DNS法測定植物組織中還原糖及總糖含量實驗的改進

摘 要：針對現有生物化學實驗“DNS法測定植物組織中還原糖及總糖含量”中的一些不足進行改進，包括實驗材料選擇、波長選擇、DNS量、顯色時間、DNS的配制等方面，最后對實驗中一些注意事項進行了詳細分析，以提高該實驗的教學效果。

關鍵詞：DNS法；實驗教學；還原糖；改進

中圖分類號 Q547 文獻標識碼 B 文章編號 1007-7731（2013）11-16-02

3，5-二硝基水楊酸法（DNS法）是在堿性條件下，DNS與還原糖加熱后被還原成橘紅色氨基化合物，然后比色測定糖含量。該法可測定還原糖和總糖含量，并可通過多糖=總糖-還原糖，粗略獲得多糖含量。相比之下，該方法具有操作簡便、快速、靈敏度高、雜質干擾較小等優點[1-9]。

“DNS法測定植物組織中還原糖及總糖含量”實驗涉及了一些基本的生物化學實驗技能，如組織搗碎（或研磨）、離心技術、定容操作、比色測定及標準曲線繪制等。該實驗能有效提高學生的基本操作技能和動手能力，同時能將理論知識與實際應用很好地結合在一起。實驗的學時及難度適中，在生物化學實驗中是一項很好的綜合性實驗。

筆者根據多年來實驗教學經驗總結，現對該實驗相關步驟進行改進，并對實驗中值得注意的地方進行詳細總結，以提高其教學效果。

1 方法改進

1.1 實驗材料選擇 多數生物化學實驗教材中的該實驗對象為淀粉[1-5]。淀粉作為實驗材料的缺點主要有：（1）還原糖含量一般很低（如紅薯淀粉）；（2）不同淀粉的還原糖含量也不一樣；（3）材料本身缺乏可操作性等。本著材料來源容易，還原糖含量高，色素影響小，易提取，能有效提高學生的動手能力和激發實驗興趣，理論與實際應用有效結合等各方面的因素，結合多年來的實驗經驗積累，認為白薯（又名“地瓜”）為最佳實驗材料。

1.2 波長選擇 考慮到DNS顯色液的影響、葡萄糖標準曲線的線性和最大吸收值等相關因素[6，10-11]，多年來本科實驗教學結果證明520nm為最適測定波長。實驗過程中要提醒學生，比色測定時首先要準確調好波長，在測量時就不能再調了，更不能更換分光光度計。

1.3 DNS添加量 DNS的量與待測液中還原糖的含量有關。DNS過多會使其吸光度增大，從而影響標準曲線的線性關系[10]。實驗證明，添加3mL的DNS較適宜，還原糖含量與吸光值之間的線性較好。

1.4 顯色時間的選擇 實驗證明，顯色5min以上，其吸光值已基本趨于穩定[10-11]。考慮到教學實驗過程中，有時水浴溫度未達到或接近沸水浴等因素，故建議顯色時間設定為6～8min。實驗中所有水浴對象的沸水浴時間要保持統一。

1.5 DNS試劑的配制 DNS試劑中酒石酸鉀鈉的作用是防止溶解氧的侵入（DNS與還原糖反應是一種氧化還原反應，隨著氧在待測液中溶解量的增加，顯色液的吸光值呈現明顯的下降趨勢）；苯酚是增加DNS顯色后的顏色深度，以及平衡脲形成時對糖測定的影響；亞硫酸氫鈉與苯酚配合使顯色后顏色更加穩定；堿性環境是DNS與還原糖顯色作用的條件[10]。

配制方法：把DNS加入到氫氧化鈉溶液中，（下轉26頁）（上接16頁）加熱攪拌待其完全溶解后，加入已溶解的酒石酸鉀鈉溶液并混勻，再加入苯酚和亞硫酸氫鈉，貯存于棕色試劑瓶中。

2 注意事項分析

實驗過程中一些細節問題值得注意，如：（1）現在的實驗室條件都普遍提高了，可以考慮選擇組織搗碎機或勻漿機代替手工研磨實驗材料，這樣可以從很大程度上減少實驗誤差；（2）除去提取的糖溶液中雜質可采用4 000r/min，離心5min；（3）比色皿要使用同一廠家生產的且為同一型號的，比色皿的清潔度無疑是實驗誤差的主要因素，比色皿的清洗可以先用小鑷子夾酒精棉球里外擦凈，然后再用蒸餾水里外沖洗3遍。（4）控制好待測液吸光值在標準曲線范圍以內，濃度過高要進行稀釋；（5）比色測定前需自然冷卻至室溫，切勿驟冷而導致溶液渾濁，同時，測定時溶液要混勻；（6）因多糖水解成單糖時，每斷裂1個糖苷鍵需加入1個水分子，故在計算總糖含量時，需將測得的單糖量乘以0.9加以校正；（7）實驗過程中注意DNS的污染。

參考文獻

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（責編：徐世紅）