次浸泡與2次浸泡提取率比較

從圖4可看到，在總時間和總溶劑量相同的情況下，不論是單純浸泡還是浸泡加超聲，2次提取的效果均比1次提取的效果好。可以想見提取次數越多，提取率會越高。但是文獻［12］中有數據指出，提取次數越多雜質也越多，影響產品的純度，還會給后續步驟造成麻煩，因此，我們在未做多次提取的對比實驗的情況下采用2次提取。

2.5 乙醇用量對提取率的影響

提取劑用量一定會對最終提取率產生影響。本文選取95%的乙醇的用量為60、80、100、120、140mL進行對比實驗，結果如圖5所示。浸泡時間60min，提取溫度25℃，1次提取。

圖5 乙醇用量對卵磷脂提取率的影響

從圖5可看出，95%的乙醇用量在120mL（相當于1g蛋黃的乙醇用量為5mL）之內時提取率隨乙醇用量增加的增勢很強，之后趨平。因此，從提取和乙醇回收兩方面考慮，1g蛋黃的乙醇用量為4～5mL為佳。

3 結論

綜合以上實驗數據，得到提取卵磷脂最佳工藝條件是：提取溫度25℃；溶液的pH値為中性環境；以95%的乙醇作為提取劑，用乙醚和丙酮把卵磷脂分離出來；提取方式為浸泡加超聲；提取次數為2次，每次15～20min；1g蛋黃的乙醇用量為4～5mL。上述方法主要考慮了教學需求，所以可為實驗教學采用，亦可作為蛋黃卵磷脂工業化生產的數據參考。

4 結束語

傳統的蛋黃卵磷脂的提取工藝的提取效率低，隨著高新技術的日益成熟，利用高新技術與傳統工藝結合將成為提取高純度卵磷脂的新的手段。

進入21世紀以來，我國蛋黃卵磷脂的提取和應用取得了較大進展，但還未能從蛋黃中提取高純度的食用、醫藥用卵磷脂。我國的卵磷脂生產就其生產規模、技術水平而言與國外相比還差距較大，仍需大量進口。卵磷脂的生產是當前國家重點支持的技術開發領域之一。將來還應對蛋黃卵磷脂的基礎性質、功能做深入研究，探索其不同及優于大豆卵磷脂的特性，從而發展出適宜蛋黃卵磷脂的生產應用技術。隨著高新技術的發展與應用，相信不久的將來，優質蛋黃卵磷脂產品將會得到更大規模的開發與更廣泛的應用。

（

）

［1］常皓，王二雷，宮新統，等.蛋黃卵磷脂研究概況［J］.食品工業科技，2010（5）：414－416.

［2］吳漢東，佟偉.蛋黃卵磷脂的提取方法研究［J］.食品工業，2010（2）：49－50.

［3］李揚，劉靜波，林松毅.高純度蛋黃卵磷脂提取技術研究［J］.食品科學，2006，27（12）：851－853.

［4］陳艷輝，韋月園，玉現新，等.乙醇提取鴨蛋黃卵磷脂的工藝研究［J］.廣州化工，2011，39（9）：75－77.

［5］譚利偉，麻麗坤，趙進，等.蛋黃卵磷脂的應用研究進展［J］.中國家禽，2005，27（21）：35－36.

［6］吳漢東，佟偉.高純度蛋黃卵磷脂的提取工藝研究［J］.安徽農業科學，2010，38（14）：7537－7538.

［7］臧榮鑫，蔡勇.卵黃卵磷脂提取純化及純度鑒定實驗設計［J］.大學化學，2010，25（2）：46－48.

［8］高兆建，甄宗圓，賀稚非，等.蛋黃卵磷脂的分離提純及鑒定研究［J］.肉類工業，2003（4）：15－18.

［9］曾慧慧，劉俊義.現代化學實驗［M］.北京：北京大學醫學出版社，2003.

［10］趙彬俠，張小里，盧榮，等.蛋黃卵磷脂的提純工藝研究［J］.西北大學學報，2004，34（3）：297－300.

［11］肖虹，周裔彬，尚巖巖，等.超聲輔助提取雞蛋卵磷脂的工藝研究［J］.食品工業科技，2010，31（8）：255－257.

［12］尤秀麗，李仕原，陳茂林，等.從大豆粉末中提取卵磷脂的超聲輔助萃取新工藝［J］.應用化工，2011，40（2）：252－254.