瓊玉口服液對衰老小鼠腦組織SOD活性及血清中SOD和MDA含量的影響

劉煥蘭,武夏林,曲衛玲,聞 哲

(廣州中醫藥大學基礎醫學院,廣東廣州510006)

衰老是生命發展過程中的必然規律,是一個全身性的、緩慢的、漸進的、十分復雜的退化過程。衰老雖不可避免,但延緩衰老卻是可能的。楊麗華等[1]認為氣虛及津液不足會對人體的臟腑功能、氣血運行和陰陽平衡產生一定影響,對衰老的發生發展有密切的關系。瓊玉膏是益氣養陰的古代經典名方,由于配伍組成獨特,決定了其在抗衰老及對老年性疾病的保健治療作用。本文擬以瓊玉膏組成為基礎制成瓊玉口服液,研究分析其對衰老小鼠腦組織SOD活性及血清中SOD、MDA含量的影響,以確定其是否有抗衰老作用,從而為臨床選用抗衰老藥物提供科學數據及參考。

1 實驗材料

1.1 動物 昆明種小鼠72只,雌雄各半,體質量18～22 g,由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供。

1.2 藥物與試劑 瓊玉口服液由廣州中醫藥大學養生教研室提供;六味地黃丸,北京同仁集團。D-半乳糖,由廣州科因公司提供;SOD(超氧化物歧化酶試劑盒)、MDA(丙二醛)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 儀器與設備 WFZ-UV2000紫外可見分光光度計,離心機,水浴鍋,移液槍,電子天平均由廣州中醫藥大學中藥藥理實驗室提供。

2 實驗方法

2.1 動物分組與造模 取昆明種小鼠72只,雌雄各半,體質量 18～22 g。共分6組:空白組、衰老模型組、陽性對照組及瓊玉口服液高、中、低劑量組,每組14只,其中除空白組外其余各組每天頸背部皮下注射5%D-半乳糖0.005 g/10 g體質量,連續造模6周,建立小鼠衰老模型,空白組注射等量的生理鹽水。從實驗第1天起模型組和空白組每天灌胃給予蒸餾水0.2 mL/10 g體質量,陽性對照組灌胃給予六味地黃丸0.15 g/10 g體質量,其余3組受試藥物組分別按高中低(0.1 mL/10 g體質量,0.05 mL/10 g體質量,0.025 mL/10 g體質量)3個劑量給予瓊玉口服液,各組均按0.2 mL/10 g體質量給藥,連續給藥6周。

2.2 樣本處理和指標測定 1)血樣:小鼠眼眶取血,3 500 r/min離心5 min,取上層血清,測血清中SOD、MDA含量,測定方法嚴格按照試劑盒所附方法步驟進行。2)大腦SOD測定:取大腦稱重,按1∶9(W/V)加入冰生理鹽水,低溫(4℃)勻漿,3 500 r/min離心取上清液,測定方法嚴格按照試劑盒所附方法步驟進行。

2.3 統計學方法 采用SPSS軟件16.0進行統計分析,各指標以均數±標準差(±s)表示,組間樣本均數比較采用方差分析和t檢驗。

3 結果

3.1 小鼠腦組織SOD活性的測定 見表1。統計處理表明,與空白對照組比較,模型對照組小鼠腦組織SOD活性明顯降低(P<0.01);與模型對照組相比較,瓊玉口服液低劑量組小鼠腦組織SOD活性變化不明顯,瓊玉口服液高劑量組、陽性對照組含量增加(P<0.05),瓊玉口服液中劑量組小鼠腦組織SOD活性顯著增加(P<0.01)。

表1 瓊玉口服液對腦組織SOD活性(±s)

表1 瓊玉口服液對腦組織SOD活性(±s)

注:與空白對照組比較,##P<0.01;與模型對照組比較,#P<0.05,##P<0.01。

組別 n 腦SOD活性(u/mL)空白對照組 12 67.85±9.70##模型對照組 12 51.75±4.27##低劑量組 12 54.25±2.12中劑量組 12 60.17±4.03##高劑量組 12 59.64±8.39#陽性對照組 12 60.01±9.09#

3.2 對衰老小鼠血清SOD、MDA含量的影響 見表2。從表2中可以看出,空白組和模型組比較各指標均有顯著性差異(P<0.01),有統計學意義。瓊玉口服液中、高劑量組跟模型組比較,前兩組血清中SOD的含量明顯大于模型組,有顯著性差異(P<0.01或者P<0.05),MDA的含量明顯小于模型組,有顯著性差異(P<0.01或者 P<0.05),均有統計學意義。瓊玉口服液低劑量組跟模型組比較除了血清中SOD的含量明顯增加有顯著性差異(P<0.05)外,其它指標無統計學意義;與陽性組和模型組比較,各項指標均無統計學意義。

表2 小鼠血清SOD、MDA含量的影響(±s)

表2 小鼠血清SOD、MDA含量的影響(±s)

注:與模型對照組比較,#P<0.05,##P<0.01;與空白對照組比較,##P<0.01。

組別 n 血清SOD活力/(u/mL)血清MDA活力/(nmol/mL模型組 12 12.02±1.21## 36.944±12.760##空白組 12 13.60±0.52## 23.419±7.493##瓊低組 12 13.27±0.93# 29.701±7.284瓊中組 12 13.75±0.66## 24.461±10.169#瓊高組 12 13.17±1.80# 25.889±7.033#陽性組 12 13.05±1.37 29.893±9.240)

4 討論

衰老是指生物體在正常環境條件下發生的機能減退,逐漸趨向死亡的現象,是機體在成年以后隨著年齡的增長而逐漸產生的一系列生理功能和形態結構方面的變化。眾所周知,由于衰老原因紛繁復雜,但眾多的學說之中,最為中外學者所認同的是自由基學說。正常情況下,體內存在的氧化防御系統包括SOD等,對抗氧化應激反應,清除機體內產生的自由基,從而起到抗衰老的作用[2]。因此,在研究中藥抗衰老的實驗中,測定自由基的代謝水平有重大意義。瓊玉膏又名“神仙瓊玉膏”,是益氣養陰的古代經典名方,按宋·洪遵《洪氏集驗方》卷一引申鐵翁方,由生地黃、茯苓、人參、蜂蜜組成。從古代醫籍對瓊玉膏的相關記載及現代研究來看,此方是集治療、保健于一身的古代良方,在延緩衰老方面有重要作用。

4.1 瓊玉口服液抗氧化作用評價 SOD是體內一種清除氧自由基的酶,對機體的氧化與抗氧化平衡起著重要作用,是機體抗自由基損傷的重要防御機制[3];SOD通過催化超氧陰離子歧化為H2O2和O2,從而達到清除自由基,抗衰老的作用[4],其活性隨著年齡增長而減弱,是評價衰老的重要指標之一。

從實驗結果看出,瓊玉口服液能抑制衰老小鼠血清SOD及腦組織中SOD的活性,從而提高機體抗氧化物質的活性起到抗衰老作用。與模型組相比,中劑量效果顯著,并優于陽性對照組。在與中、高劑量對比中,中劑量的數據在趨勢上呈現出明顯優勢,因中劑量小鼠血清中SOD的含量在6個組中最高,和模型組比較含量增加顯著(P<0.01),故可以初步判斷中劑量效果最佳。

4.2 瓊玉口服液清除代謝產物能力評價 MDA是體內脂褐素形成的中間產物,隨著年齡的增長而升高,它能間接反映機體內的脂質過氧化水平[5],反映機體內自由基的產生情況和機體組織細胞的脂質過氧化程度。在老年色素類生物垃圾以及與衰老相關的蓄積產物的形成過程中起著核心作用。研究表明,在患病及衰老的動物和人體內,脂質過氧化物質(其中約85%為丙二醛)明顯升高[6]。因此,一般認為,MDA可以作為評價衰老的指標之一[7]。

本實驗中進行該指標測定,能反映出給藥后是否有改善機體抗脂質過氧化能力及減少小鼠體內自由基的生成,從而證明其抗衰老作用。瓊玉口服液對血清MDA的影響表明,瓊玉口服液中、高劑量可以減少機體自由基的生成,從而減少自由基對身體的傷害,達到延緩衰老的目的。同時,血清MDA含量在中劑量組均出現了最低趨勢,進一步證明了中劑量在各組中的優勢。

綜上所述,瓊玉口服液在增加小鼠體內抗氧化物質含量、減少小鼠體內自由基生成方面有一定作用,能夠起到延緩衰老的功效。然而中藥成分復雜多樣,復方更是如此,對人體疾病的調節是多種成分綜合作用的結果,其作用機制還需進一步深入研究。

[1]楊麗華,馬春.中醫機理衰老探析[J].吉林中醫藥,2008,28(12):862.

[2]王愛梅,周建輝,歐陽靜萍.黃精對D-半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用研究[J].長春中醫藥大學學報,2008,24(2):137-138.

[3]陳鴻鵬,譚曉風.超歧化物氧化酶(SOD)研究綜述[J].經濟林研究,2007,25(1):59-65.

[4]Schuessel K,Bayer T A,Czech C,et al.Impaired Cu/Zn-SOD activity contributes to increased oxidative damage in APP transgenic mice[J].Neurobiology of Disease,2005,18(1):89-99.

[5]Del Rio.D,Stewart A.J,Pellegrini N.A review of recent studies on malondia1dehyde as toxic molecule and biological marker of oxidative stress[J].Nutr MetabCardiovasc Dis,2005,15(4):316-328.

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[7]Junqueira.V,Barros.S.Aging and oxidative stress[J].Molecular Aspects of Medicine,2004,25(1-2):5-16.