杜鵑紅山茶離體快繁的研究

摘要：以杜鵑紅山茶（Camellia azalea）的幼嫩莖尖為試材進(jìn)行組織培養(yǎng)研究，建立其快繁體系。結(jié)果表明，杜鵑紅山茶芽誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基為SH +1.0 mg/L ZT +2.0 mg/L 6-BA +1.0 mg/L IAA，其芽萌發(fā)率為64.4%；最適增殖培養(yǎng)基為1.0 mg/L ZT +1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L IAA，增殖系數(shù)高達(dá)2.36；最佳生根培養(yǎng)基為1/2 SH+2.0 mg/L IBA +0.1 mg/L IAA +100 mg/L活性炭，其生根率可達(dá)61.7%。

關(guān)鍵詞：杜鵑紅山茶（Camellia azalea）；莖尖；組織培養(yǎng)

中圖分類號(hào)：S685.14；Q813.1+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）21-5348-03

Studies on in Vitro Rapid Propagation of Camellia azalea

CHEN Ze-xiong，HUANG Deng-yan

（Flower Research Institute， Chongqing University of Arts and Science / Garden and Flower Engineering Research Center

of Chongqing Colleges， Chongqing 402160，China）

Abstract： The shoot tip of Camellia azalea was used as the material to study on tissue culture， and in vitro rapid propagation system was established. The results showed that the optimum medium for shoot tip induction of Camellia azalea was SH +1.0 mg/L ZT + 2.0 mg/L 6-BA +1.0 mg/L IAA， germination rate leing 64.4%. Optimal proliferation medium was 1.0 mg/L ZT +1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L IAA， and the multiplication coefficient was 2.36. The rooting medium was 1/2 SH+ 2.0 mg/L IBA +0.1 mg/L IAA +100 mg/L activated carbon， the rooting rate being 61.7%.

Key words： Camellia azalea； shoot tip； tissue culture

杜鵑紅山茶（Camellia azalea）為山茶科（Theaceae）山茶屬（Camellia），因其外形極像杜鵑而得名，栽培上稱為“四季杜鵑茶”或“杜鵑茶”。杜鵑紅山茶是一個(gè)極其珍稀的山茶品種，有著“植物界大熊貓”之稱。主要分布在云南、廣西、廣東、四川，野生數(shù)量稀少，茶花市場上也很少見，目前處在研究開發(fā)階段，是珍貴的四季開花古茶花品種之一[1]。近年來，廣東、浙江等地通過傳統(tǒng)的嫁接和扦插方法獲得杜鵑紅山茶，但其繁殖速度慢，繁殖率低，滿足不了市場需求[2]。目前，關(guān)于通過組織培養(yǎng)技術(shù)獲得杜鵑紅山茶的快速繁殖技術(shù)鮮見報(bào)道。本試驗(yàn)從繁殖快、成本低和性狀穩(wěn)定等角度出發(fā)，采用組織培養(yǎng)技術(shù)對杜鵑紅山茶進(jìn)行快速繁殖，為市場解決杜鵑紅山茶茶苗供應(yīng)問題提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試杜鵑紅山茶幼嫩莖尖由重慶市南山植物園提供。采樣時(shí)間為2010年4月中旬，試驗(yàn)地點(diǎn)為重慶市天沛農(nóng)業(yè)科技有限公司組培車間。

1.2 方法

1.2.1 外植體的獲得 選取3～5 cm長當(dāng)年生幼嫩杜鵑紅山茶莖尖為外植體，自來水沖洗干凈后剪去葉片，留莖尖2～3 cm。加少許洗衣粉溶解后浸泡剪好的材料5～10 min，除去表面灰塵，然后用流水沖洗干凈[3]，超凈工作臺(tái)紫外燈晾干[4]，放入0.1%升汞中滅菌5～6 min，再用無菌水沖洗4～5次，切掉莖尖基部，使莖尖控制在1 cm左右接種于培養(yǎng)基中。

1.2.2 芽的誘導(dǎo) 將獲得的無菌材料莖尖接種到不同組成的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行芽的誘導(dǎo)。各誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成見表1。接種后放置在培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，前7 d暗培養(yǎng)，然后開雙排燈進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照時(shí)間為10～12 h/d，光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx，控制溫度為（25±2） ℃。每種處理接種30瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，3次重復(fù)。培養(yǎng)30 d后觀察并統(tǒng)計(jì)其生長情況，計(jì)算誘導(dǎo)率和成活率，以篩選出芽誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基。

誘導(dǎo)率=（誘導(dǎo)出的芽數(shù)/接種的外植體數(shù)）×100%

成活率=（成活數(shù)/誘導(dǎo)出的芽數(shù)）×100%[5]

1.2.3 芽的增殖培養(yǎng) 將誘導(dǎo)出來的芽從老組織上切割下來，如果是有幾個(gè)芽的團(tuán)塊將其切成帶有腋芽的莖段，接種到增殖培養(yǎng)基中，各增殖培養(yǎng)基的配比見表2。每處理接種30瓶，每瓶接種1個(gè)芽，3次重復(fù)。30 d后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)算其平均株高、增殖系數(shù)。

平均株高=苗的總高度/苗的總數(shù)

增殖系數(shù)=增殖后的總芽數(shù)/接種的外植體數(shù)

1.2.4 生根培養(yǎng) 從增殖的植株上切取健壯單芽，接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基的配比見表3。每處理接種10瓶，每瓶接種6株，3次重復(fù)；40 d后觀察并統(tǒng)計(jì)其植株生長狀況，計(jì)算生根率，平均根數(shù)。

平均生根數(shù)=生根總數(shù)/接種外植體數(shù)

生根率=（生根的外植體數(shù)/接種外植體數(shù)）×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對杜鵑紅山茶芽誘導(dǎo)的影響

以MS、SH和改良MS為基本培養(yǎng)基，添加相同濃度及相同種類的植物生長調(diào)節(jié)劑，各配方組合見表1。從表1可見，3種不同培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)杜鵑紅山茶莖尖，其中SH培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果最好，誘導(dǎo)率為64.4%，成活率為100%，且誘導(dǎo)出來的芽生長健壯，芽色綠，生長快。MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率最低，為38.9%，且誘導(dǎo)出來的頂芽容易枯死，影響成活率。因此，在杜鵑紅山茶芽誘導(dǎo)過程中，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為SH+1.0 mg/L ZT +2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA。

2.2 植物生長調(diào)節(jié)劑對杜鵑紅山茶芽增殖的影響

以SH為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑ZT、6-BA、IAA對杜鵑紅山茶進(jìn)行增殖培養(yǎng)。從表2可以看出，在培養(yǎng)基中添加植物細(xì)胞分裂素ZT的處理中，分化出來的杜鵑紅山茶芽顏色濃綠，增殖系數(shù)高于不添加ZT的處理，平均株高也明顯高于不添加ZT的處理。生長素IAA的濃度對杜鵑紅山茶增殖苗的平均株高和增殖系數(shù)的影響也很大，隨IAA濃度的升高，平均株高逐漸增高，但增殖系數(shù)卻有所降低。因此，綜合分析可知C8處理中添加1.0 mg/L ZT + 1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L IAA，杜鵑紅山茶的增殖苗長勢最好，平均株高為2.18 cm，增殖系數(shù)最高，為2.36，芽色濃綠，健壯且生長快。

2.3 植物生長調(diào)節(jié)劑對杜鵑紅山茶組培苗生根的影響

在SH、1/2 SH和N6培養(yǎng)基中添加不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑IBA、NAA、IAA和活性炭，對杜鵑紅山茶的頂芽進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)40 d后統(tǒng)計(jì)其生根情況，結(jié)果見表3。從表3可見，12種處理均可誘導(dǎo)杜鵑紅山茶頂芽生根。在添加相同植物生長調(diào)節(jié)劑的條件下比較基本培養(yǎng)基，SH培養(yǎng)基最不理想，生根數(shù)和生根率均較低，最高生根率僅為17.6%，平均生根數(shù)最高僅為0.83條，且植株生長緩慢，植株老化較其他處理快。1/2 SH基本培養(yǎng)基處理最適合杜鵑紅山茶頂芽生根的誘導(dǎo)，其生根率最高達(dá)61.7%，此時(shí)平均生根數(shù)為1.56條，且植株抽高快，葉形葉色都正常，根系較發(fā)達(dá)。

比較植物生長調(diào)節(jié)劑的種類及濃度對杜鵑紅山茶頂芽生根的影響，IBA較NAA更適合，在添加NAA的處理中植株基部容易產(chǎn)生愈傷，而只添加IBA則不會(huì)；各處理中添加少量的IAA有利于杜鵑紅山茶頂芽生根的誘導(dǎo)，其生根率明顯提高。因此，杜鵑紅山茶頂芽生根的最適合培養(yǎng)基為1/2 SH+ 2.0 mg/L IBA +0.1 mg/L IAA +100 mg/L活性炭。

3 小結(jié)與討論

用杜鵑紅山茶莖尖作為外植體進(jìn)行快繁的過程中，誘導(dǎo)和增殖階段都容易褐化。這與外植體中所含的酚類化合物和多酚氧化酶活性有直接關(guān)系[6]。在誘導(dǎo)和增殖的培養(yǎng)基中添加少量活性炭，或采取新生枝條半木質(zhì)化的材料為外植體，能有效地減輕褐化現(xiàn)象[7]。

杜鵑紅山茶在增殖過程中，植株生長情況與使用的植物生長調(diào)節(jié)劑種類有很大的關(guān)系，添加ZT的處理中杜鵑紅山茶明顯比不添加ZT的處理生長健壯。使用適當(dāng)濃度的生長素IAA有利于杜鵑紅山茶的抽高。

杜鵑紅山茶為山茶屬植物，組織培養(yǎng)難度較大，尤其是生根階段，國內(nèi)外報(bào)道大部分仍需要采用濾紙橋液體培養(yǎng)誘導(dǎo)生根，并且對植物生長調(diào)節(jié)劑濃度和種類要求都很高，大部分采用高濃度的NAA誘導(dǎo)山茶屬植物的生根[8]。本試驗(yàn)采用基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加不同生長素進(jìn)行誘導(dǎo)生根的方法，在生根培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)添加NAA的處理植株易老化，并且基部容易愈傷化。本試驗(yàn)結(jié)果表明，杜鵑紅山茶的生根最適配方為1/2 SH+2.0 mg/L IBA+0.1 mg/L IAA+100 mg/L活性炭，生根率為61.7%，平均生根數(shù)為1.56條，且植株抽高快，葉形葉色都正常，根系較發(fā)達(dá)。此外，在本試驗(yàn)條件下，杜鵑紅山茶誘導(dǎo)生根率仍然較低，有待進(jìn)一步研究。

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