E-cadherin在肺腺癌中的差異性表達(dá)

姜麗紅 孫 雪 王文革 范海濱 宋軍利

1.遼河油田總醫(yī)院病理科，遼寧盤錦 124010；2.遼河油田總醫(yī)院婦產(chǎn)科，遼寧盤錦 124010；3.遼河油田總醫(yī)院兒科，遼寧盤錦 124010；4.遼河油田總醫(yī)院康復(fù)科，盤錦遼寧 124010

上皮鈣粘素(E-cadherin)是一類介導(dǎo)上皮細(xì)胞相互黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白。 國內(nèi)外大量研究證實(shí)，惡性腫瘤局部浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與細(xì)胞間粘附力的降低有關(guān)， 其中E-cadherin 具有重要作用[1-3]。 但是目前對E-cadherin 的研究大多數(shù)仍局限于蛋白或轉(zhuǎn)錄的單一層面， 關(guān)于該基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和蛋白表達(dá)之間的關(guān)系尚罕有報導(dǎo)。 2010年2月—2012年9月，該科研小組對20 例肺腺癌進(jìn)行了相關(guān)研究， 力圖闡明E-cadherin mRNA 及其編碼蛋白在肺腺癌中是否存在差異性的問題，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

20 例肺腺癌病理資料來自遼河油田總醫(yī)院病理科。 其中女性8 例，男性12 例；年齡38～76 歲，平均65 歲。 對同一患者的新鮮肺腺癌組織和正常肺組織標(biāo)本分別提取mRNA 和蛋白質(zhì)，然后分別應(yīng)用RT-PCR 法和WESTERN-BLOT 法檢測E-cadherin mRNA 及其編碼蛋白表達(dá)情況。

1.2 RT-PCR 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件為

55 ℃30 min，99 ℃5 min，5 ℃5 min，具體操作按照TaKaRa RNA LA PCRTM Kit 試劑盒提供的說明書進(jìn)行；PCR 反應(yīng)條件：E-cadherin 引物序列：F 5'-GACGCGGACGATGATGTGAAC-3'，R 5'-TTGTACGTGGTGGGATTGAAG A-3'；96 ℃預(yù)變性5min，96 ℃1 min，56.3 ℃1 min，72 ℃1 min，共循環(huán)35 次，然后72 ℃延伸7 min[2]。 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物2%瓊脂糖凝膠電泳。

1.3 WESTERN-BLO T

按《分子克隆》實(shí)驗(yàn)操作指南進(jìn)行，一抗為鼠抗人E-cadherin 單克隆抗體、兔抗人β-actin 多克隆抗體；二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔／鼠IgG，應(yīng)用ECL 法標(biāo)記結(jié)合信號，通過熒光自顯影感光在Kodak XAY 膠片上。

2 結(jié)果

20 例新鮮肺腺癌組織與其自身正常對照肺組織分別提取RNA 和蛋白質(zhì)， 然后應(yīng)用RT-PCR 和WESTERN-BLOT 方法對E-cadherin 進(jìn)行了mRNA 及其編碼蛋白表達(dá)情況的檢測， 結(jié)果見圖1。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)：40%（8／20）肺腺癌組織中E-cadherin mRNA 呈陽性，而蛋白水平為陰性；10%（2／20）肺腺癌組織中E-cadherin 蛋白水平比mRNA 水平下調(diào)更為明顯。

圖1 E-cadherin mRNA 及其編碼蛋白在肺組織中的表達(dá)情況N-正常肺組織T-肺腺癌

3 討論

肺癌的發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的多因素參與的過程。 在這個過程中細(xì)胞粘附分子E-cadherin 起著重要作用。 研究表明，Ecadherin 含量多少與細(xì)胞間粘附功能異常、上皮性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

人的E-cadherin 基因CDH1[4]定位于16q22.1，編碼分子量為120 kD 的單鏈跨膜糖蛋白，主要定位于上皮細(xì)胞膜。 E-cadherin分子包括細(xì)胞外區(qū)、跨膜區(qū)和細(xì)胞內(nèi)區(qū)3 個區(qū)域。 其細(xì)胞外區(qū)通過結(jié)合鈣離子維持串聯(lián)結(jié)構(gòu)域的穩(wěn)定和促進(jìn)細(xì)胞黏附。此外，Ecadherin 的細(xì)胞內(nèi)區(qū)與caterin 形成E-cadherin-caterin 復(fù)合物，連接于肌動蛋白細(xì)胞骨架，從而形成和維持細(xì)胞間的穩(wěn)固連接。因此，E-cadherin 是維持上皮細(xì)胞間相互粘附的重要蛋白。

E-cadherin 的功能異常可以導(dǎo)致多種惡性改變，包括細(xì)胞形態(tài)改變、細(xì)胞間黏附力下降及細(xì)胞移動性增強(qiáng)。 因而，E-cadherin對腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移起著重要的抑制作用， 而且這已在許多研究中得到了證實(shí)[5]。

目前，關(guān)于E-cadherin 轉(zhuǎn)錄與翻譯之間關(guān)系的研究甚少。 為此，本實(shí)驗(yàn)選取肺腺癌作為研究對象，從檢測不同類型肺組織的E-cadherin mRNA 和蛋白水平入手。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在某些病例中Ecadherin 表達(dá)在mRNA 和蛋白水平存在著明顯差異性，即mRNA水平有表達(dá)， 而蛋白水平陰性或者mRNA 水平與蛋白水平明顯不一致。分析原因很可能是轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)機(jī)制發(fā)揮著重要作用。Ecadherin mRNA 水平與蛋白水平不一致是否與RNA 選擇性剪接或microRNA 有關(guān)，我們將在今后的研究中做深入探討。

[1] Shen WD, Ji Y, Liu PF, et al.Correlation of E-cadherin and CD44v6 expression with clinical pathology in esophageal carcinoma.Huang B [J].Wu S.Mol Med Report，2012，5(3):817-821.

[2] Cheng XX, Wang ZC, Chen XY,et al.Frequent loss of membranous Ecadherin in gastric cancers: A cross-talk with Wnt in determining the fate of beta-catenin[J].Clin Exp Metastasis，2005，22(1):85-93.

[3] Brzozowska A, Sodolski T, Duma D,et al.Evaluation of prognostic parameters of E-cadherin status in breast cancer treatment.[J].Ann Agric Environ Med，2012，19(3):541-546.

[4] Berx G, Staes K, van Hengel J.Cloning and characterization of the human invasion suppressor gene E-cadherin (CDH1)[J].Genomics，1995，26(2):281-289.

[5] 楊劍鋒，廖粵軍.E-cadherin／catenins 與腫瘤發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移[J].南華大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2002（4）：121.