sFRP-2蛋白在宮頸鱗癌及癌前病變中的表達及意義

陳永尚

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一,2010年世界衛生組織報告：引起全球女性癌癥死亡的惡性腫瘤中,宮頸癌的死亡率跌出前五名,說明隨著對宮頸癌早期篩查越來越多的重視,越來越多的宮頸癌在早期被發現,總的死亡率有所下降,然而宮頸癌的發病率卻依舊呈上升以及低齡化的趨勢［1］。Wnt信號通路的異常激活在腫瘤的發生發展中起到重要作用,該信號通路的抑制性蛋白質分泌型Frizzled相關蛋白2(sFRP-2)通過直接結合Wnt從而改變Wnt與Wnt受體復合物結合的能力。本研究采用免疫組織化學SABC法檢測了sFRP-2蛋白在宮頸癌及癌前病變組織中的表達,進而探討sFRP-2蛋白在宮頸病變發生、發展中的作用。現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 選擇本院病理科2011年10月~2013年1月婦產科行手術切除的子宮頸鱗癌組織蠟塊51例、宮頸上皮內瘤變蠟塊63例(其中Ⅰ級、Ⅱ級28例,Ⅲ級35例),隨機選取30例正常子宮頸組織蠟塊作為對照,正常子宮頸組織均為同期因子宮肌瘤行子宮全切術獲得。所有患者均為女性,年齡23~65歲,平均年齡(41.17±12.08)歲,所有患者術前均未實施放、化療措施,術后經病理明確診斷。

1.2 實驗方法

1.2.1 免疫組織化學技術檢測組織中sFRP-2蛋白表達 兔抗人sFRP-2多克隆抗體購于上海領成生物科技有限公司,二抗鼠抗兔即用型SABC試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。切片脫蠟,水化,PBS洗兩次各5 min,抗原修復,PBS洗5 min。滴加封閉液,甩去多余液體,滴加一抗(sFRP-2:1:200)4℃過夜,37℃復溫,PBS洗三次各2 min,滴加二抗,PBS洗三次各2 min,滴加試劑SABC,PBS洗4次各5 min,DAB顯色,蘇木素復染,鹽酸酒精脫水、封片,陰性對照利用PBS代替一抗。用染色強度聯合陽性細胞百分比進行評分：著色程度：無著色：0分,淡黃色：1分,棕黃色：2分；陽性細胞百分比分級如下：陽性細胞數≤2%記為0分,2%~20%記為1分,21%~50%記為2分,≥50%：記為3分。最后得分為陽性細胞數以及著色程度相加值≥2分為陽性。

1.2.2 統計學方法 采用SPSS 19.0統計軟件進行數據的處理。率的比較用χ2檢驗,檢驗水準取α=0.05。

2 結果

2.1 免疫組化結果 sFRP-2蛋白主要定位于細胞質,細胞質呈現棕黃色顆粒為陽性標志。見圖1。sFRP-2的表達在宮頸上皮內瘤變組織和宮頸鱗癌組織中明顯低于正常宮頸組織,差異有統計學意義(P<0.05)；宮頸上皮內瘤變Ⅲ級組低于低度病變組(Ⅰ級和Ⅱ級),差異有統計學意義(P<0.05),宮頸鱗癌組sFRP-2的表達低于低度病變組,差異有統計學意義(P<0.05)；宮頸鱗癌組sFRP-2的表達低于高度病變組(P<0.05),具體見表1。

圖1 sFRP-2在宮頸鱗癌、宮頸上皮內瘤變組織及正常宮頸組織中的免疫組化染色(A：正常宮頸組織中sFRP-2陽性染色；B：宮頸上皮內瘤變組織中sFRP-2陽性染色；C：宮頸鱗癌組織中sFRP-2陰性染色, SABC法,400X, 標尺 ：100 μm)

2.2 sFRP-2與宮頸鱗癌臨床病理因素的關系 sFRP-2在≥40歲和＜40歲的陽性表達率分別為41.2%、35.3%；在臨床分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期陽性表達率分別為42.3%、40%、20%；在宮頸浸潤深度<1/3、1/3~1/2和>1/2肌層的陽性表達率分別為36.4%、44.4%和40.0%；在淋巴結轉移陰性組和淋巴結轉移陽性組的陽性表達率分別為36.4%、57.1%,差異均無統計學意義(P>0.05)。在組織學分級中高分化和低分化的陽性表達率分別為26.7%、57.2%,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 sFRP-2在各組織中的表達情況［n(%)］

表2 sFRP-2與宮頸鱗癌臨床病理因素的關系［n(%)］

3 討論

通過對既往文獻的回顧,目前已知經典的Wnt信號通路在結腸癌、口腔癌、皮膚癌中均有研究,尤其是對于結腸癌、胃癌的研究報道較多,例如韓向春等［2］報道Wnt-1在胃癌中高表達。但是關于經典Wnt信號通路在婦科腫瘤尤其是宮頸病變中的報道并不多見。研究表明［2,3］一系列腫瘤的發生、發展與該信號通路的激活有密切關系。Wnt信號通路拮抗因子根據作用方式的不同分為兩大類 ,而 sFRP(secreted Frizzled related protein)這一種類型,能夠通過直接結合Wnt蛋白,使得Wnt蛋白與Wnt受體復合物結合的能力發生改變,該類型包括分泌性卷曲蛋白家族(即sFRP 家族 )、WIF-1(Wnt inhibitory factor-1)和Cerberus。趙蘇云等［3］發表于2009年的文章提到在子宮肌瘤細胞中存在Wnt信號通路,而正常子宮肌層中卻并不存在,說明Wnt信號通路與宮頸良性腫瘤：子宮肌瘤的發生密切相關,與Dimitrova 等［4］的實驗結果類似。本研究發現,sFRP-2的表達在宮頸上皮內瘤變組織和宮頸鱗癌組織中明顯低于正常宮頸組織；宮頸上皮內瘤變Ⅲ級組低于低度病變組(Ⅰ級和Ⅱ級)；宮頸鱗癌組sFRP-2的表達低于低度病變組；宮頸鱗癌組sFRP-2的表達低于高度病變組,差異均有統計學意義。并且在宮頸鱗癌組中,sFRP-2的表達與患者的年齡、腫瘤浸潤深度、淋巴結有無轉移、臨床分期均無相關性(P>0.05),而在不同組織分化程度間表達差異有統計學意義,這個結果與王美紅等［5］研究sFRP-1在宮頸癌及正常宮頸組織中的表達結果相同,而在蘇珊［6］的研究中發現宮頸HSIL組與LSIL組中sFRP-1的表達沒有統計學意義,可能是因為本實驗中樣本量較大,或者是不同的統計學方法造成的。大量研究表明［7-9］,sFRP啟動子的甲基化引起的sFRPs的表達沉默是Wnt通路異常導致腫瘤發生的一種可能機制。而一旦啟動子去甲基化那么sFRPsmRNA在腫瘤細胞中再次高表達,可以減弱Wnt信號通路的作用,進而導致瘤細胞的凋亡。

總之,作為目前腫瘤研究的熱點,Wnt信號通路的各種抑制因子在子宮良惡性腫瘤發生、發展中的作用并不明確,相關報道亦不多見。本文檢測了sFRP-2蛋白在宮頸癌及癌前病變組織中的表達,進而探討sFRP-2蛋白在宮頸病變發生、發展中的作用,有利于明確其相關的機制,為將來宮頸癌的靶向治療提供了新的切入點。但是由于受樣本量的限制,本實驗沒有探討sFRP-2蛋白在宮頸腺癌組織中的表達,以及這種表達在分子水平上的研究,未來可以作進一步深入的探討。

［1］吳鳳琴.商洛市21種人乳頭狀瘤病毒感染狀況分析.海南醫學院學報,2012,18(6):842-845.

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［3］趙蘇云,李美蓉.Wnt信號通路在子宮肌瘤中的表達.山西醫藥雜志,2009,38(5):410-411.

［4］Dimitrova IK,Richer JK,Rudolph MC,et al.Gene expression profiling of multiple leiomyomata uteri and matched normal tissue from a single patient.Fertil Steril,2009,91(6):2650-2663.

［5］王美紅 ,李兵 ,張式暖 ,等 .SFRP1和 Wnt-1在宮頸鱗癌中的表達及意義.腫瘤防治研究,2011,38(6):679-681.

［6］蘇姍,闞艷艷,田永杰.sFRP-1、Wnt-1在宮頸癌及癌前病變中的表達及意義 .山東大學學報(醫學版),2010,24(1):97-101.

［7］郭艷麗,郭煒,鄺鋼,等.食管鱗狀細胞癌中SFRP基因家族啟動子區甲基化狀態的檢測.中國病理生理雜志,2011,27(2):278-283.

［8］裴磊,葉麗平.Wnt抑制因子SFRP基因甲基化與白血病的關系.山東醫藥,2011,51(33):109-111.

［9］李永坤.分泌型卷曲相關蛋白基因甲基化與大腸癌的研究進展.腫瘤研究與臨床,2010,22(12):862-864.