色診客觀化研究在STZ介導2型糖尿病模型大鼠皮膚相關指標改變中的應用＊

翟 煦，榮培晶，王宏才，孟 宏，李少源，黃 鳳，何孟冬，王 霞，宋 杰

(中國中醫科學院針灸研究所，北京 100700)

2型糖尿病(T2DM)是當今發病率較高且可產生危險后果的慢性疾病，它可引起多個系統多重組織層次的并發癥。T2DM確診前有不少人以皮膚病就診，如認識T2DM合并皮膚病的特點，可為早期診斷T2DM提供線索。受中醫色診啟發，本研究確定一定的皮膚客觀指標，建立T2DM模型大鼠，應用德國Courage+Khazaka公司產MPA 9無創性皮膚測量系統，測定鏈脲佐菌素(STZ)介導的糖尿病大鼠模型造模后不同部位皮膚皮膚含水量(Stratum Corneum Hydration，SCH)、水分散失(Transepidermal Water Loss，TEWL)、紅斑指數(Erythema Index，EI)、黑色素指數 (Melanin Index，MI)、色差值(Chromatic aberration，L.a.b.)等方面指標，旨在從動物實驗方面觀察糖尿病模型大鼠的皮膚指標改變，探討中醫色診在診斷糖尿病方面的意義。

1 材料與方法

1.1 動物與分組

SPF級健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠26只(180g～220g)，購于中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心(合格證號SCK-(軍)2007-004)。實驗遵循科技部2006年9月頒布的《關于善待實驗動物的指導性意見》相關規定，所有大鼠均給予普通顆粒料飼養，自由飲水，每籠5只，適應性飼養7d;隨機選取10只為空白對照組(Control Group)，余下為模型組(Modeling Group)16只。

1.2 主要試劑與儀器

血糖測定應用拜安捷2型(拜耳公司Bayer，德國)快速血糖儀，皮膚測指標試儀器采用Multi Probe Adapter 9(MPA 9，Courage+Khazaka公司，德國)皮膚測試系統，鏈脲佐菌素(Sigma公司)。

1.3 試驗方法

1.3.1 造模方法 參照 Schmeichel［1］的造模方法進行改進，整個造模觀察過程(30d)均以高脂飼料(脂肪32%，蛋白質13%，碳水化合物55%)喂養，禁食12h后按照 1%濃度鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)50mg/kg腹腔注射，72h后使用快速血糖儀測尾尖血糖，＞16.7mmol/L即視為造模成功［2］。在第15天、第30天重復測量血糖，并剔除血糖小于16.7mmol/L及死亡大鼠。空白對照組給予普通飼料飼養。

1.3.2 指標檢測方法 所有大鼠于造模前1d剃去腹部(胸骨劍突正下方2cm×2cm區域)、背側(L1-L6節段左右兩側2cm×2cm區域)鼠毛暴露皮膚，應用MPA 9皮膚測量儀測量以上3處SCH、TEWL、EI、MI、L.a.b.(背部指標左右相加取均值)。按照儀器使用說明，SCH、TEWL、EI、MI、L.a.b.5個測量探頭依次接觸于待測大鼠皮膚并保持數秒，待機器自動記錄并發出測量成功提示音后方可離開，同時記錄系統軟件顯示的自校正數據。造模后第30天重復測量大鼠上述皮膚指標。以上實驗過程均在上午8∶00～12∶00進行，室溫23℃ ±1℃、濕度50%±60%無風室內進行。

1.4 統計方法

2 結果

表1顯示，造模前2組大鼠(模型組16只，空白組10只)各部分皮膚指標比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

表1 造模前模型組與空白對照組不同部位皮膚指標

表2 造模后模型組與空白對照組不同部位皮膚指標

表3 造模前后模型組不同部位皮膚指標

造模后60d剔除未成模大鼠及死亡大鼠(共3只)，空白對照組(10只)、模型組(13只)比較，模型組大鼠左右側背部及腹部皮膚造模后有一定程度的失水，與空白組比較差異有統計學意義(P＜0.05)，其中腹部差異有極顯著統計學意義(P＜0.01);模型組大鼠背部水分散失下降，而腹部水分散失增加;大鼠背部血紅素造模后較造模前下降，而腹部血紅素較造模前顯著升高(P＜0.05);大鼠背部黑色素造模后也較造模前降低，但腹部前后無明顯統計學意義(P＞0.05);大鼠背側皮膚與腹部皮膚L值則較造模前下降;大鼠背側皮膚a值較造模前降低，腹部皮膚則較造模前顯著升高(P＜0.01);大鼠背側皮膚與腹部皮膚b值則較造模前升高。

3 討論

“望色”是中醫“望診”的重要組成部分。中醫學認為，皮膚色澤是臟腑氣血之外榮，因而望色能了解臟腑功能狀態和氣血盛衰情況。《素問·脈要精微論》云:“夫精明五色者，氣之華也。”五行學說和藏象理論認為，五色(青、黃、赤、白、黑)配五臟，故五色變化能反映相應臟腑的精血盈虧，光澤的變化能反映精氣的盛衰。還根據病人面部五色變化進行病證的臟腑定位診斷。如《靈樞·五色》提到:“以五色命臟，青為肝，赤為心，白為肺，黃為脾，黑為腎”;還將這一方法應用于具體病證的鑒別診斷之中，如《素問·痿論》:“肺熱者色白而毛敗，心熱者色赤而絡脈溢，肝熱者色蒼而爪枯，脾熱者色黃而肉蠕動，腎熱者色黑而齒槁。”另外，《素問》中所提到的色之善惡也是對于病理面色較早的評價與辨別。如《素問·五臟生成》的“青如翠羽”、“赤如雞冠”、“黃如蟹腹”、“白如豚膏”、“黑如烏羽”之善色，和“青如草茲”、“赤如丕血”、“黃如枳實”、“白如枯骨”、“黑如炲”之惡色。

皮膚含水量(SCH)測定即皮膚角質層(SC)的含水量，水分散失(TEWL)是測量經皮膚表面水分的蒸發，它們同是反映皮膚完整性的重要參數，SCH和TEWL的測量被廣泛地應用于對皮膚屏障的描述［3～5］。皮膚的顏色主要取決于黑色素的含量和分布。對于皮膚顏色變化的判定，近年來國外普遍采用國際照明委員會(CIE，International Commission on Illumination)規定的色度系統(L.a.b.色度系統)，與皮膚黑色素和血紅素測量儀測量皮膚的色度變化［6］。血紅素和黑色素的測定基于光吸收的原理，通過檢測儀探頭中發出的強度恒定的、波長長度為568、660、880nm的光照射在皮膚表面后根據發射回來的光計算紅斑指數(EI)和黑素指數(MI)，分別代表皮膚中血紅素和黑色素的含量。很多研究證明，皮膚屏障功能下降(TEWL增加、SCH降低)是干燥性皮膚病和其他多種皮膚病的病因［7～10］。Kim DW［11］等人發現，紅斑、丘疹評分與TEWL明顯相關(P＜0.05)，而干燥、苔蘚樣變評分與SCH明顯相關(P＜0.05)。Sakai S等［12］對49名 T2DM 患者進行皮膚屏障功能測試，發現高空腹血糖(FPG)組小腿伸側和前臂屈側的SCH低于低FPG組，高糖化血紅蛋白(HbAlc)組前臂屈側的TEWL低于低HbAlc組，T2DM患者皮膚屏障功能的降低類似于老年性干燥性皮膚的變化。

實驗結果顯示，造模后60d模型組與空白對照組相比，背側和腹側的SCH減少，提示STZ大鼠皮膚加速老化。而TEWL在背側和腹側則體現出不同的趨向，顯示出不同部位皮膚保水屏障的紊亂。L值在背、腹側均較造模前低，提示造模成功后，STZ大鼠皮膚亮度顯著下降，失去皮膚原有光澤;而不同部位b值較造模前均升高顯示出皮膚變黃;a值背腹側體現出不同的變化，左右背側a值較造模前下降，提示皮膚紅色度降低，而腹部紅色度升高，這與EI所體現的相一致;MI背側與腹側也有差異，與對照組相比STZ大鼠黑色素值背側降低，而腹側組間差異沒有統計學意義(P＞0.05)，提示STZ大鼠背部皮膚變白，而腹部皮膚變化不明顯。STZ造模后引起的血糖變化，可能是是改變皮膚正常生理特點和外觀的重要因素。STZ大鼠皮膚呈現出干燥、晦暗以及皮色改變。“望而知之謂之神”，望診是中國傳統醫學診法的重要組成部分，而這種主觀診斷有望形成客觀精確的量化指標，無創性檢測指標也有可能成為望診的輔助檢查手段。

4 結論

色診作為中醫傳統望診法的一部分可以運用現代測量儀器進行量化研究;STZ介導的T2DM大鼠出現皮膚屏障的紊亂和色澤的改變，這種改變可以通過無創性檢測進行量化分析，指標群的改變可能對疾病的無創監測具有臨床診斷意義。無創性皮膚指標檢驗可能成為望診的輔助檢查手段。

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