SD大鼠寒積里實證模型的建立與評價

李 嬛，吳 麗，李 杰，郭 輝，劉 曉，蔡 皓，蔡寶昌

(1.南京中醫藥大學藥學院，江蘇南京 210046;2.南京中醫藥大學國家教育部中藥炮制規范化及標準化工程研究中心，江蘇 南京 210029;3.南京海昌中藥集團，江蘇南京 210061;4.武漢名老中醫會診中心 湖北武漢 430000

寒積里實證史載于《金匱要略·腹滿寒疝宿食病脈證治第十》篇，原文云:“脅下偏痛，發熱，其脈緊弦，此寒也，以溫藥下之，宜大黃附子湯。”臨床表現為脅下偏痛，發熱，手足厥冷，脈緊弦。蓋陰寒積聚，橫陳一處，雖見發熱，亦是陽氣被郁，難以輸布。此則非溫陽不能散其寒，非瀉下不能去其積也。故仲師擬大黃附子湯以附子、細辛之辛溫大熱善走者溫散之，而后用大黃得以通泄其積滯也，使得邪氣終有出路。目前沒有寒積里實證模型的報道，因此筆者對該模型的研究報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物 SD大鼠，體重(220+20 g)，♀♂各半，由南京醫科大學實驗動物研究中心提供，合格證號:SCXK(蘇 )2008－0004。

1.2 試劑 高嶺土，江西景德鎮雅致江南廠家;胃動素(MTL)，生產批號:YS02032B;P物質 (SP)，生產批號:YS01985B;血管活性腸肽(VIP)，生產批號:YS01986B;環腺苷酸 (cAMP)，生產批號:YS02090B、環鳥苷酸 (cGMP)，生產批號:YS01568B，購自上海雅吉生物公司。

1.3 藥物 大黃來自蓼科植物掌葉大黃(RADIX ET RHIZOMA RHEI)的根和根莖 (生產批號:001004495);附子來自毛茛科植物烏頭(RADIX ACONITI LATERALIS PREPAR ATA)的子根加工品(生產批號:101232825)，細辛來自馬兜鈴科細辛(HERBA ASARI)的根 (生產批號:101002533)，均購自北京同仁堂公司。經南京中醫藥大學蔡皓老師鑒定，符合《中華人名共和國藥典》(2010年版)項下標準。稱取大黃－附子－細辛 (3∶4∶1)藥材共24 g，加入10倍量體積水煮30分鐘，紗布過濾得濾液。1.4 儀器 酶標儀:芬蘭(Labsystems Multiskan MS)352型，洗板機:芬蘭 (Thermo Labsystems)AC8，離心機:微量高速離心機TG16W，培養箱:隔水式恒溫培養箱GNP-9080型，紅外測溫儀:Fluke 566。

2 方法

2.1 SD大鼠寒積里實證模型的造摸方法 大鼠每天上午9:00時灌胃給予2℃冰水2 ml·100 g－1，6 h后，每鼠按2.5 ml·100 g－1體重灌胃給予 2 g·ml－1的高嶺土混懸液，空白組每天同一時間灌胃相應體積蒸餾水，連續7 d。

2.2 SD大鼠寒積里實證模型的尾部溫度測定和排便實驗實驗用大鼠共60只，取SD大鼠20只，按體重隨機分為2組，每組10只，即空白對照組、模型組。模型組動物如2.1方法造模，末次灌胃后，用紅外測溫儀快速測定各組大鼠尾部溫度后，給予活性炭水，隨后立即把大鼠逐只置于代謝籠內進行觀察，動物禁食不禁水，記錄大鼠首粒排黑糞時間和6 h內排黑糞粒數。結果見Tab 1，2。

Tab 1Effect on excretion of rats(±s，n=10)

Tab 1Effect on excretion of rats(±s，n=10)

＊＊P＜0.01 vs control group

Group Time of stool excretion/min Number of stool excretion/granules Control 22.94 ±8.52 12.9 ±3.0 Model 165.44 ±74.63＊＊ 4.92 ±2.6＊＊Therapeutic 43.92 ±18.26 16.0 ±3.2

2.3 SD大鼠寒積里實證模型的客觀生物指標測定實驗另取SD大鼠20只，分組同2.2項下方法，末次灌胃1 h后，眼眶取血 2 ml，12 000 r·min－1，離心 1 min 取血清，按試劑盒說明書操作測定胃動素 (MTL)、P物質 (SP)、血管活性腸肽(VIP)，環腺苷酸 (cAMP)，環鳥苷酸 (cGMP)含量。結果見Tab 3。

2.4 SD大鼠寒積里實證模型的反證治療 另取SD大鼠20只，隨機分為2組，每組10只。按照2.1項下方法造摸，末次灌胃6 h后給予大黃附子湯(2.5 g· kg－1)，一組大鼠按2.2項下方法進行尾部溫度測定和排便實驗，一組大鼠按2.3項下進行客觀生物指標測定實驗。結果見Tab 1，2，3。實驗數據均用SPSS 16.0統計軟件進行分析，計量數據均采用±s表示。

Tab 2Effect on temperature of rats tail(±s，n=10)

Tab 2Effect on temperature of rats tail(±s，n=10)

＊＊P＜0.01 vs control group

Group Temperature of rats tail/℃Control 17.15 ±1.13 Model 15.67 ±0.45＊＊Therapeutic 16.8 ±0.62

Tab 3 Influence on gastrointestinal hormones and neurotransmitters in rats( ± s，n=10)

Tab 3 Influence on gastrointestinal hormones and neurotransmitters in rats( ± s，n=10)

*P＜0.05 vs control group

Groups MTL VIP SP cAMP/cGMP Control 366.65±88.49 109.95 ±31.28 189.12±37.20 0.14 ±0.11 Model 283.50±75.69* 101.45 ±16.41 121.30±62.48* 0.09 ±0.07 Therapeutic 284.61±145.94 119.96 ±50.07 156.24±37.53 0.15 ±0.03

3 實驗結果與討論

3.1 模型一般生物學特征 模型組動物普遍于3～4 d時出現排便粒數減少，大便干燥，攝食量減少，反應遲緩，抓取時掙扎無力，觸之覺披毛松弛。

3.2 SD大鼠寒積里實證模型的尾部溫度測定和排便實驗由Tab1，2可以看出，造模后，與空白對照組比較:模型組首粒排便時間明顯延遲，6 h內排便粒數明顯減少;尾部溫度明顯下降。

3.3 SD大鼠寒積里實證模型的客觀生物指標測定實驗由Tab 3可以看出，與空白對照組比較:模型組動物胃動素，P物質含量明顯降低，血管活性腸肽含量和cAMP/cGMP有降低趨勢。

3.4 SD大鼠寒積里實證模型的反證治療 由Tab1～3可以看出，大黃附子湯使得寒積里實證模型大鼠的首粒排便時間提前，排便粒數增加，尾部溫度升高，使 P物質，血管活性腸肽含量，cAMP/cGMP趨于正常，但是對胃動素的影響不大。

4 對SD大鼠寒積里實證模型的評價

4.1 對造模因素的評價 證候造模因素有兩類，一類相同于臨床病因，一類是能導致證候病理的非自然因素。本實驗選擇采用李杰醫生提供的理論，選擇相同于臨床病因的因素進行造模。寒積里實證在《金匱要略》中的描述為:脅下偏痛，發熱，脈緊弦，寒積之因乃是寒邪直中太陰陽明所致，首先通過灌胃給予大鼠一定體積的冰水造成中寒邪直中臟腑，陽氣溫運不開，寒凝形成實證。里實可以指代腸的狀態，里實即便秘。而古人在饑餓狀態下會食用高嶺土充饑，繼而引發便秘。因此我們選擇灌胃給予大鼠高嶺土來復制里實的模型。該模型復制的注意點是首先模擬形成寒實證，繼而可形成里實證。

4.2 對癥狀診斷的評價 鑒于動物模型是在動物體上模擬與人類疾病相似的臨床征候，因此動物模型的診斷依據必須與臨床病征候的診斷依據相一致。本實驗選用觀察模型動物的一般狀態、排便量、首粒排便時間、尾部溫度作為寒積里實證動物模型的診斷標準。其中大鼠尾部溫度能夠靈敏的反應寒證信息［1］。結果表明動物的首粒排便時間延長，排便粒數降低，尾部溫度下降，可以判斷此模型為寒積里實證模型。

4.3 對客觀指標的評價 鑒于寒積里實與寒證及胃腸運動功能密切相關，故選擇與寒證和胃腸運動功能密切相關的客觀指標。cAMP/cGMP，胃腸激素(MTL，SP)和腸神經遞質(VIP)，來判斷寒積里實動物模型成功與否［2］。

4.4 對大黃附子湯反證治療的評價 在證候模型上，由于證狀觀察受一定限制，故治療反證重要性提高。選取治療寒積里實證的對應復方大黃附子湯作為反證治療的藥物，可以看出大黃附子湯使寒積里實證模型大鼠的首粒排便時間和排便粒數增加，尾部溫度升高。P物質和血管活性腸肽(VIP)含量升高，但對胃動素的影響不大。

4.5 對新建的SD大鼠寒積里實證模型的評價 遵循實驗動物模型設計相似性、重復性、標準化、實用性及經濟性等原則，本實驗采用冰水加高嶺土灌胃方法建立SD大鼠寒積里實模型，該模型在一定程度上模擬了中醫臨床寒積里實證的癥狀特點，模型的生物學特征、客觀指標的檢測經過多次重復實驗結果一致。該模型具有重復性好，復制簡單、實用、經濟等特點。

［1］袁永明，陳 曉，潘志強，等.寒證 熱證大鼠模型的紅外熱圖研究［J］.遼寧中醫雜志，2008，35(5):785－7.

［1］Yuan Y M，Chen X，Pan Z Q，et al.Study on the infrared thermographic of cold and heat rat model［J］.Liaoning J tradit Chin Med，2008，35(5):785－7.

［2］彭 成，王 嵐，趙小梅.SD大鼠陽虛便秘模型的建立及評價［J］.中國藥理學通報，2007，23(2):407－9.

［2］Peng C，Wang L，Zhao X M.Establishment and evaluation on SD rats model with yang-deficiency and constipation［J］.Chin Pharmacol Bull，2007，23(2):407－9.