臍帶血干細胞移植治療非肝炎后肝硬化的臨床研究*

楊彥林 王樹平 王麗華 劉艷茹 付廣印 韓東亮 李 華 吳國良 楊占輝

肝硬化是臨床常見的終末期肝病，在我國，肝炎后肝硬化是主要的肝硬化類型。但酒精性肝硬化、藥物性肝硬化等非肝炎后肝硬化的病例逐年增多，且藥物治療效果欠佳。本研究對我院采用臍帶血干細胞經肝動脈灌注移植治療的12例非肝炎后肝硬化患者資料進行分析，評價該方法的近期療效及安全性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年3月—2011年6月入住我院的非肝炎后肝硬化患者12例。納入標準：（1）肝硬化失代償期。（2）肝功能Child分級C級以上或C級患者經藥物治療能耐受手術者。（3）預期生存期1年以上者。排除標準：（1）肝硬化代償期。（2）肝功能C級雖經治療仍不能耐受手術者。（3）預期生存期不足 1 年者。（4）伴發肝癌者。（5）其他原因不能耐受手術者。12例患者中男7例，女5例，年齡52～70歲，平均（61.6±4.5）歲；5例為酒精性肝硬化，4例為膽汁淤積性肝硬化，2例為藥物性肝硬化，1例為特發性肝硬化 （病因不明）。Child-Pugh分級：A級3例，B級6例，C級3例。臨床表現：食欲減退12例，乏力12例，不同程度腹脹及腹水9例。患者均遵循知情同意、自愿的原則，術前簽訂臍帶血干細胞移植同意書，并報院倫理委員會批準備案。

1.2 試劑及儀器 PHILIPSINTEGRISCV數字減影血管造影機，AMS美森全自動生化分析儀，臍帶血干細胞10～15 mL由北京天河森藍醫療設備有限公司提供，細胞計數 （2.0～2.8）×109/mL，細胞成活率>96%。

1.3 方法 所有患者入院后均行基本的內科綜合治療，禁飲酒，停止服用肝損害藥物，期間不予輸注白蛋白。局麻下改良Sildinger技術穿刺右側股動脈插管至肝固有動脈，行選擇性肝動脈造影排除早期小肝癌，將臍帶血干細胞提取液10～15 mL與生理鹽水1∶1稀釋后經導管以1 mL/min的速度緩慢注入。術畢拔管，穿刺點加壓包扎，肢體制動24 h，術后給予促肝細胞生長素140 mg，1次/d，持續2周。

1.4 觀測指標 于術前1周、術后1周、1個月、3個月分別測量患者丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、白蛋白（ALB）、總膽紅素（TBIL）及纖維蛋白原（FIB）含量，并觀察患者臨床癥狀和體征改善情況。

1.5 統計學方法 使用SPSS 17.0軟件進行統計分析，計量數據采用±s表示，比較采用配對t檢驗，計數資料比較采用Fisher確切概率法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 手術結果 所有患者均順利插管至肝固有動脈，常規造影均有不同程度肝臟體積縮小、肝葉比例失調等肝硬化表現，未發現合并小肝癌者，干細胞均順利注入，術中、術后無明顯并發癥出現，技術成功率100%。

2.2 臨床癥狀變化情況 患者術后1周納差、乏力、腹脹、腹水開始有所改善，術后3個月時均較術前明顯改善，差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01），見表1。術后3個月時復查腹部B超和CT均未見肝臟新生占位病變。

2.3 肝功能變化情況 患者ALT術后1周較術前升高，術后1個月時下降至術前水平，術后3個月時較術前明顯降低。ALB術后1周較術前輕度降低，術后1月時升至術前水平，術后3個月時較術前明顯升高，但仍低于正常值（35～50 g/L）。TBIL術后1周時均值較術前有所升高，但差異無統計學意義，術后1個月時降至術前水平，術后3個月時較術前明顯減低（P＜0.05）。血漿FIB術后1周較術前稍有降低，但差異無統計學意義，術后1個月時升至術前水平，術后3個月時較術前明顯升高，但仍低于正常值（2～4 g/L），見表2。

Table 1 Changes of clinical symptoms and signs at different times表1 不同時間臨床癥狀及體征變化情況

Table 2 Changes of liver function at different times表2 不同時間肝功能變化情況 （n=12，±s）

Table 2 Changes of liver function at different times表2 不同時間肝功能變化情況 （n=12，±s）

t：均與術前1周相比，*P<0.05

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3 討論

非肝炎后肝硬化主要包括酒精性肝硬化、膽汁淤積性肝硬化、藥物性肝硬化、自身免疫性肝硬化及遺傳代謝性肝硬化等，其病理變化及臨床表現與肝炎后肝硬化相似，目前無特效治療方法。原位肝移植是治療終末期肝病的最佳方法，但供體缺乏、昂貴的手術費和長期使用免疫抑制劑等因素限制了其應用。研究顯示臍帶血干細胞能轉化為肝樣細胞并表達白蛋白及角蛋白[1]，抑制肝臟纖維化的發展，改變細胞微環境并促進受損肝細胞的再生[2]。臍帶血干細胞來源于中胚層，具有多向分化潛能，可以跨胚層分化為神經細胞、肌細胞、骨細胞、肝細胞及血管等多種功能細胞[3]，臍帶血中的干細胞含量遠較骨髓豐富且其表面無血型分子及主要組織相容性復合體（major histocompatibility complex，MHC）分子，基本不具有抗原性，臨床應用無需配型[4]。動物及人體實驗表明，肝臟干細胞移植后受體的肝功能均能得到不同程度的改善[5-6]。

本組患者干細胞移植后1周至1個月納差、乏力、腹脹、腹水等臨床癥狀開始不同程度改善，術后3月時均較術前明顯改善。患者ALT術后1周較術前升高，ALB術后1周較術前降低，考慮與手術應激有關。相關指標術后1個月時恢復至術前水平，術后3個月時較術前明顯好轉，但ALB及FIB仍低于正常下限。提示干細胞移植后從定植到分化為功能細胞約需1個月的時間，患者肝功能的恢復則可能需要更長時間，與以往報道相似[6-7]。

本組患者均順利完成手術并出院，無明顯并發癥。雖然有實驗顯示肝硬化小鼠干細胞移植后肝腎綜合征的發生率明顯升高[8]，但在本組患者及其他報道中并未有相似發現[9]。所有患者術后3個月均行肝膽B超和CT檢查未見占位病變。

干細胞移植治療肝硬化操作安全可靠，近期效果明確，顯示出良好的應用前景，但其具體機制仍不十分明確。干細胞移植的最佳時間、遠期療效、是否需要多次移植以及是否增加罹患腫瘤的風險等問題仍需進一步研究。

[1]Bassiouny AR,Zaky AZ,Abdulmalek SA,etal.Modulation of P-endonuclease1 levels associated with hepatic cirrhosis in rat model treated with human umbilical cord blood mononuclear stem cells[J].Int JClin Exp Pathol,2011,4(7):692-707.

[2]Elkhafif N,El Baz H,Hammam O,etal.CD133(+)human umbilical cord blood stem cells enhance angiogenesis in experimental chronic hepatic fibrosis[J].APMIS,2011,119(1):66-75.

[3]Lee OK,Kuo TK,Chen WM,etal.Isolation of multipotent mesenchymal stem cells from umbilical cord blood[J].Blood,2004,103(5):1669-1675.

[4]周漢超,劉黎,周健,等.骨髓、臍血干細胞中淋巴細胞和單核細胞與CD34、CD38亞型細胞百分比在治療肝硬化中的比較[J].中華臨床醫師雜志,2011,5(6):1731-1733.

[5]Lin SZ,Chang YJ,Liu JW,etal.Transplantation of human Wharton's Jelly-derived stem cells alleviates chemically induced liver fibrosis in rats[J].Cell Transplant,2010,19(11):1451-1463.

[6]Khan AA,Parveen N,Mahaboob VS,etal.Management of hyperbilirubinemia in biliary atresia by hepatic progenitor cell transplantation through hepatic artery:a case report[J].Transplant Proc,2008,40(4):1153-1155.

[7]Lin SZ,Chang YJ,Liu JW,etal.Transplantation of human Wharton′s Jelly-derived stem cells alleviates chemically induced liver fibrosis in rats[J].Cell Transplant，2010,19(11):1451-1463.

[8]Alvarez-Mercado AI,García-Mediavilla MV,Sánchez-Campos S,etal.Deleterious effect of human umbilical cord blood mononuclear cell transplantation on thioacetamide-induced chronic liver damage in rats[J].Cell Transplant，2009,18(10):1069-1079.

[9]翁敬飚，韋搖玲，阮海蘭，等.人臍帶干細胞外周靜脈移植治療酒精性肝硬化的可行性研究 [J].時珍國醫國藥,2010,21(8):2054-2056.