CK19、CyclinD1、HBME-1、34βE12、TPO 、galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及意義

林茂華 毛瑛玉 李 婷 蘇 謙 鄭建瑞

我們通過檢測CK19、HBME-1、CyclinD1、34βE12、TPO、galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌及腺瘤中的表達，以探討其對甲狀腺乳頭狀癌的診斷及鑒別診斷的價值。

1 材料與方法

1.1 材料

2012年8月至2013年1月福建醫科大學附屬寧德市閩東醫院收治的經病理檢查確診的86 例甲狀腺乳頭狀癌和60 例甲狀腺濾泡性腺瘤。86例PTC年齡15～64歲，平均年齡27歲，女性65例，男性21例。60例FTA的年齡29～60歲，平均年齡44歲，女性48例，男性12例。分別進行HE染色和免疫組織化學染色。

1.2 免疫組化染色

標本均經常規10%中性緩沖福爾馬林液固定，石蠟包埋，4 μm厚連續切片。免疫組化采用EnVision兩步法。抗體購自福州邁新生物技術有限公司，所用抗體為即用型，實驗步驟按說明書進行，DAB顯色。選用腫瘤區域進行CK19、HBME-1、CyclinD1、galectin-3、34βE12、TPO等抗體染色，選用同例非腫瘤區域甲狀腺組織作為內對照。由兩位高職稱的病理醫師進行鏡檢觀察。陽性結果判斷標準：CK19、34βE12均以細胞質內出現棕黃色細顆粒為陽性染色，HBME-1以細胞胞膜著色為陽性，CyclinD1以細胞核著色為陽性，galectin-3、TPO以細胞核或細胞質著色為陽性。高倍鏡(×400)下隨機選取10個視野，每個視野計數100個細胞，取平均值作為陽性細胞百分數。陽性細胞數≤10%為陰性，11%～25%為(+)，26%～50%為(++)，>50%為(+++)。

1.3 統計學分析

應用SPSSS12.0軟件包處理，采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 病理改變

甲狀腺乳頭狀癌光鏡下：腫瘤細胞呈細長、多分枝形態，被覆乳頭的濾泡上皮細胞肥大，核異型，具有核溝、核內假包涵體，核重疊、極向紊亂，部分乳頭狀癌有毛玻璃狀核，間質中偶可見砂粒體。濾泡性腺瘤60例中58例為常見的亞型，可見纖維性包膜，包膜外甲狀腺受壓萎縮，部分繼發出血、小囊形成、纖維組織增生及鈣化等，瘤細胞較一致，細胞無異型；另有2例為非典型腺瘤，瘤細胞呈立方、多邊形或不規則形，濾泡中出現非典型性巨細胞，瘤細胞排列呈片狀、巢狀或束狀，缺少完整的濾泡，包膜完整，經過多處取材，均未見包膜或血管侵犯。

2.2 免疫組化結果

從表1及表2中可看出，86例PTC中80例(93.02%)CK19表達++～+++，60例FTA中48例(80.00%)表達++～+++，兩者比較,χ2=2.78(P>0.05)。86例PTC中80例(93.02%)CyclinD1表達++～+++；60例FTA中8例(13.33%)表達++～+++，其中1例為非典型腺瘤，χ2=46.87(P<0.01)。86例PTC中80例(93.02%)HBME-1表達++～+++。60例FTA中4例(6.66%)表達++～+++，包括1例非典型腺瘤，χ2=53.94(P<0.01)。86例PTC中78例(90.69%)34βE12表達++～+++；60例FTA中2例(3.33%)表達++～+++，χ2=54.45(P<0.01)。86例PTC中2例(2.33%)TPO 表達++～+++；60例FTA中54例(90.00%)表達++～+++，χ2=57.45(P<0.01)。86例PTC中20例(23.25%)galectin-3 表達++～+++;60例腺瘤中6例(10.00%)表達++～+++，χ2=2.12(P>0.05)。

表1 CK19、HBME-1、CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌及腺瘤組織中的表達情況/例

表2 galectin-3、34βE12、TPO在甲狀腺乳頭狀癌及腺瘤組織中的表達情況/例

3 討論

CK19主要定位于細胞質，是中間絲蛋白家族。主要表達與單層上皮細胞，也散在表達于復層鱗狀上皮的基底層細胞。國內外許多學者在多種癌中檢測到CK19表達，包括乳腺癌、甲狀腺乳頭狀癌、大腸癌、膀胱癌、肺鱗狀細胞癌等。有文獻[1]提出CK19在良性甲狀腺病灶中呈灶性表達，而在甲狀腺乳頭狀癌中高表達，提示CK19可能參與甲狀腺乳頭狀癌的發生發展過程。本研究顯示CK19在甲狀腺乳頭狀癌中強陽性表達率93.02%，在腺瘤中強陽性表達率為80.00%，兩者無明顯差異，對甲狀腺腺瘤與乳頭狀癌的鑒別診斷無幫助。

細胞周期調節蛋白 CyclinD1，作用于G1期，參與G0/G1期的轉換調控，是細胞周期重要的正性調控因子。有報道顯示，CyclinD1在多種腫瘤中均有表達，如非小細胞肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、卵巢癌等，并且認為它與腫瘤的發生發展乃至預后都有密切關系。Khoo等[2]研究表明，CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中顯著過度表達，并與腫瘤轉移及預后有關。本研究顯示CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中強陽性表達率為93.02%，明顯高于甲狀腺腺瘤13.30%，表明CyclinD1表達與乳頭狀癌的發生發展相關。

HBME-1是間皮瘤相關抗體，主要成分為酸性氨基多聚糖蛋白，這種抗體在大多數上皮型間皮瘤中呈強陽性細胞膜表達。在肺癌、胰腺癌、乳腺癌也可表達。有學者認為HBME-1是甲狀腺乳頭狀癌較好的標記[3]，并可用于淋巴結中良性甲狀腺組織與轉移性乳頭狀癌的識別。Ito等研究報道HBME-1在PTC陽性表達率達100%[4]。本組研究顯示在濾泡性腺瘤中HBME-1強陽性表達率為3.33%，余均為弱陽性或陰性，而在乳頭狀癌中強陽性表達率為95.60%，故HBME-1是甲狀腺乳頭狀癌較好的標記，而且對良、惡性鑒別診斷亦有幫助。

34βE12與人角蛋白中間絲蛋白1、5、10和14反應，表達于鱗狀上皮、導管上皮和其他復層上皮，是前列腺基底細胞的特異性標記物，還可鑒別乳腺導管及小葉上皮來源的腫瘤。目前應用于甲狀腺乳頭狀癌的研究較少，趙麗華等[5]的研究示甲狀腺乳頭狀癌34βE12的陽性表達86.05%，顯著高于結節性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和橋本氏甲狀腺炎。本研究顯示34βE12在甲狀腺乳頭狀癌達90.69%，與CyclinD1及HBME-1結果相似，三者在甲狀腺乳頭狀癌中表達特異性較高，聯合應用效果更好。

TPO是甲狀腺激素合成通道中的重要物質，在T3、T4合成中起重要催化作用。在正常甲狀腺及甲狀腺良性病變中高表達，而在甲狀腺惡性腫瘤中低表達。鄧敏等[6]研究示TPO在PTC的鑒別診斷中敏感性89.7%，特異性99.8%，準確度達94%，在PTC與良性病變比較差異具有顯著性。陳云[7]在對甲狀腺結節性病變中甲狀腺過氧化物酶(TPO)mRNA表達的研究結果示良性病變組明顯高于惡性病變組(P<0.01)。本組結果顯示濾泡性腺瘤90%中等到強陽性，只有1例陰性；PTC強陽性僅2.33%。TPO在PTC與濾泡性腺瘤之間表達差異有顯著性。

Galectin-3是半乳糖凝集素家族中的一員，多數研究顯示galectin-3可作為甲狀腺惡性腫瘤的一個標記。galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中有強表達，而在部分良性病變中也可灶性表達。僅部分研究提示不同的意見，Bernet等[8]研究發現GL-3mRNA在PTC與濾泡狀甲狀腺腺瘤及正常甲狀腺組織中表達的差異統計學意義不大。本研究galectin-3在甲狀腺癌強陽性僅23.25%，在腺瘤的強陽性表達10.00%，我們認為galectin-3表達與PTC關系仍不十分清楚，對良惡性的鑒別無統計學差異。

本研究中2例非典型腺瘤，1例CyclinD1+++、HBME-1+++，是否提示有癌變的趨勢，有待探討。CK19在甲狀腺乳頭狀癌的表達率高但與腺瘤的表達無顯著差異。galectin-3表達與甲狀腺惡性腫瘤的的關系仍不明確。CyclinD1、HBME-1和34βE12表達具有較高的特異性，三者聯合應用對甲狀腺乳頭狀癌的診斷及鑒別診斷具有較高的實用價值。TPO表達與CyclinD1、HBME-1和34βE12呈負相關，4種指標聯合應用再結合臨床及形態學有助于提高甲狀腺腫瘤的確診率。

[1] 鞏 雷，陳 萍，劉憲軍，等.D2-40，CK19，galectin-3，VEGF和EGFR在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及其臨床意義〔J〕.中國普通外科雜志,2011,20(11):1203.

[2] Khoo ML,Ezzat S,Freeman JL,et al.CyclinD1 protein expression predicts metastatic behavior in thyroid papillary microcarcinomas but is not associated with gene amplifications〔J〕.J Clin Endocrinol Metab，2002,87(4):1810.

[3] Rossi ED,Raffaelli M,Mule A,et al.Simultaneous immunohistochemical expression of HBME-1 and galectin-3 differentiates papillary carcinomas from hyperfunctioning lesions of the thyoid〔J〕.Histopathology.2006,48(7):795.

[4] Ito Y,Yoshida H,Tomoda C,et al.HBME-1 expression in follicular tumor of the thyroid:an investigation of whether it can used as a marker to diagnose follicular carcinoma〔J〕.Anticancer Res,2005,25(1A):179.

[5] 趙麗華，林 競，石 柏，等.P53，Ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12，CK19在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床意義〔J〕.基礎醫學與臨床，2012，32(10):1202.

[6] 鄧 敏，葉顧萍，馬建中，等.甲狀腺乳頭狀癌中CK19、Galectin-3、HBME-1和TPO的表達及意義〔J〕.臨床與實驗病理學雜志，2011,27(8):843.

[7] 陳 云.甲狀腺結節中TPOmRNA表達與Ret、半乳糖苷凝集素3及黏蛋白1表達的相關性研究〔J〕.實用癌癥雜志，2008,23(5):469.

[8] Bernet VJ,Anderson J,Vaishnav Y,et al.Determination of galectin-3 messenger ribonucleic Acid overexpression in papillary thyroid cancer by quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction〔J〕.J Clin Endocrinol Metab,2002,87(10):4792.