量子共振檢測儀檢測抗乙型肝炎病毒藥物效價初探

安林勇 陳曉磊 張國鋒 栗瑛潔 陳靜

量子理論是二十世紀最偉大的科技突破之一，近幾年來，基于量子醫學的量子共振檢測儀（QRS）已廣泛應用于臨床輔助診斷和研究，藥物效價檢測是其最具有代表性的功能之一。QRS應用于中藥及抗生素效價的臨床研究已有報道[1-2]，但其應用于抗病毒藥物效價檢測還未見報道。筆者開展了用QRS檢測抗乙型肝炎病毒（HBV）藥物效價的初步研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年6月-2012年6月筆者所在醫院接受抗病毒治療的乙型肝炎肝患者52例，男36例，女16例；年齡18～65歲。將其按服用藥物不同分為四組，其中9例單服用拉米夫定（LAM），21例單服用阿德福韋酯（ADV），18例同時服用LAM和ADV，4例單獨服用恩替卡韋（ETV），口服藥物周期均大于96周。四組中HBV DNA>500 copies/ml病例分別為5例，5例，4例，0例；HBV DNA<500 copies/ml病例分別為4例，16例，14例，4例。健康對照組10例，男5例，女5例；年齡18～51歲（排除甲、乙、丙、丁、戊型肝炎，及HIV感染）。

1.2 儀器試劑及藥品 藥物效價檢測用重慶同康量子信息檢測儀，檢測范圍+1～+22，有效藥物效價范圍≥+8（由儀器說明書提供），檢測數值越大說明藥效越高。HBV DNA檢測用美國LightCyle熒光定量PCR檢測儀，試劑由上海科華生物有限公司提供，檢測范圍500～108 copies/mL，陰性參考值為<500 copies/mL；LAM（葛蘭素史克有限公司）每片劑量100 mg，ADV（葛蘭素史克有限公司）每片劑量10 mg，ETV（中美上海施貴寶制藥有限公司）每片劑量0.5 mg。

1.3 方法 受檢者手握金屬傳感器，將抗病毒藥物LAM，ADV，LAM+ADV，ETV，其中一片（LAM+ADV，各加一片）放在檢測盤上，選擇N060“乙肝病毒”代碼測正值，測量結果為該抗病毒藥物效價值。

1.4 統計學處理 采用SPSS 15.0統計學軟件對數據進行處理，計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

38例HBV DNA陰性乙肝患者的量子藥物效價檢測值分別與對照組比較差異具有統計學意義（P<0.01）；14例HBV DNA陽性乙肝患者的量子藥物效價檢測值，與對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）。未發現恩替卡韋耐藥病例，且量子效價檢測值最高（11.00±1.83），進而說明了恩替卡韋具有更高的耐藥基因屏障。詳見表1。

表1 52例乙肝患者量子藥物效價檢測值（±s）

表1 52例乙肝患者量子藥物效價檢測值（±s）

*與對照組比較P<0.01；**與對照組比較P>0.05

組別 LAM ADV LAM+ADV ETV對照組（n=10） 5.50±1.08 5.60±1.34 6.00 ±1.05 6.10 ±1.10 HBV DNA 陰性組（n=38） 8.75±1.01* 9.44±0.89* 9.71±1.20* 11.00±1.83*HBV DNA陽性組（n=14） 5.80±0.84** 6.00±0.71** 6.25±0.96** -

3 討論

1958年，德國的Voll醫生發明了最初形態的QRS（EAV）用于臨床診斷和治療，取得了很好的效果，之后在儀器中加入了藥物效價檢測功能。筆者根據現有的研究文獻，推斷藥物敏感試驗可以利用電磁波檢測其共鳴程度原理，從而作出判斷。至今，藥物效價檢測成為這類儀器最具有代表性的功能。本研究表明，HBV DNA陽性組與對照組比較量子效價值無明顯差別，而HBV DNA陰性組量子效價值明顯增高，與HBV DNA檢測具有一致性且呈反相關。本研究中，未發現恩替卡韋耐藥病例，且量子效價檢測值最高，進而說明了恩替卡韋具有更高的耐藥基因屏障，與相關報道相一致[3]。

HBV在肝細胞內復制繁殖，致敏T淋巴細胞在殺傷靶細胞的同時造成肝細胞損傷，因此，選擇合理的治療方案和有效的抗病毒藥物是防止病情加劇的基本條件。目前在我國獲得批準并應用臨床的口服抗乙肝病毒藥物主要有核苷（酸）類似物，由于這些藥物不能清除病毒，只能抑制其復制，因此要長期服用。服用過程中，病毒可能出現基因變異，導致耐藥[4]。拉米夫定是一種L型核苷類藥物，是第一個批準用于乙肝治療的口服藥。目前認為，HBV對拉米夫定耐藥性的產生與HBV P基因變異有關，并且HBV P基因變異是多位點的，以C區酪氨酸-蛋氨酸-天門冬氨酸-天門冬氨酸（YMDD）基序的變異最為重要。YMDD位于C區第549-552aa（即Y549M550D551D552），YMDD中蛋氨酸（M）被纈氨酸（V）或異亮氨酸（I）替代，變成YVDD或YIDD，新的命名法為rtM204V/I（C區）±rtL180M（B區），這兩種變異均導致拉米夫定與HBV DNA聚合酶的親和力下降或消失，HBV對其敏感性均降低超過1000倍。目前報道發現的與拉米夫定相關的主要耐藥突變有rtM204V、rtM204I和rtL180M[5]。阿德福韋酯是阿德福韋的親脂性口服前體，其腸道吸收率和生物利用度都較高，口服后在非特異性酯酶水解作用下迅速轉化為阿德福韋。阿德福韋是一種無環單磷酸脫氧腺苷類似物在體內進一步轉化為有活性的雙磷酸阿德福韋而起抗病毒作用[6]。阿德福韋酯耐藥變異位點主要存在于聚合酶逆轉錄結構域（RT區）的D區和B區。D區耐藥突變主要是rtN236T和rtI233V，可引起阿德福韋酯敏感性下降，單對拉米夫定仍然敏感；B區耐藥變異有rtA181T/V，對阿德福韋酯耐藥，且對拉米夫定敏感性也明顯下降[7]。阿德福韋酯是目前國內上市的口服抗HBV藥物中唯一一種核苷酸類似物，也是唯一一種與其他抗HBV藥物沒有交叉耐藥位點的藥物。拉米夫定與阿德福韋酯聯合治療可持續抑制病毒，起效迅速，長期耐藥率低，HBeAg血清轉換率高[8]。但單藥還是聯合孰優孰劣尚無定論，本研究可以對此有一定的參考價值。恩替卡韋為鳥嘌呤核苷酸類似物，能選擇抑制HBV DNA多聚酶的啟動，進而抑制前基因組mRNA逆轉錄負鏈及正鏈的合成，具有很強的抗病毒作用，耐藥率極低[9]。本研究中未發現恩替卡韋耐藥病例。

用QRS檢測抗HBV藥物效價，不僅能避免體內藥敏實驗，還能根據量子藥物效價值的高低合理篩選藥物，這樣即避免了無效藥物的毒副作用，又不會耽誤疾病治療的最佳時機[10]。本研究還具有以下特點：（1）能動態監測抗HBV藥物效價衰減程度，在藥物效價降至一定閾值時，密切觀察肝功能及HBV DNA檢測結果，提前做好換藥銜接，從而避免病情進一步惡化。（2）可以同時檢測兩種或兩種以上抗HBV藥物的效價，進而觀察它們的相互作用，便于聯合用藥治療。（3）QRS可以用于HBV的體外藥敏試驗，但它反映的不是孤立的體外環境，而是體內復雜的整體環境。

綜上所述，應用QRS檢測抗HBV的藥物效價，具有一定的準確性、科學性和先進性，且操作簡單，成本低廉、無創傷，無交叉感染危險，適合各級醫療機構開展研究。本實驗結果也初步證明了這一推定，但由于標本量還不夠大，所以有待進一步的深入研究論證。相信隨著科技的進步，會帶動量子醫學不斷地向前發展，量子醫學在藥物敏感實驗研究領域中定會開辟出一條嶄新的途徑。

[1]王廣儀.量子共振檢測（QRS）應用研究[J].世界元素醫學，2007，14（4）：33-38.

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[4]任江波，王宇，李紅藝，等.阿德福韋酯治療替比夫定耐藥慢性乙型肝炎療效初探[J].首都醫科大學學報，2010，31（5）：566-569.

[5]王曉英，佘會元.拉米夫定抗乙型肝炎病毒治療的耐藥問題[J].肝臟，2012，17（4）：284-286.

[6]熊曉佳，李剛.阿德福韋酯抗乙型肝炎病毒的耐藥研究進展[J].國際內科學雜志，2008，35（6）：353-355.

[7]代潔，唐紅.阿德福韋酯耐藥分子機制研究[J].生物醫學工程學雜志，2012，29（1）：184-187.

[8]卜玉杰，曾艷麗，李一，等.拉米夫定與阿德福韋酯聯合治療慢性乙型肝炎的臨床療效[J].肝臟，2012，17（3）：183-184.

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[10]安林勇，陳曉磊.量子共振檢測儀原理及臨床研究概述[J].現代中西醫結合雜志，2012，21（4）：451-453.