眼針對腦缺血再灌注損傷模型大鼠HIF-1α表達的影響*

宓 丹 王 建 郗 歐

（1.遼寧中醫(yī)藥大學，遼寧 沈陽 110032；2.遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽 110032；3.遼寧中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院，遼寧 沈陽 110034）

缺血性腦血管病是最常見的腦血管病，其發(fā)病率和致殘率極高。缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）是低氧應答狀態(tài)中一種重要的轉(zhuǎn)錄因子。HIF-1α及其下游靶基因的表達在血管再生、糖代謝、細胞增殖和分化等方面發(fā)揮著重要作用［1］。眼針療法是彭靜山教授提出的治療腦病的有效方法。本研究旨在通過觀察眼針療法對腦缺血再灌注損傷模型大鼠HIF-1α表達的影響，探討該療法治療腦梗死的作用機制，為臨床實踐提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物與分組 健康SPF級SD大鼠80只，雌雄不拘，體質(zhì)量（280±20）g，由上海西普爾必凱實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（滬）2008－0016。大鼠按隨機數(shù)字表法分為空白組、假手術組、模型組、眼針組。除空白組8只外，其余3組根據(jù)缺血及再灌注時間不同分為缺血2h后再灌注3、24、72h，每組每時間點8只。

1.2 模型制備 參照文獻［2］，模型組、眼針組及假手術組采用改良線栓法建立大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷模型。模型成功標準：大鼠清醒后出現(xiàn)左側(cè)霍納癥（左側(cè)眼臉變小），左側(cè)肢體屈伸不利或癱瘓。另假手術組與模型、眼針組不同之處在于釣魚線插入深度為0.5～1 cm?？瞻捉M未做任何處理。神經(jīng)系統(tǒng)損傷癥狀參照ZeaLonga5分制評分標準［3］：無癥狀為0分；不能完全伸展對側(cè)前爪為1分；向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈為2分；向?qū)?cè)傾倒為3分；不能自發(fā)行走，意識喪失為4分。評分為1～3分者納入下一步實驗組，其余未達標準者排除。

1.3 眼針取穴及刺法 眼針組：取31號13 mm針，于大鼠眼眶周圍2 mm處針刺，參照人體取穴方法［4］，取肝區(qū)、上焦區(qū)、下焦區(qū)、腎區(qū)。手法：取平刺進針3 mm。留針20 min，期間捻轉(zhuǎn)行針3次，1 min/次。眼針組于缺血2 h再灌注即刻針刺1次，以后每12小時針刺1次。模型組、假手術組每12小時抓取1次。

1.4 試劑 ELASA試劑盒購自北京博奧森試劑有限公司，其余試劑由遼寧中醫(yī)藥大學實驗室制備。

1.5 標本采集與檢測 動物完成觀察時間后，以10%水合氯醛（3.5 mL/kg）腹腔麻醉后，剪開腹部，暴露腹主動脈，抽取動脈血2 mL。將血液靜置5 min后離心，取上部血清。嚴格按照ELASA試劑盒步驟要求操作。

1.6 統(tǒng)計學處理 應用SPSS10.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（）表示；組間比較采用單因素方差分析處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 眼針對腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經(jīng)缺損程度評分影響 見表1。腦缺血再灌注即刻和72 h評價大鼠神經(jīng)缺損情況。腦缺血再灌注后模型組和眼針組大鼠均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能障礙，如提尾時左側(cè)前肢不能伸直，行走向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)或傾倒等；假手術組大鼠無神經(jīng)功能障礙表現(xiàn)。模型組與眼針組模型組在腦缺血再灌注即刻神經(jīng)功能評分無明顯差異（P＞0.05）。模型組大鼠神經(jīng)功能障礙在72 h略有減輕，而眼針組大鼠神經(jīng)功能障礙在72 h顯著減輕。眼針組與模型組比較有明顯差異（P＜0.05）。

表1 各組大鼠神經(jīng)缺損程度評分比較（分，）

表1 各組大鼠神經(jīng)缺損程度評分比較（分，）

與模型組同時期比較，*P＜0.05。下同。

2.2 眼針對腦缺血再灌注損傷模型大鼠HIF-1α表達的影響 見表2。在空白組HIF-1α少量表達，缺血、缺氧可以刺激的表達。模型組腦缺血后3 h可見HIF-1α表達增高，在24 h達到高峰，72 h表達略有下降。眼針組與模型組HIF-1α表達趨勢相同，但眼針組各時間點與模型組比均有顯著差異（P＜0.05）。

表2 各組大鼠HIF-1α表達比較（）

表2 各組大鼠HIF-1α表達比較（）

3 討 論

HIF-1α是一種調(diào)節(jié)氧穩(wěn)態(tài)平衡的轉(zhuǎn)錄因子。常氧狀態(tài)下，HIF-1α迅速降解；而在低氧狀態(tài)下，變得穩(wěn)定，并具有轉(zhuǎn)錄活性，廣泛參與哺乳動物細胞缺氧誘導的特異應答［5］?；罨腍IF-1α與靶基因的低氧反應元件結(jié)合促進靶基因轉(zhuǎn)錄。研究已發(fā)現(xiàn)受其調(diào)控的下游靶基因有100多個，HIF-1α通過調(diào)控靶基因在腦缺血時主要發(fā)揮以下作用：促進血管新生、減輕神經(jīng)元損傷、促進神經(jīng)元再生［6-9］。HIF-1α在缺血缺氧損傷中的重要作用，使通過基因或藥物手段調(diào)節(jié)HIF-1α的活性成為近年研究的熱點。譚新杰等［10］采用攜帶HIF-1α基因的重組腺病毒載體（Ad-HIF-1α）注射缺血側(cè)腦室治療缺血再灌注鼠模型發(fā)現(xiàn)，Ad-HIF-1α治療組腦梗死體積較其他組明顯減小，具有顯著差異。楊續(xù)艷等［11］通過電項針刺激可以提高HIF-1α及HIF-1α mRNA的表達，改善缺血半影區(qū)神經(jīng)細胞功能狀態(tài)，促進神經(jīng)膠質(zhì)細胞的增生。

眼針是彭靜山教授發(fā)明的微針技術。彭老根據(jù)中醫(yī)理論“五輪八廓學說”，用后天八卦將眼睛分為八個區(qū)，每區(qū)代表一個卦位，再配以臟腑，有根據(jù)各區(qū)內(nèi)白睛上的脈絡變化，用以觀眼識病，并在此基礎上發(fā)明了眼針［12］。本實驗結(jié)果表明，眼針組與模型組在腦缺血再灌注即刻，神經(jīng)功能缺損評分無差異，再灌注72 h眼針組與模型組神經(jīng)功能缺損評分均有改善，說明眼針治療可以改善急性腦缺血再灌注損傷模型大鼠的神經(jīng)功能障礙。細胞因子結(jié)果表明，模型組3 h可以檢測HIF-1α表達上調(diào)，24 h達到高峰，72 h表達下降，但仍高于3 h（表2結(jié)果顯示，72 h低于3 h）；這說明缺氧可以刺激的表達。眼針組與模型組表達趨勢相同，但眼針組各時間點HIF-1α與模型組比表達顯著升高。表明眼針治療可以通過促進HIF-1α的表達，提高腦神經(jīng)元對缺氧的耐受，發(fā)揮腦保護的作用。

［1］蔡拓，周艷芳，鄧宇斌.缺氧誘導因子-1在缺血性腦損傷中的作用［J］.國際腦血管病雜志，2010，18（4）：330-335.

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