人乳腺癌組織中GATA3 的表達及其臨床意義*

黃 信， 蔣光愉， 李 虹， 龐 釗， 呂榮釗， 張 清， 何偉麗， 王寧霞△

(暨南大學附屬第一醫院1乳腺外科，2病理科，廣東 廣州510632)

GATA3 作為轉錄因子調節多種細胞的遺傳分化方向。研究表明GATA3 與乳腺癌的發生發展密切相關，并在不同乳腺癌亞型中所起的作用也有所不同［1］，目前在國外已將其作為分析乳腺癌分子生物學特點及判定預后意義的研究熱點，但相關研究結果尚存在爭議，國內相關研究甚少。本研究采用免疫組化方法，檢測乳腺癌組織中GATA3 的表達，分析其與其它臨床病理指標及其預后的關系。

材 料 和 方 法

1 材料

收集暨南大學附屬第一醫院乳腺外科自2008年2 月至2012 年2 月經手術切除的乳腺癌石蠟組織標本124 例，所有標本均經病理HE 染色及常規相關免疫組化染色，由本院2 位以上高年資病理醫師確診，均具有完整的術后病理資料。其中乳腺浸潤性導管癌82 例，浸潤性小葉癌26 例，混合癌10 例，髓樣癌6 例。患者均為女性，年齡15 ～82 歲(平均年齡54 歲)。

2 主要儀器及試劑

GATA3 兔抗人多克隆抗體購自CST，檢測濃度為1∶250;即用型GTVisionTM免疫組化檢測試劑盒(鼠兔通用)購自廣州達科生物技術開發有限公司，二氨基聯苯胺(diaminobenzidine，DAB)購自福州邁新生物技術有限公司;切片機為Thermo HM325 旋轉式顯微鏡用薄片切片機。

3 免疫組織化學染色

所有乳腺癌組織石蠟標本經切片機連續行4 μm 厚切片，免疫組化染色采用EnVision 兩步法。石蠟切片常規經脫蠟后，將石蠟切片完全浸沒于0.01 mol/L pH 6.0 的枸櫞酸鹽緩沖液中，將其密閉放于微波爐中高溫加熱至沸騰后轉為低溫中持續加熱10 min，自然冷卻至室溫進行熱誘導抗原修復。切片經PBS 洗滌后滴加I 抗兔抗GATA3 多克隆抗體(1∶250)，4 ℃溫育過夜。滴加即用型酶標記的II 抗GTVisionTM，室溫濕盒中溫育30 min。DAB 顯色3 min，顯微鏡下觀察切面顯色情況以便及時阻斷，蘇木素襯染，常規梯度乙醇脫水，二甲苯透明后封片，光學顯微鏡下觀察實驗結果。陽性對照片為已知的陽性表達片，陰性對照片為PBS 液代替I 抗進行，每組每次實驗均設陰性對照片。

4 結果的判定

4.1 GATA3 染色陽性結果的判定標準 當乳腺癌細胞胞核中出現深棕色及棕黃色染色則為GATA3陽性表達細胞。每張切片隨機選擇5 個高倍(×100)視野，按陽性細胞數占同類細胞的百分比分類，陽性細胞數≥20%為GATA3 表達陽性切片，見圖1［2］。

Figure 1. GATA3 expression in breast cancer tissues detected by immunohistochemical staining.A:GATA3 negative expression (× 400);B:GATA3 positive expression(×100);C:GATA3 positive expression (×400).圖1 GATA3 在乳腺癌組織中表達的免疫組化染色

4.2 雌激素受體( estrogen receptor，ER) 、孕激素受體( progesterone receptor，PR) 和人表皮生長因子受體2( human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)染色結果判定標準 ER 陽性表達表現為細胞質中出現棕黃色染色，≥10%即為ER 表達陽性。PR 陽性表達表現為細胞質中出現棕黃色染色，≥10%即為PR 表達陽性。HER-2 陽性判定:2007 年，美國臨床病理學協會和臨床腫瘤學會推薦HER-2 陽性的定義標準是HER-2 免疫組化檢測+ + +(30%腫瘤細胞膜完全染色)或原位熒光免疫雜交檢測陽性(HER-2 基因拷貝數 ＞6 或HER-2/CEP17 ＞2.2)。交界性或不確定的HER-2 結果，Fish 評分為1.8 ～2.2 個基因/17 號染色體/細胞［3］。

4.3 乳腺癌術后復發風險評估標準［4-5］根據2009年St.Gallen 專家共識對乳腺癌術后復發風險分組。低危:淋巴結無轉移，且同時滿足以下6 個條件:標本病灶大小≤2 cm，分級為1 級，脈管無癌栓，ER 和(或)PR 陽性，HER-2 基因無過度表達或擴增，年齡≥35 歲。中危:(1)淋巴結陰性，同時以下6 個條件至少具備1 個:標本病灶大小＞2 cm，分級為2 ～3級，有脈管癌栓，ER 和(或)PR 陰性，HER-2 基因過度表達或擴增，年齡＜35 歲;(2)淋巴結1 ～3 個陽性，ER 和(或)PR 陽性且未見HER-2 基因過度表達。高危:(1)淋巴結1 ～3 個陽性，ER 和PR 陰性或HER-2 基因過度表達;(2)淋巴結≥4 個陽性。

5 統計學處理

采用SPSS 13.0 統計軟件陽性率的比較，采用χ2檢驗進行分析，相關性分析采用Spearman 等級相關。以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

結 果

1 乳腺癌組織中GATA3 的表達與ER/PR 及其它相關臨床病理指標間的關系

乳腺癌組織中ER 陽性組GATA3 的表達率為70.6%，而ER 陰性組GATA3 的表達率為25.6%，差異有統計學意義(P ＜0.01);在PR 陽性組中GATA3的表達率為69.7%，而PR 陰性組GATA3 的表達率為35.4%，差異有統計學意義(P ＜0.01);相關分析顯示GATA3 與ER/PR 呈顯著正相關。另外，GATA3 低表達者與高組織學分級、脈管癌栓、p53 突變等表示預后較差的指標相關(P ＜0.05)，但與HER-2表達、腫瘤大小、淋巴結轉移、年齡等因素無關(P ＞0.05)，見表1。

表1 乳腺癌組織中GATA3 表達與其它臨床病理指標的關系Table 1. The relationship between GATA3 expression in breast cancer tissues and other clinicopathological factors

2 乳腺癌組織中GATA3 表達與乳腺癌分子分型的關系

目前乳腺癌的分子分型是對乳腺癌患者進行個體化治療的基礎，在本實驗中將所有乳腺癌分成Luminal 型乳腺癌(luminal A 型和luminal B 型)和非luminal 型乳腺癌(三陰型和HER-2 過表達型)，其中luminal 型乳腺癌86 例(69.4%)，非luminal 型乳腺癌38 例(30.6%)，其中在luminal 型乳腺癌中GATA3 陽性表達58 例，表達率高達68.4%，而在非Luminal 型乳腺癌中的陽性表達12 例，表達率僅為32.6%，luminal 型乳腺癌與非luminal 型乳腺癌之間GATA 的表達有顯著差異(P ＜0.05)，見表2。這提示GATA3 高表達的乳腺癌對內分泌治療敏感，惡性程度低，有較好的預后。

表2 GATA3 表達與乳腺癌分子分型的關系Table 2. The relationship between GATA3 expression and molecular subtypes of breast cancer

3 乳腺癌組織中GATA3 表達與乳腺癌術后復發風險的關系

本實驗根據St.Gallen 共識將124 例乳腺癌進行術后復發風險評估，其中中危組77 例(62.1%)，高危組40 例(32.2%)，在中危組中GATA3 表達率為63.6%，而在高危組中GATA3 的表達率為42.5%，中危組與高危組患者GATA3 的表達有顯著差異(P ＜0.05)，見表3。這提示GATA3 高表達者術后具有較高的無病生存率(disease-free survival，DFS)及總生存率(overall survival，OS)。

表3 GATA3 表達與術后復發風險的關系Table 3. The relationship between GATA3 expression and recurrence risk after surgery

討 論

GATA3 是GATA 轉錄因子家族(GATA1 ～6)中的一員，它們以高親和力與(A/T)GATA(A/G)共同序列結合，共有一個類固醇激素受體超家族C4 鋅指結構的DNA 結合基序，定位于染色體10p 15上［6］。GATA3 作為轉錄因子在正常乳腺組織中具有調節生長和促進分化的作用。Asselin-Labat 等［7］發現將GATA3 導入多能祖細胞(干細胞)中會引導其向導管上皮細胞分化成熟，證實GATA3 是導管上皮細胞分化的關鍵調節因子。Kouros-Mehr 等［8］發現敲除GATA3 的小鼠青春期開始后因乳腺組織不能形成末端乳牙，導管上皮組織無法侵入基質而出現嚴重的乳腺發育缺陷。

Abba 等［9］證實，GATA3 表達與ER/PR 狀態密切相關，并與乳腺癌的組織學分級相關。本研究中GATA3 在ER/PR 陽性組及低組織學分級中均呈高表達，且較ER/PR 陰性及高組織學分級差異有統計學意義，與Abba 等的研究結果一致。目前臨床上應用常規病理免疫組化指標將乳腺癌大致分為luminal A 型和luminal B 型、HER-2 過表達型和三陰型乳腺癌。大量的臨床研究數據已證實在乳腺癌的分子分型中，luminal A 型和luminal B 型乳腺癌預后較好，而三陰型和HER-2 過表達型乳腺癌預后較差。本研究根據ER、PR 和HER-2 表達情況，將乳腺癌分為luminal 型乳腺癌(luminal A 型和luminal B 型)和非luminal 型乳腺癌(三陰型和HER-2 過表達型)，通過比較兩組間GATA3 的表達情況知，GATA3 在luminal 型乳腺癌中高表達，且差異有統計學意義。GATA3 與ER/PR 間的關系仍在探討中，Wilson 等［10］發現GATA3 是構成ER 信號通路所必需的，而luminal型乳腺癌高表達ER，說明GATA3 的表達可能與luminal 型乳腺癌發生有關。Pei 等［11］發現細胞周期素依賴性激酶抑制因子p18INK4c可以抑制通過抑制luminal 祖細胞增殖而抑制luminal 型乳腺癌的發生，而GATA3 能抑制p18INK4c的轉錄，減少INK4c 的產生，INK4c 低表達與GATA3 高表達往往同時存在于luminal 型乳腺癌中，但GATA3 的表達或過表達能否直接誘發luminal 型乳腺癌尚不明確［12］。

GATA3 在乳腺癌預后分析中的作用是當前研究的熱點之一，國外相關研究結果具有一些分歧。Jacquemier 等［13］發現，在240 例接受激素治療的ER 陽性乳腺癌患者中，多因素分析顯示GATA3、血管癌旁浸潤、Ki67、P53 的預后價值有統計學意義。Mehra等［14］發現，在預后很差的浸潤性癌中GATA3 為主要的低表達蛋白之一，GATA3 低表達的腫瘤較高表達的腫瘤生存期明顯縮短。但Ciocca 等［15］在一項為期10 年的隨訪研究中發現，GATA3 陽性和陰性的腫瘤之間復發率和生存率無顯著差異。而在ER 陽性并接受內分泌治療的患者中，GATA3 的表達具有中等強度的預后價值。在本研究中根據St.Gallen 共識將124 例乳腺癌分為低、中、高危組，中、高危組中GATA3 的表達差異具有統計學意義。

綜上所述，由于GATA3 與一些預后較好的指標相關，在luminal 型乳腺癌中高表達，且與ER/PR 陽性表達高度相關，對臨床內分泌治療具有指導價值，可以在一定程度上判定GATA3 陽性患者預后好于GATA3 陰性。但其是否可以作為獨立的乳腺癌術后預測因子，仍需要更多的臨床試驗數據來證實。

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