四跨膜蛋白CD151在子宮頸癌中的表達及意義*

張靜艷 孫玉榮

CD151是四次跨膜蛋白家族的重要成員，其具有四次跨膜蛋白的一般特征，參與調控細胞信號轉導、細胞增殖及移行等過程。研究證實， CD151在多種腫瘤中存在過表達，參與了腫瘤的遷移、侵襲，并與腫瘤的預后呈正相關[1]。CD151有可能成為腫瘤治療的新靶點。本研究采用S-P免疫組化方法檢測子宮頸癌組織中的CD151的表達，并結合臨床病理資料進行分析，以探討其與子宮頸癌分化程度、臨床分期及淋巴結轉移的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 100例標本取自齊齊哈爾醫學院第一附屬醫院腫瘤外科2008-2011年間行根治性切除子宮頸癌患者，且術后經病理學證實診斷。按UICC標準分級及TNM分期。所有患者術前均未接受放、化療。同時選取同一手術切除標本遠端的正常宮頸黏膜組織24例作為對照。標本均在手術切除后15 min內采集。

1.2 實驗試劑 鼠抗人CD151單克隆抗體，由美國ABCAM公司生產，免疫組織化學SP試劑盒和 DAB 顯色試劑盒由上海長島生物技術公司生產。

1.3 實驗方法

1.3.1 切片制作 新鮮標本于10%中性甲醛溶液固定并過夜，常規乙醇梯度脫水后，二甲苯透明及石蠟包埋，以 5 μm厚度切片，制成玻片。

1.3.2 免疫組化學染色 免疫組化主要染色步驟：（1）切片二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化；（2）3%雙氧水甲醇滅活內源性過氧化物酶；（3）枸櫞酸緩沖液進行抗原修復；（4）滴加一抗、二抗和三抗并進行DAB顯色；（5）蘇木素復染；（6）常規脫水、透明、封片。使用PBS代替一抗進行陰性對照。

1.3.3 染色結果判斷 以細胞膜和細胞質見棕褐色顆粒為CD151表達陽性細胞。每例切片選5個高倍視野，按陽性細胞總數占同類計數細胞總數的百分比，將染色結果分為陰性與陽性，陽性細胞總面積<50%為陰性、≥50%為陽性[2]。

1.4 統計學處理 應用SPSS 13.0軟件進行統計學處理，正態性檢驗用Kolmogorov-Smirnov法，方差齊性檢驗用Levene法。參數檢驗用單因素方差分析，組間兩兩比較運用SNK檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組化檢測子宮頸癌中CD151蛋白表達 CD151蛋白的陽性信號主要表達于細胞膜，呈棕黃色或棕褐色顆粒樣表現。（圖1）。24例正常組織中，CD151陽性表達3例，陽性率為12.5%（3/24）。100例子宮頸癌患者中，CD151陽性表達為63例，陽性率為63%。腫瘤組織中CD151陽性表達率明顯高于正常宮頸組織（P<0.01）。

圖1 CD151在宮頸組織中的表達（DAB，×400）

2.2 CD151蛋白在子宮頸癌中表達與臨床病理特征的關系 CD151蛋白表達與子宮頸癌患者年齡無關（P>0.05），而與腫瘤TNM分期、分化程度、淋巴結轉移有關（P<0.05）。見表1。

表1 CD151蛋白表達與子宮頸癌患者臨床病理特征間關系 例（%）

低級別和高級別子宮頸癌中CD151蛋白表達陽性率分別為31.3%、65.0%（P<0.01）。早期及中晚期子宮頸癌CD151蛋白表達陽性率分別為45.5%和76.8%（P=0.005）。淋巴結轉移組及未發生淋巴結轉移組CD151蛋白表達陽性率分別為76.6%和39.0%，比較差異有統計學意義（P<0.01）。

3 討論

子宮頸癌是婦女發病率最高的惡性腫瘤，在所有惡性腫瘤中所占比例為35%～72%，但由于部分患者發現較晚，失去治療機會[3]。

四跨膜蛋白超家族（ transmenbrane 4 super family，TM4SF）可以與自身或其他細胞表面的整合素、生長因子受體結合形成四跨膜網絡，并對后者的生物學功能產生重要影響[4]，在細胞的增殖、融合，腫瘤生長、遷移及血管生成中起重要作用[5-6]。四跨膜蛋白超家族已檢出30多個成員，例如CD9、CD82等絕大多數被認為是抑癌基因，其產物與腫瘤發展、預后呈負相關。而新近發現的CD151卻與腫瘤發生及預后呈正相關[7]，并且是該家族成員中唯一的癌基因[8]。

作為四跨膜蛋白家族的重要成員，CD151最早在血小板表面被發現。其不僅具有四跨膜蛋白的一般特征，如參與細胞黏附、增殖及血管生成，研究證實，CD151在多種腫瘤中存在過表達，并且參與腫瘤細胞的浸潤、侵襲與轉移[9]。鑒于CD151與腫瘤發展的正相關性，在腫瘤惡性進展中的重要作用，本實驗采用免疫組織化學法檢測CD151在子宮頸癌的表達，并探討其與腫瘤的分化、臨床分期及淋巴結轉移的關系。

本研究結果表明，CD151蛋白在子宮頸癌組織中的表達水平明顯高于正常組織，提示 CD151蛋白與子宮頸癌的發生呈正相關。研究結果表明，CD151在子宮頸癌組織中過表達與腫瘤的分化程度、TNM分期及淋巴結轉移等惡性表型明顯有關，進一步證實CD151的過表達參與子宮頸癌的浸潤及轉移。因此CD151的檢測可作為子宮頸癌的早期篩查、臨床診斷的指標。已有體內實驗證實抗CD151抗體可抑制腫瘤的侵襲與轉移[10]，CD151的檢測有望為子宮頸癌的預后評價提供一種新的分子生物學指標。

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